점안제에 광범위하게 사용 되는 보존제(preservatives)의 세포 독성 및 항균 활성 및 항진균 활성을 검정하였다. 세포 독성은 L929 cell을 사용하였으며, 항균·항진균 활성 검정에 사용된 균주는 눈의 정상 세균총의 일종이거나 각막염을 일으키는 세균인 Pseudomonas aeruginosa ATCC27853, Stafphylococcus aureus ATCC25923, ...
점안제에 광범위하게 사용 되는 보존제(preservatives)의 세포 독성 및 항균 활성 및 항진균 활성을 검정하였다. 세포 독성은 L929 cell을 사용하였으며, 항균·항진균 활성 검정에 사용된 균주는 눈의 정상 세균총의 일종이거나 각막염을 일으키는 세균인 Pseudomonas aeruginosa ATCC27853, Stafphylococcus aureus ATCC25923, Escherichia coli ATCC25922 등 3가지이고, 진균은 Trichoderma reesei ATCC6967을 사용하였다. 사용된 시약은 합성보존제인 benzalkonium chloride(BAC)와 천연보존제인 키토산이며, 키토산의 분자량은 각각 60,000(dalton, #1)과 2,500(dalton, #2)이었으며 탈아세틸화도는 90%, 95%, 점도는 4cps와 2cps였다. L929세포에 대한 24hr, 48hr, 72hr에 각각의 농도에 따른 세포 독성 검정 결과 세포의 30% 이상의 성장 저해를 일으키는 농도인 LD_(30)은 BAC의 경우 0.001-0.005%였고, #1 키토산(M_w 60,000)의 경우는 0.55-0.6%였으며, #2 키토산(M_w 2,500)은 1-2%였다. 각각의 균에 대한 BAC의 항균·항진균 활성을 나타내는 최소 저해 농도는 P. aeruginosa에는 0.01-0.1%였고, S. aureus에는 0.0001-0.001%였으며 E. coli에는 0.0001-0.001%, T. reesei에는 0.01-0.1%였다. #1 키토산(M_w 60,000)은 P. aeruginosa의 경우 2%, S. aureus가 1%, E. coli가 1%에서 48hr 동안 정균 작용을 나타내었으며, #2 키토산(M_w 2,500)은 P. aeruginosa의 경우 1%, S. aureus가 0.5%, E. coli가 0.3%에서 48hr 동안 정균 작용을 나타내었다. 그러나 두 키토산 모두 진균에 대해서는 농도 의존적으로 생육을 촉진시켰다. Benzalkonium chloride(BAC)에 의해 세포 손상을 입은 L929 cell에 대해 키토산의 세포 부활 효과와 완충 효과를 연구한 결과는 동일 조건에서 BAC를 먼저 처리한 1시간 후 키토산을 처리한 경우, 키토산을 먼저 처리한 1시간 후 BAC를 처리한 경우와 동시 처리한 경우로 나누어 비교했을 때, 동시에 처리할 경우가 세포활성이 가장 높게 나타났다. 키토산을 BAC대신 보존제로 사용할 경우 항균 활성은 비교적 낮으나 세포 독성이 BAC보다 낮은 결과를 보여 주었으며, 키토산을 BAC와 동시에 사용할 경우에는 항균 활성과 더불어 세포 독성을 낮춰주는 효과 및 완충 효과, 약물 서방출 효과 등 여러 약리 효과가 있으므로 점안제로 사용이 가능하다.
점안제에 광범위하게 사용 되는 보존제(preservatives)의 세포 독성 및 항균 활성 및 항진균 활성을 검정하였다. 세포 독성은 L929 cell을 사용하였으며, 항균·항진균 활성 검정에 사용된 균주는 눈의 정상 세균총의 일종이거나 각막염을 일으키는 세균인 Pseudomonas aeruginosa ATCC27853, Stafphylococcus aureus ATCC25923, Escherichia coli ATCC25922 등 3가지이고, 진균은 Trichoderma reesei ATCC6967을 사용하였다. 사용된 시약은 합성보존제인 benzalkonium chloride(BAC)와 천연보존제인 키토산이며, 키토산의 분자량은 각각 60,000(dalton, #1)과 2,500(dalton, #2)이었으며 탈아세틸화도는 90%, 95%, 점도는 4cps와 2cps였다. L929세포에 대한 24hr, 48hr, 72hr에 각각의 농도에 따른 세포 독성 검정 결과 세포의 30% 이상의 성장 저해를 일으키는 농도인 LD_(30)은 BAC의 경우 0.001-0.005%였고, #1 키토산(M_w 60,000)의 경우는 0.55-0.6%였으며, #2 키토산(M_w 2,500)은 1-2%였다. 각각의 균에 대한 BAC의 항균·항진균 활성을 나타내는 최소 저해 농도는 P. aeruginosa에는 0.01-0.1%였고, S. aureus에는 0.0001-0.001%였으며 E. coli에는 0.0001-0.001%, T. reesei에는 0.01-0.1%였다. #1 키토산(M_w 60,000)은 P. aeruginosa의 경우 2%, S. aureus가 1%, E. coli가 1%에서 48hr 동안 정균 작용을 나타내었으며, #2 키토산(M_w 2,500)은 P. aeruginosa의 경우 1%, S. aureus가 0.5%, E. coli가 0.3%에서 48hr 동안 정균 작용을 나타내었다. 그러나 두 키토산 모두 진균에 대해서는 농도 의존적으로 생육을 촉진시켰다. Benzalkonium chloride(BAC)에 의해 세포 손상을 입은 L929 cell에 대해 키토산의 세포 부활 효과와 완충 효과를 연구한 결과는 동일 조건에서 BAC를 먼저 처리한 1시간 후 키토산을 처리한 경우, 키토산을 먼저 처리한 1시간 후 BAC를 처리한 경우와 동시 처리한 경우로 나누어 비교했을 때, 동시에 처리할 경우가 세포활성이 가장 높게 나타났다. 키토산을 BAC대신 보존제로 사용할 경우 항균 활성은 비교적 낮으나 세포 독성이 BAC보다 낮은 결과를 보여 주었으며, 키토산을 BAC와 동시에 사용할 경우에는 항균 활성과 더불어 세포 독성을 낮춰주는 효과 및 완충 효과, 약물 서방출 효과 등 여러 약리 효과가 있으므로 점안제로 사용이 가능하다.
This study was performed to examine the cytotoxicity and antimicrobial activity of synthetic or natural preservative. Fibroblast cells L929 were used for cytotoxicity test and Pseudomonas aeruginosa ATCC27853, Staphylococcus aureus ATCC25923, Escherichia coli ATCC25922, Tri choderma reesei ATCC6967 ...
This study was performed to examine the cytotoxicity and antimicrobial activity of synthetic or natural preservative. Fibroblast cells L929 were used for cytotoxicity test and Pseudomonas aeruginosa ATCC27853, Staphylococcus aureus ATCC25923, Escherichia coli ATCC25922, Tri choderma reesei ATCC6967 were used for antibacterial and antifungal activities. Benzalkonium chloride(BAC) as a synthetic preservative and chitosan as a natural preservative were used for this study. Minimum inhibitory concentration(MIC) of BAC was 0.1∼0.01% for P. aeruginosa and 0.001∼0.0001% for S. aureus and 0.1∼0.01% for T. reesei. MIC of chitosan was 2% for P. aeruginosa and 1% for S. aureus for 1%. MIC of #1 chitosan(M_w 60,000 dalton) was 2% for P. aeruginosa, 1% for S. aureus and 1% for E. coli. MIC of #2 chitosan(M_w 2,500 dalton) was 1% for P. aeruginosa, 0.5% for S. aureus and 0.3% for E. coli. To investigate cell damage for BAC and cell reviable effect for chitosan, L929 cells were cultured and treated with drug. The cytotoxicity was measured by MTT assay. Among tested conditions, simultaneous treatment with BAC and chitosan was highest in cell reviable effect. This result suggest that chitosan is useful for eye drop.
This study was performed to examine the cytotoxicity and antimicrobial activity of synthetic or natural preservative. Fibroblast cells L929 were used for cytotoxicity test and Pseudomonas aeruginosa ATCC27853, Staphylococcus aureus ATCC25923, Escherichia coli ATCC25922, Tri choderma reesei ATCC6967 were used for antibacterial and antifungal activities. Benzalkonium chloride(BAC) as a synthetic preservative and chitosan as a natural preservative were used for this study. Minimum inhibitory concentration(MIC) of BAC was 0.1∼0.01% for P. aeruginosa and 0.001∼0.0001% for S. aureus and 0.1∼0.01% for T. reesei. MIC of chitosan was 2% for P. aeruginosa and 1% for S. aureus for 1%. MIC of #1 chitosan(M_w 60,000 dalton) was 2% for P. aeruginosa, 1% for S. aureus and 1% for E. coli. MIC of #2 chitosan(M_w 2,500 dalton) was 1% for P. aeruginosa, 0.5% for S. aureus and 0.3% for E. coli. To investigate cell damage for BAC and cell reviable effect for chitosan, L929 cells were cultured and treated with drug. The cytotoxicity was measured by MTT assay. Among tested conditions, simultaneous treatment with BAC and chitosan was highest in cell reviable effect. This result suggest that chitosan is useful for eye drop.
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