국문초록 상추의 형질전환 효율증진에 관한 연구 公州大學校 大學院 園藝學科 尹吉珠 본 실험은 상추 재분화에 관한 조건 확립과 형질전환체 획들을 위하여 수행 되었으며, 그 결과는 다음과 같다. shoot 형성을 유도하기 위하여 상추 두 품종(청치마, 축면상추)의 자엽절편체 를 생장조절제 α-naphthaleneacetic acid(NAA)와 kinetin을 조합 처리한 MS 배지에 치상하여 shoot 형성률을 조사 한 결과 청치마와 축면상추 모두 NAA 0.2mg·L-1, kinetin 0.5mg·L-1 처리구에서 각각 76.6, 70%로 shoot 형성률이 가장 높았으며, 청치마의 shoot 형성률이 축면상추보다 다소 높은 경향 나타내었다. 형질전환체 선발을 위한 항생제 조건을 확립하기 위하여 kanamycin과 pho-sphinothricin(...
국문초록 상추의 형질전환 효율증진에 관한 연구 公州大學校 大學院 園藝學科 尹吉珠 본 실험은 상추 재분화에 관한 조건 확립과 형질전환체 획들을 위하여 수행 되었으며, 그 결과는 다음과 같다. shoot 형성을 유도하기 위하여 상추 두 품종(청치마, 축면상추)의 자엽절편체 를 생장조절제 α-naphthaleneacetic acid(NAA)와 kinetin을 조합 처리한 MS 배지에 치상하여 shoot 형성률을 조사 한 결과 청치마와 축면상추 모두 NAA 0.2mg·L-1, kinetin 0.5mg·L-1 처리구에서 각각 76.6, 70%로 shoot 형성률이 가장 높았으며, 청치마의 shoot 형성률이 축면상추보다 다소 높은 경향 나타내었다. 형질전환체 선발을 위한 항생제 조건을 확립하기 위하여 kanamycin과 pho-sphinothricin(PPT) 를 처리한 결과 청치마와 축면상추 모두 Kanamycin 50mg ·L-1 에서 선발되었고, PPT는 0.3mg·L-1 에서 선발되었다. 또한 항산화제 조건을 위한 처리구에서는 cystein 처리구에서 청치마와 축면 상추 두 품종 모두 cystein 10mg·L-1에서 90, 86.6%로 cystein 무처리구 보 다 높은 shoot 형성률을 나타내었으며, ascorbic acid 처리구에서도 두 품종 모두 ascorbic acid 10mg· L-1에서 86.6, 80 %로 무처리구 보다 높은 shoot 형성률을 나타내었으며, 항산화제 처리구에서도 청치마의 shoot 형성률이 축 면상추 보다 다소 높았다. Agrobacterium tumefaciens에 bar (제초제 저항성 유전자)를 삽입하여 상추 자엽과 callus를 Co-cultivation을 통하여 형질전환 시키고 재분화 하였다. 상추 자엽절편체와 callus를 Agrobacterium과 공동배양 후 MS 기본배지에 NAA 0.2mg·L-1, Kinetin 0.5mg·L-1, carbenicillin 500mg·L-1 를 첨가한 후 cys- tein 10mg·L-1 와 ascorbic acid 10mg·L-1 를 각각 처리한 선발배지에 치상 한 후 shoot가 형성되면 kanamycin 50mg·L-1 과 PPT과 0.3mg· L-1 로 각 각 처리한 선발배지로 옮겨주어 살아남은 선발체들은 발근을 유도하였다. 선발하여 발근을 유도한 shoot들은 pot에서 순화시킨 후 형질전환 도입 유전자 확인을 위하여 strip 검정, PCR 반응, 생물검정을 수행하였다. bar strip검정 결과 control로 쓰인 정상 상추 식물체에서는 한 줄의 밴드가 선발된 형질전환 상추 식물체에서는 두 줄의 밴드가 나타남으로써 bar 유전자 도입을 확인할 수 있었다. 또한 PCR 반응에서는 NPT primer와 bar primer등 두 개의 primer를 가지고 수행하여 청치마 5개체, 축면상추 3개체 중 청치마 3개체, 축면상추 1개체에서형질전환 도입유전자를 확인 할 수 있었다. 생물검정에서도 제초제 Basta를 0.3% 살포한 결과 strip검정과 PCR 반응에서 확인된 형질전환체 작물은 Basta에 저항성을 나타내었다. 실험결과 antioxidant를 처리 하였을때의 형질전환 효율이 ascorbic acid 처리 시 0.4%, cystein 처리시 0.5, 0.8%로 처리하지 않은 처리구 보다 높았으며, cystein 처리가 ascorbic acid 처리보다 높은 효율을 나타내었으며, 축면상추 보다 청치마에서 효율이 높았다.
국문초록 상추의 형질전환 효율증진에 관한 연구 公州大學校 大學院 園藝學科 尹吉珠 본 실험은 상추 재분화에 관한 조건 확립과 형질전환체 획들을 위하여 수행 되었으며, 그 결과는 다음과 같다. shoot 형성을 유도하기 위하여 상추 두 품종(청치마, 축면상추)의 자엽절편체 를 생장조절제 α-naphthaleneacetic acid(NAA)와 kinetin을 조합 처리한 MS 배지에 치상하여 shoot 형성률을 조사 한 결과 청치마와 축면상추 모두 NAA 0.2mg·L-1, kinetin 0.5mg·L-1 처리구에서 각각 76.6, 70%로 shoot 형성률이 가장 높았으며, 청치마의 shoot 형성률이 축면상추보다 다소 높은 경향 나타내었다. 형질전환체 선발을 위한 항생제 조건을 확립하기 위하여 kanamycin과 pho-sphinothricin(PPT) 를 처리한 결과 청치마와 축면상추 모두 Kanamycin 50mg ·L-1 에서 선발되었고, PPT는 0.3mg·L-1 에서 선발되었다. 또한 항산화제 조건을 위한 처리구에서는 cystein 처리구에서 청치마와 축면 상추 두 품종 모두 cystein 10mg·L-1에서 90, 86.6%로 cystein 무처리구 보 다 높은 shoot 형성률을 나타내었으며, ascorbic acid 처리구에서도 두 품종 모두 ascorbic acid 10mg· L-1에서 86.6, 80 %로 무처리구 보다 높은 shoot 형성률을 나타내었으며, 항산화제 처리구에서도 청치마의 shoot 형성률이 축 면상추 보다 다소 높았다. Agrobacterium tumefaciens에 bar (제초제 저항성 유전자)를 삽입하여 상추 자엽과 callus를 Co-cultivation을 통하여 형질전환 시키고 재분화 하였다. 상추 자엽절편체와 callus를 Agrobacterium과 공동배양 후 MS 기본배지에 NAA 0.2mg·L-1, Kinetin 0.5mg·L-1, carbenicillin 500mg·L-1 를 첨가한 후 cys- tein 10mg·L-1 와 ascorbic acid 10mg·L-1 를 각각 처리한 선발배지에 치상 한 후 shoot가 형성되면 kanamycin 50mg·L-1 과 PPT과 0.3mg· L-1 로 각 각 처리한 선발배지로 옮겨주어 살아남은 선발체들은 발근을 유도하였다. 선발하여 발근을 유도한 shoot들은 pot에서 순화시킨 후 형질전환 도입 유전자 확인을 위하여 strip 검정, PCR 반응, 생물검정을 수행하였다. bar strip검정 결과 control로 쓰인 정상 상추 식물체에서는 한 줄의 밴드가 선발된 형질전환 상추 식물체에서는 두 줄의 밴드가 나타남으로써 bar 유전자 도입을 확인할 수 있었다. 또한 PCR 반응에서는 NPT primer와 bar primer등 두 개의 primer를 가지고 수행하여 청치마 5개체, 축면상추 3개체 중 청치마 3개체, 축면상추 1개체에서형질전환 도입유전자를 확인 할 수 있었다. 생물검정에서도 제초제 Basta를 0.3% 살포한 결과 strip검정과 PCR 반응에서 확인된 형질전환체 작물은 Basta에 저항성을 나타내었다. 실험결과 antioxidant를 처리 하였을때의 형질전환 효율이 ascorbic acid 처리 시 0.4%, cystein 처리시 0.5, 0.8%로 처리하지 않은 처리구 보다 높았으며, cystein 처리가 ascorbic acid 처리보다 높은 효율을 나타내었으며, 축면상추 보다 청치마에서 효율이 높았다.
ABSTRACT Studies on increase of transformation efficiency in lettuce (Lactuca sativa L.) treated by antioxidant Kil-Ju, Yun Department of Horticulture Graduate School, Kong Ju National University Kong Ju. Korea (Supervised by Professor Soo-Cheon, Chae) This experiment was carried out to establish an...
ABSTRACT Studies on increase of transformation efficiency in lettuce (Lactuca sativa L.) treated by antioxidant Kil-Ju, Yun Department of Horticulture Graduate School, Kong Ju National University Kong Ju. Korea (Supervised by Professor Soo-Cheon, Chae) This experiment was carried out to establish an effective system of rege- neration and to acquire transformation in lettuce (Lactuca sativa L.). This results are summarized as follow; In the effect of plant growth regulator, the optimum α-naphthaleneacetic (NAA) and kinetin concentration for the induction of shoots was 0.2mg·L-1, 0.5mg·L-1 for Cheongchima and Chukmyon. In medium containing NAA 0.2mg·L-1, kinetin 0.5mg·L-1 in Cheongchima showed high shoot formation rate as 76.6% and Chukmyon showed high shoot formation rate as 70%. The sufficient concentration of phosphinothricin(PPT) and kanamycin in selection of transformation were 0.3mg·L-1, 50mg·L-1 for Cheongchima and Chukmyon. In the effect of antioxidant by selection of transformation, the optimum cystein and ascorbic acid concentration for the induction of shoot were cystein 10mg·L-1 and ascorbic acid 10mg·L-1 for Cheongchima and Chukmyon. In medium containing cystein 10mg·L-1 in Cheongchima showed high shoot formation rate as 90% and Chukmyon showed high shoot formation rate as 86.6%. Also in medium containing ascorbic acid 10mg·L-1 in Cheongchima showed high shoot formation rate as 86.6% and Chukmyon showed high shoot formation rate as 80%. Selected transformants were confirmed by GUS assay . Also selected transformants were confirmed by bar strip assay and amplification of selectable maker gene (bar and NPT Ⅱ) by polymerase chain reaction (PCR). A thesis submitted to the committee of Graduate School, Kong Ju National University in partial fulfillment of the requirements for the degree of Master of Agriculture Conferred in February 2003.
ABSTRACT Studies on increase of transformation efficiency in lettuce (Lactuca sativa L.) treated by antioxidant Kil-Ju, Yun Department of Horticulture Graduate School, Kong Ju National University Kong Ju. Korea (Supervised by Professor Soo-Cheon, Chae) This experiment was carried out to establish an effective system of rege- neration and to acquire transformation in lettuce (Lactuca sativa L.). This results are summarized as follow; In the effect of plant growth regulator, the optimum α-naphthaleneacetic (NAA) and kinetin concentration for the induction of shoots was 0.2mg·L-1, 0.5mg·L-1 for Cheongchima and Chukmyon. In medium containing NAA 0.2mg·L-1, kinetin 0.5mg·L-1 in Cheongchima showed high shoot formation rate as 76.6% and Chukmyon showed high shoot formation rate as 70%. The sufficient concentration of phosphinothricin(PPT) and kanamycin in selection of transformation were 0.3mg·L-1, 50mg·L-1 for Cheongchima and Chukmyon. In the effect of antioxidant by selection of transformation, the optimum cystein and ascorbic acid concentration for the induction of shoot were cystein 10mg·L-1 and ascorbic acid 10mg·L-1 for Cheongchima and Chukmyon. In medium containing cystein 10mg·L-1 in Cheongchima showed high shoot formation rate as 90% and Chukmyon showed high shoot formation rate as 86.6%. Also in medium containing ascorbic acid 10mg·L-1 in Cheongchima showed high shoot formation rate as 86.6% and Chukmyon showed high shoot formation rate as 80%. Selected transformants were confirmed by GUS assay . Also selected transformants were confirmed by bar strip assay and amplification of selectable maker gene (bar and NPT Ⅱ) by polymerase chain reaction (PCR). A thesis submitted to the committee of Graduate School, Kong Ju National University in partial fulfillment of the requirements for the degree of Master of Agriculture Conferred in February 2003.
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