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Topoisomerase IIIβ는 쥐에서 처음으로 cDNA가 클로닝되었으며 그 후 사람과 초파리에서도 발견되었다. 사람의 DNA topoisomerase IIIβ(hTOP3β)는 사람의 DNA topoisomer ase IIIα와 아미노산상에서 36% 유사성을 가진다. 하지만 5'-flanking region을 비교해 봤을 때는 상동성이 전혀 없음을 알 수 있다. 즉 단백질의 성질은 비슷하지만 그 유전자의 전사 조절은 전혀 다름을 추측할 수 있다. 본 논문은 사람의 DNA topoisomerase IIIβ 유전자의 전사 조절에 관한 연구내용을 다루고 있다. 이 연구를 위해 hTOP3β 유전자의 전사 조절 부위를 클로닝 하였으며 기존에 알려진 cDNA의 5 쪽 끝으로부터 약 1.7 Kb를 실험에 이용하였다. 그리고 RACE (rapid amplification of 5 cDNA end)를 통해서 전사 시작점을 결정하였다. hTOP3β 유전자의 전사 시작점은 다수로 존재하며 이 중 주시작점이 있음을 밝혔다. hTOP3β promoter부위의 성격을 알기 위해 deletion constructs를 만들어 trasnfection을 수행하였고 이를 통해 enhancer activity를 가지는 23개의 ...

Topoisomerase IIIβ는 쥐에서 처음으로 cDNA가 클로닝되었으며 그 후 사람과 초파리에서도 발견되었다. 사람의 DNA topoisomerase IIIβ(hTOP3β)는 사람의 DNA topoisomer ase IIIα와 아미노산상에서 36% 유사성을 가진다. 하지만 5'-flanking region을 비교해 봤을 때는 상동성이 전혀 없음을 알 수 있다. 즉 단백질의 성질은 비슷하지만 그 유전자의 전사 조절은 전혀 다름을 추측할 수 있다. 본 논문은 사람의 DNA topoisomerase IIIβ 유전자의 전사 조절에 관한 연구내용을 다루고 있다. 이 연구를 위해 hTOP3β 유전자의 전사 조절 부위를 클로닝 하였으며 기존에 알려진 cDNA의 5 쪽 끝으로부터 약 1.7 Kb를 실험에 이용하였다. 그리고 RACE (rapid amplification of 5 cDNA end)를 통해서 전사 시작점을 결정하였다. hTOP3β 유전자의 전사 시작점은 다수로 존재하며 이 중 주시작점이 있음을 밝혔다. hTOP3β promoter부위의 성격을 알기 위해 deletion constructs를 만들어 trasnfection을 수행하였고 이를 통해 enhancer activity를 가지는 23개의 염기를 결정지었다. 또한 이 23개의 염기 중 transcription factor가 DNA에 붙는데 중요한 역할을 하는 core sequence를 밝혔고, EMSA (electrophoretic mobility shift assay)를 통해서 enhancer부위에 1개의 단백질-DNA complex가 존재함을 밝혔다.

Abstract ▼ AI-Helper

DNA topoisomerase IIIβ (hTOP3β) belongs to the type If subfamily of topoismerases, which catalyzes the removal of negative DNA supercoils by transiently cleaving one DNA strand for the passage of another. hTOP3β and Drosophila TOP3β cDNAs were cloned followed by mouse TOP3β cDNA's first cloning. hTO...

DNA topoisomerase IIIβ (hTOP3β) belongs to the type If subfamily of topoismerases, which catalyzes the removal of negative DNA supercoils by transiently cleaving one DNA strand for the passage of another. hTOP3β and Drosophila TOP3β cDNAs were cloned followed by mouse TOP3β cDNA's first cloning. hTOP3β has 36% identical residues to hTOP3α in amino acids. But sequence comparison between hTOP3β and hTOP3α promoter, they have o similarity with each other in the 5'-flanking region. That is, hTOP3β enzyme character is similar to hTOP3α but promoter region reveals no homology. Therefore hTOP3β transcriptional regulation might be very different from hTOP3α. We would like to show the transcriptional control mechanism of hTOP3β gene. For this purpose, we cloned the 5'-flanking region of hTOP3β, and it is about 1.7 Kb spanning from the published 5' cDNA end. The presence of multiple transcriptional initiation sites was suggested by 5' RACE (rapid amplification of the 5' cDNA end) and major transcriptional initiation site was shown to be at a cytosine residue located 135 nucleotides upstream from the AUG translational initiation codon. Sequence data revealed that there is no canonical TATA box near the initiation site, suggesting that hTOP3β gene promoter has overall similarity to promoters a number of housekeeping gene. To examine which is an important regulatory region, we made a series of deletion constructs containing various sizes of the 5'-flanking region of this promoter and which were fused to luciferase reporter gene and then transiently transfected into HeLa cells. Luciferase activity revealed important cis-acting element -140∼-117 region and indicated that the element was postulated enhancer region. In electrophoretic mobility shift assay we showed that one protein-DNA complex was present.

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