최근 암, AIDS 등의 질환에 있어 그 세포표면에 존재하는 당에 구조, 분포 등에 변화가 있다는 보고가 되기 시작하면서 이러한 변화에 근거하여, 특이적으로 당을 인식하는 렉틴에 대한 활발한 연구가 진행되고 있다. 렉틴은 식물, 동물, 세균 등 다양한 재료로부터 분리, 추출되며 특히 식물의 경우 많은 렉틴들이 분리, 추출되어지고 있다. 그러나, 이들 렉틴 중에서 버섯으로부터 분리한 렉틴은 약 20여종 정도로, 다른 물질 유래 렉틴에 비하여 비교적 연구가 적은 편이다. 본 연구에서는 버섯의 일종인 눈꽃동충하초 Paecilomyces japonica로부터 새로운 렉틴의 존재를 확인하고 이를 분리, 정제하였다. 즉, 눈꽃동충하초에 생리식염액을 가하여 단백질 분획을 추출해 내고, fetuin ...
최근 암, AIDS 등의 질환에 있어 그 세포표면에 존재하는 당에 구조, 분포 등에 변화가 있다는 보고가 되기 시작하면서 이러한 변화에 근거하여, 특이적으로 당을 인식하는 렉틴에 대한 활발한 연구가 진행되고 있다. 렉틴은 식물, 동물, 세균 등 다양한 재료로부터 분리, 추출되며 특히 식물의 경우 많은 렉틴들이 분리, 추출되어지고 있다. 그러나, 이들 렉틴 중에서 버섯으로부터 분리한 렉틴은 약 20여종 정도로, 다른 물질 유래 렉틴에 비하여 비교적 연구가 적은 편이다. 본 연구에서는 버섯의 일종인 눈꽃동충하초 Paecilomyces japonica로부터 새로운 렉틴의 존재를 확인하고 이를 분리, 정제하였다. 즉, 눈꽃동충하초에 생리식염액을 가하여 단백질 분획을 추출해 내고, fetuin affinity chromatography를 통하여 정제하였으며, 이 분획을 Paecilomyces japonica agglutinin(PJA)이라 명명하였다. PJA는 사람 ABO형 적혈구와, mouse, rat, rabbit 적혈구에 대하여 hemagglutination activity를 나타내었으며, 이 응집반응은 fetuin, asialofetuin, bovine submaxillary mucin, thyroglobulin에 의해 저해되는 것으로 나타났다. 이 사실을 통해 분리된 렉틴은 시알산을 포함하는 올리고당에 결합 특이성을 보이는 것을 확인하였으며, asialofetuin과도 특이적으로 결합하는 것으로 보아 N-말단에 galactose를 함유한 올리고당 또는 O-말단에 결합되어있는 올리고당에도 결합특이성을 보일 가능성을 확인하였다. 당단백질인 PJA의 당분포 확인을 위하여 ELLA법을 실시한 결과, 다량의 N-acetylneuraminic acid와 mannose를 포함하며 N-acetyl-D-glucosamine 등을 일부 함유하고 있는 N-linked oligosaccharide일 가능성이 높은 것으로 확인되었다. 여러 암세포에 대해 독성을 실험한 결과, PJA는 유방암, 췌장암, 위암세포에 독성을 나타내었으며, 특히 유방암세포에 대한 독성은 비교적 유의성이 큰 것으로 나타났다.
최근 암, AIDS 등의 질환에 있어 그 세포표면에 존재하는 당에 구조, 분포 등에 변화가 있다는 보고가 되기 시작하면서 이러한 변화에 근거하여, 특이적으로 당을 인식하는 렉틴에 대한 활발한 연구가 진행되고 있다. 렉틴은 식물, 동물, 세균 등 다양한 재료로부터 분리, 추출되며 특히 식물의 경우 많은 렉틴들이 분리, 추출되어지고 있다. 그러나, 이들 렉틴 중에서 버섯으로부터 분리한 렉틴은 약 20여종 정도로, 다른 물질 유래 렉틴에 비하여 비교적 연구가 적은 편이다. 본 연구에서는 버섯의 일종인 눈꽃동충하초 Paecilomyces japonica로부터 새로운 렉틴의 존재를 확인하고 이를 분리, 정제하였다. 즉, 눈꽃동충하초에 생리식염액을 가하여 단백질 분획을 추출해 내고, fetuin affinity chromatography를 통하여 정제하였으며, 이 분획을 Paecilomyces japonica agglutinin(PJA)이라 명명하였다. PJA는 사람 ABO형 적혈구와, mouse, rat, rabbit 적혈구에 대하여 hemagglutination activity를 나타내었으며, 이 응집반응은 fetuin, asialofetuin, bovine submaxillary mucin, thyroglobulin에 의해 저해되는 것으로 나타났다. 이 사실을 통해 분리된 렉틴은 시알산을 포함하는 올리고당에 결합 특이성을 보이는 것을 확인하였으며, asialofetuin과도 특이적으로 결합하는 것으로 보아 N-말단에 galactose를 함유한 올리고당 또는 O-말단에 결합되어있는 올리고당에도 결합특이성을 보일 가능성을 확인하였다. 당단백질인 PJA의 당분포 확인을 위하여 ELLA법을 실시한 결과, 다량의 N-acetylneuraminic acid와 mannose를 포함하며 N-acetyl-D-glucosamine 등을 일부 함유하고 있는 N-linked oligosaccharide일 가능성이 높은 것으로 확인되었다. 여러 암세포에 대해 독성을 실험한 결과, PJA는 유방암, 췌장암, 위암세포에 독성을 나타내었으며, 특히 유방암세포에 대한 독성은 비교적 유의성이 큰 것으로 나타났다.
It has been reported that the structure of carbohydrates or portions of glycoprotein on the cell surface in cancer-related cells is different from that in normal cells. Lectin, the carbohydrate-binding protein, is an excellent tool for the detection of such differences. Lectin has been isolated from...
It has been reported that the structure of carbohydrates or portions of glycoprotein on the cell surface in cancer-related cells is different from that in normal cells. Lectin, the carbohydrate-binding protein, is an excellent tool for the detection of such differences. Lectin has been isolated from variable sources such as plants, animals, invertebrate, fungi, and bacteria, however only a few lectins were reported from mushrooms. In the present study, a novel lectin from Paecilomyces japonica have been isolated and characterized. The crude protein from Paecilomyces japonica was extracted with saline, and the lectin was successfully purified using fetuin-affinity chromatography. The lectin has the hemagglutination activity for human ABO type erythrocyte, mouse, rat and rabbit erythrocytes. Thus it was designated as Paecilomyces japonica agglutinin (PJA). This hemagglutination was inhibited by fetuin, asialofetuin, thyroglobulin, and bovine submaxillary mucin. As a result, we confirmed that PJA specifically bound to oligosaccharide containing sialic acid. PJA is a glycoprotein consist of the hybrid-type oligosaccharide containing N-acetylneuraminic acid, mannose and relatively few N-acetyl-D-glucosamine by enzyme linked lectinsorbent assay. From the cytotoxicity test of variable cancer cell lines, we confirmed that PJA exerted cytotoxic effect on the cancer cell line such as MDA-MB-231 breast cancer, AsPC1 pancreas cancer and SNU-1 stomach caner cells, especially cytotoxicity for breast cancer is significantly estimated.
It has been reported that the structure of carbohydrates or portions of glycoprotein on the cell surface in cancer-related cells is different from that in normal cells. Lectin, the carbohydrate-binding protein, is an excellent tool for the detection of such differences. Lectin has been isolated from variable sources such as plants, animals, invertebrate, fungi, and bacteria, however only a few lectins were reported from mushrooms. In the present study, a novel lectin from Paecilomyces japonica have been isolated and characterized. The crude protein from Paecilomyces japonica was extracted with saline, and the lectin was successfully purified using fetuin-affinity chromatography. The lectin has the hemagglutination activity for human ABO type erythrocyte, mouse, rat and rabbit erythrocytes. Thus it was designated as Paecilomyces japonica agglutinin (PJA). This hemagglutination was inhibited by fetuin, asialofetuin, thyroglobulin, and bovine submaxillary mucin. As a result, we confirmed that PJA specifically bound to oligosaccharide containing sialic acid. PJA is a glycoprotein consist of the hybrid-type oligosaccharide containing N-acetylneuraminic acid, mannose and relatively few N-acetyl-D-glucosamine by enzyme linked lectinsorbent assay. From the cytotoxicity test of variable cancer cell lines, we confirmed that PJA exerted cytotoxic effect on the cancer cell line such as MDA-MB-231 breast cancer, AsPC1 pancreas cancer and SNU-1 stomach caner cells, especially cytotoxicity for breast cancer is significantly estimated.
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