기존에 본 연구실에서는 토끼 prothrombin fragment-2(kringle-2 domain)가 소 혈관 내피세포의 성장을 억제한다고 보고하였다. 따라서, 사람 prothrombin fragments도 소 혈관 내피세포의 성장 억제 활성을 나타내는지를 확인하고자 본 실험을 수행하였다. 먼저, 본 연구에서는 토끼 prothrombin 정제 방법을 참고하여 사람 plasma로부터 prothrombin을 QMA column과 barium citrate에 의한 prothrombin 침전법, Blue-sephadex를 이용해서 정제하였다. 정제된 prothrombin은 Factor Xa를 처리한 후, FPLC-mono Q column을 이용하여 fragment-1 (Gla+kringle-1), fragment-2 (kringle-2), thrombin으로 각각 정제하였다. 정제된 prothrombin fragment-1과 -2의 경우, ...
기존에 본 연구실에서는 토끼 prothrombin fragment-2(kringle-2 domain)가 소 혈관 내피세포의 성장을 억제한다고 보고하였다. 따라서, 사람 prothrombin fragments도 소 혈관 내피세포의 성장 억제 활성을 나타내는지를 확인하고자 본 실험을 수행하였다. 먼저, 본 연구에서는 토끼 prothrombin 정제 방법을 참고하여 사람 plasma로부터 prothrombin을 QMA column과 barium citrate에 의한 prothrombin 침전법, Blue-sephadex를 이용해서 정제하였다. 정제된 prothrombin은 Factor Xa를 처리한 후, FPLC-mono Q column을 이용하여 fragment-1 (Gla+kringle-1), fragment-2 (kringle-2), thrombin으로 각각 정제하였다. 정제된 prothrombin fragment-1과 -2의 경우, SDS-PAGE 상으로는 자체 분자량(fragment 1은 17 kDa, fragment 2는 13 kDa)보다 2 배정도 높은 30 kDa와 19 kDa에서 나타났다. 이러한 현상은 매우 비정상적인 경우로 토끼 prothrombin kringle-2나 angiostatin의 kringle-1에서도 같은 현상이 나타난다. 또한, 정제된 사람 prothrombin fragment-1과 -2사이의 면역학적 관계를 확인하기 위해서 본 실험실에서 생산한 anti-prothrombin kringle 2 antibody를 포함하는 혈청을 이용하여 western blotting을 수행하였다. 그 결과는 prothrombin과 fragment-2에서만 발색됨을 알 수 있었고 kringle domain을 가진 fragment-1과 -2 간의 면역학적 차이점을 나타내고 있다. 혈관생성 억제 실험으로는 사람 plasma로부터 정제된 사람 prothrombin fragments를 이용하여 소 내피세포의 성장 억제 효과에 관한 실험을 수행하여 각각의 활성을 비교하였다. 사람 prothrombin과 thrombin에서는 거의 활성이 나타나지 않았으며 kringle 구조를 가진 prothrombin fragment-1과 -2에서만 활성이 나타났다. Fragment-1과 -2의 half maximal inhibition(ED50) 값은 각각 100 nM과 120 nM로 토끼 prothrombin fragme
기존에 본 연구실에서는 토끼 prothrombin fragment-2(kringle-2 domain)가 소 혈관 내피세포의 성장을 억제한다고 보고하였다. 따라서, 사람 prothrombin fragments도 소 혈관 내피세포의 성장 억제 활성을 나타내는지를 확인하고자 본 실험을 수행하였다. 먼저, 본 연구에서는 토끼 prothrombin 정제 방법을 참고하여 사람 plasma로부터 prothrombin을 QMA column과 barium citrate에 의한 prothrombin 침전법, Blue-sephadex를 이용해서 정제하였다. 정제된 prothrombin은 Factor Xa를 처리한 후, FPLC-mono Q column을 이용하여 fragment-1 (Gla+kringle-1), fragment-2 (kringle-2), thrombin으로 각각 정제하였다. 정제된 prothrombin fragment-1과 -2의 경우, SDS-PAGE 상으로는 자체 분자량(fragment 1은 17 kDa, fragment 2는 13 kDa)보다 2 배정도 높은 30 kDa와 19 kDa에서 나타났다. 이러한 현상은 매우 비정상적인 경우로 토끼 prothrombin kringle-2나 angiostatin의 kringle-1에서도 같은 현상이 나타난다. 또한, 정제된 사람 prothrombin fragment-1과 -2사이의 면역학적 관계를 확인하기 위해서 본 실험실에서 생산한 anti-prothrombin kringle 2 antibody를 포함하는 혈청을 이용하여 western blotting을 수행하였다. 그 결과는 prothrombin과 fragment-2에서만 발색됨을 알 수 있었고 kringle domain을 가진 fragment-1과 -2 간의 면역학적 차이점을 나타내고 있다. 혈관생성 억제 실험으로는 사람 plasma로부터 정제된 사람 prothrombin fragments를 이용하여 소 내피세포의 성장 억제 효과에 관한 실험을 수행하여 각각의 활성을 비교하였다. 사람 prothrombin과 thrombin에서는 거의 활성이 나타나지 않았으며 kringle 구조를 가진 prothrombin fragment-1과 -2에서만 활성이 나타났다. Fragment-1과 -2의 half maximal inhibition(ED50) 값은 각각 100 nM과 120 nM로 토끼 prothrombin fragme
Previously, the anti-endothelial cell proliferative effect of rabbit prothrombin fragment 2 (kringle 2 domain) was reported(Lee et al., 1998). Therefore, I planned to show anti-angiogenic activity in the in vitro anti-endothelial cell proliferative activity and in vivo CAM assay. In this paper, huma...
Previously, the anti-endothelial cell proliferative effect of rabbit prothrombin fragment 2 (kringle 2 domain) was reported(Lee et al., 1998). Therefore, I planned to show anti-angiogenic activity in the in vitro anti-endothelial cell proliferative activity and in vivo CAM assay. In this paper, human prothrombin was purified from human plasma by barium citrate precipitation, followed by chromatographies on QMA Acell and Blue-Sephadex. Prothrombin is composed of a Gla domain (residues 1 to 44), two contiguous kringle domains (residues 45 to 155 and residues 156 to 273) and a serine protease catalytic domain in the carboxyl-terminal region (residues 274 to 581). The purified prothrombin was incubated with factor Xa at 23℃ overnight. Prothrombin fragments were purified to electrophoretic homogeneity using FPLC-mono Q column. Purified prothrombin fragment 1 and 2 migrated with a higher molecular mass of 30 kDa and 19 kDa on SDS-PAGE, compared with their molecular masses calculated from their amino acid sequences (17 kDa and 13 kDa). This phenomenon is common to several anti-endothelial cell proliferation molecules that include kringle domain, such as rabbit prothrombin kringle 2 and human angiostatin kringle 1. Also, Human prothrombin fragment 1 showed no immunological relationship with human prothrombin fragment 2 on Western blot analysis using an anti-prothrombin fragment 2 antibody. Only intact prothrombin and human prothrombin fragment 2 reacted with anti-prothrombin fragment 2 antibody. I showed that not only rabbit prothrombin fragment 2 but also human prothrombin fragment 1 and 2 had an inhibitory effect on bFGF-stimulated BCE cell growth. Human prothrombin fragment 1 and 2 displayed potent inhibitory effects on bovine capillary endothelial cells with a half-maximal concentration (ED50) of approximately 100 nM and 120 nM, respectively. As rabbit prothrombin fragment 2, the human prothrombin fragment 1 and 2 also inhibit angiogenesis in the chorioallantoi
Previously, the anti-endothelial cell proliferative effect of rabbit prothrombin fragment 2 (kringle 2 domain) was reported(Lee et al., 1998). Therefore, I planned to show anti-angiogenic activity in the in vitro anti-endothelial cell proliferative activity and in vivo CAM assay. In this paper, human prothrombin was purified from human plasma by barium citrate precipitation, followed by chromatographies on QMA Acell and Blue-Sephadex. Prothrombin is composed of a Gla domain (residues 1 to 44), two contiguous kringle domains (residues 45 to 155 and residues 156 to 273) and a serine protease catalytic domain in the carboxyl-terminal region (residues 274 to 581). The purified prothrombin was incubated with factor Xa at 23℃ overnight. Prothrombin fragments were purified to electrophoretic homogeneity using FPLC-mono Q column. Purified prothrombin fragment 1 and 2 migrated with a higher molecular mass of 30 kDa and 19 kDa on SDS-PAGE, compared with their molecular masses calculated from their amino acid sequences (17 kDa and 13 kDa). This phenomenon is common to several anti-endothelial cell proliferation molecules that include kringle domain, such as rabbit prothrombin kringle 2 and human angiostatin kringle 1. Also, Human prothrombin fragment 1 showed no immunological relationship with human prothrombin fragment 2 on Western blot analysis using an anti-prothrombin fragment 2 antibody. Only intact prothrombin and human prothrombin fragment 2 reacted with anti-prothrombin fragment 2 antibody. I showed that not only rabbit prothrombin fragment 2 but also human prothrombin fragment 1 and 2 had an inhibitory effect on bFGF-stimulated BCE cell growth. Human prothrombin fragment 1 and 2 displayed potent inhibitory effects on bovine capillary endothelial cells with a half-maximal concentration (ED50) of approximately 100 nM and 120 nM, respectively. As rabbit prothrombin fragment 2, the human prothrombin fragment 1 and 2 also inhibit angiogenesis in the chorioallantoi
Keyword
#사람 prothrombin fragment-1과 -2 소 혈관 내피세포 angiogenesis human prothrombin fragment-1 and -2 bovine capillary endothelial cell 혈관형성(angiogenesis)
학위논문 정보
저자
박찬수
학위수여기관
연세대학교 대학원
학위구분
국내석사
학과
생화학과
발행연도
2000
총페이지
ix, 60장
키워드
사람 prothrombin fragment-1과 -2 소 혈관 내피세포 angiogenesis human prothrombin fragment-1 and -2 bovine capillary endothelial cell 혈관형성(angiogenesis)
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