치료용 항체는 항원특이성과 항원에 대한 높은 친화도 때문에 항암제 또는 면역치료제로써 화제가 되어왔다. tissue plasminogen activator (tPA), erythropoietin (EPO), thrombopoietin (TPO), interferons (IFNs), granulocyte colony stimulating factor (G-CSF or GCSF) and growth factors (...
치료용 항체는 항원특이성과 항원에 대한 높은 친화도 때문에 항암제 또는 면역치료제로써 화제가 되어왔다. tissue plasminogen activator (tPA), erythropoietin (EPO), thrombopoietin (TPO), interferons (IFNs), granulocyte colony stimulating factor (G-CSF or GCSF) and growth factors (GF)와 같은 다른 재조합 단백질과는 다르게 치료용 항체의 투여량은 5 mg/kg 이상이 필요하다. 생체 내에 투여되는 단백질의 양이 많기 때문에, 시장규모를 만족시키기 위해서는 치료의 대량생산이 불가피하다. 더욱이, 재조합 CHO세포의 생산성은 미생물에 비해 매우 낮으므로 생산성을 향상시키기 위한 연구는 필수적이다. JL1항원에 특이적인 재조합항체를 발현하는 CHO 세포는 부착세포배양에서 methotrexate (MTX)에 의해 선별되고 증폭된 후에, 무혈청 배지, 무단백질 배지, 화학 배지에 각각 부유배양을 통해 적응시켰다. 우선 각각 적응 시킨 배지별로 회분배양을 실시하여 비교하는 실험을 수행하였다. 가장 높은 생산성을 보인 배지를 선택 후, 항체 생산을 증가시킬 수 있는 화학적, 물리적 인자에 대한 실험을 수행하였다. Sodium butyrate (NaBu)와 Dimethyl sulfoxide (DMSO)는 세포독성을 띔에도 불구하고, 항체생산성을 증가시켰다. 배양시간 72시간에 배양온도를 37도에서 30도로 낮춰주었을 때, 마지막 항체 생산량은 37도에서만 배양시킨 대조군에 비해 4.6~8.7배로 증가하였다. 또한 위와 같은 온도이동조건을 포도당 유가식 배양에 적용 시켰을 때, 온도이동조건만 적용시킨 것에 비하여 28%의 항체생산량이 증가하였다. 이와 같은 조건을 기압식 생물배양기에 적용하여 항체 생산을 시도하였고, 이런 확대 생산은 성공적으로 수행되었다. 이 실험 결과에 기초하여, 재조합 항체를 생산하는 CHO세포의 배양공정개발을 위한 기반을 확립하였다.
치료용 항체는 항원특이성과 항원에 대한 높은 친화도 때문에 항암제 또는 면역치료제로써 화제가 되어왔다. tissue plasminogen activator (tPA), erythropoietin (EPO), thrombopoietin (TPO), interferons (IFNs), granulocyte colony stimulating factor (G-CSF or GCSF) and growth factors (GF)와 같은 다른 재조합 단백질과는 다르게 치료용 항체의 투여량은 5 mg/kg 이상이 필요하다. 생체 내에 투여되는 단백질의 양이 많기 때문에, 시장규모를 만족시키기 위해서는 치료의 대량생산이 불가피하다. 더욱이, 재조합 CHO세포의 생산성은 미생물에 비해 매우 낮으므로 생산성을 향상시키기 위한 연구는 필수적이다. JL1항원에 특이적인 재조합항체를 발현하는 CHO 세포는 부착세포배양에서 methotrexate (MTX)에 의해 선별되고 증폭된 후에, 무혈청 배지, 무단백질 배지, 화학 배지에 각각 부유배양을 통해 적응시켰다. 우선 각각 적응 시킨 배지별로 회분배양을 실시하여 비교하는 실험을 수행하였다. 가장 높은 생산성을 보인 배지를 선택 후, 항체 생산을 증가시킬 수 있는 화학적, 물리적 인자에 대한 실험을 수행하였다. Sodium butyrate (NaBu)와 Dimethyl sulfoxide (DMSO)는 세포독성을 띔에도 불구하고, 항체생산성을 증가시켰다. 배양시간 72시간에 배양온도를 37도에서 30도로 낮춰주었을 때, 마지막 항체 생산량은 37도에서만 배양시킨 대조군에 비해 4.6~8.7배로 증가하였다. 또한 위와 같은 온도이동조건을 포도당 유가식 배양에 적용 시켰을 때, 온도이동조건만 적용시킨 것에 비하여 28%의 항체생산량이 증가하였다. 이와 같은 조건을 기압식 생물배양기에 적용하여 항체 생산을 시도하였고, 이런 확대 생산은 성공적으로 수행되었다. 이 실험 결과에 기초하여, 재조합 항체를 생산하는 CHO세포의 배양공정개발을 위한 기반을 확립하였다.
As effective cancer treatment or immunotherapy, therapeutic antibodies with target specificity and high affinity in respect of antigen have been issued. Unlike other recombinant proteins: tissue plasminogen activator (tPA), erythropoietin (EPO), thrombopoietin (TPO), interferons (IFNs), granulocyte ...
As effective cancer treatment or immunotherapy, therapeutic antibodies with target specificity and high affinity in respect of antigen have been issued. Unlike other recombinant proteins: tissue plasminogen activator (tPA), erythropoietin (EPO), thrombopoietin (TPO), interferons (IFNs), granulocyte colony stimulating factor (G-CSF or GCSF) and growth factors (GF), dosage range of therapeutic antibodies is needed above 5 mg/kg. It is necessary for mass production of therapeutic antibody to satisfy market breadth, because there is a large amount protein administered into in vivo. Furthermore, productivity of recombinant Chinese hamster ovary (rCHO) cells compared with microorganism is so low, experiments to improve productivity is essential. The rCHO cells expressing chimeric antibody against JL1 (specific epitope of human CD43) were amplified and selected with methotrexate (MTX) in adherent cultures, and rCHO cells later adapted to serum-free, protein-free and chemically defined media by suspension culture. First of all, media selection experiment was carried out. After medium produced antibody largely was chosen, the effects of chemical and physical factor were studied in an attempt to increase antibody production from suspension adapted rCHO cells. Sodium butyrate (NaBu) and dimethyl sulfoxide (DMSO) in spite of cytotoxic effect increased the production of recombinant antibody in rCHO cell culture. When the culture temperature was shifted from 37 ℃ to 30 ℃ at a culture time of 72 h, final antibody concentration was 4.6~8.7 times higher than control (cultured at 37 ℃). With establishing a culture condition of efficient antibody production, mass production was attempted by pneumatic bioreactor system (PBS) performed 2 L and 10 L scale. Also, the fed-batch study was performed. In this study, final antibody concentration of glucose fed-batch with temperature shift was increased about 28 % higher than only temperature-shift condition. These scale-up culture processes were successfully performed. Based on these results, foundation of development for culture process of rCHO cells producing recombinant antibody was established.
As effective cancer treatment or immunotherapy, therapeutic antibodies with target specificity and high affinity in respect of antigen have been issued. Unlike other recombinant proteins: tissue plasminogen activator (tPA), erythropoietin (EPO), thrombopoietin (TPO), interferons (IFNs), granulocyte colony stimulating factor (G-CSF or GCSF) and growth factors (GF), dosage range of therapeutic antibodies is needed above 5 mg/kg. It is necessary for mass production of therapeutic antibody to satisfy market breadth, because there is a large amount protein administered into in vivo. Furthermore, productivity of recombinant Chinese hamster ovary (rCHO) cells compared with microorganism is so low, experiments to improve productivity is essential. The rCHO cells expressing chimeric antibody against JL1 (specific epitope of human CD43) were amplified and selected with methotrexate (MTX) in adherent cultures, and rCHO cells later adapted to serum-free, protein-free and chemically defined media by suspension culture. First of all, media selection experiment was carried out. After medium produced antibody largely was chosen, the effects of chemical and physical factor were studied in an attempt to increase antibody production from suspension adapted rCHO cells. Sodium butyrate (NaBu) and dimethyl sulfoxide (DMSO) in spite of cytotoxic effect increased the production of recombinant antibody in rCHO cell culture. When the culture temperature was shifted from 37 ℃ to 30 ℃ at a culture time of 72 h, final antibody concentration was 4.6~8.7 times higher than control (cultured at 37 ℃). With establishing a culture condition of efficient antibody production, mass production was attempted by pneumatic bioreactor system (PBS) performed 2 L and 10 L scale. Also, the fed-batch study was performed. In this study, final antibody concentration of glucose fed-batch with temperature shift was increased about 28 % higher than only temperature-shift condition. These scale-up culture processes were successfully performed. Based on these results, foundation of development for culture process of rCHO cells producing recombinant antibody was established.
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