연쇄구균증은 우리 나라 양식 넙치에 큰 피해를 주는 세균성 질병의 원인균으로 알려져 있다. 특히, 연쇄구균증 중 Sreptococcus parauberis가 큰 피해를 내고 있으나 원인균에 대한 구체적인 연구가 미흡한 실정이다. 따라서 본 연구에서는 우리 나라의 주 양식종인 넙치 병어에서 분리된 S. parauberis를 생화학적 및 유전학적으로 동정하고 형태학적 특성, 시험균주의 ...
연쇄구균증은 우리 나라 양식 넙치에 큰 피해를 주는 세균성 질병의 원인균으로 알려져 있다. 특히, 연쇄구균증 중 Sreptococcus parauberis가 큰 피해를 내고 있으나 원인균에 대한 구체적인 연구가 미흡한 실정이다. 따라서 본 연구에서는 우리 나라의 주 양식종인 넙치 병어에서 분리된 S. parauberis를 생화학적 및 유전학적으로 동정하고 형태학적 특성, 시험균주의 protein profile, ECPs 효소 활성 및 EPC cell line에 대한 세포 독성 효과를 조사하였다. 또한 넙치 혈청에서의 생존능 및 넙치 혈액에서의 식균율과 식균지수를 조사하고 넙치 두신 macrophage의 ROIs 생성능을 측정하였다. 본 연구 결과, 넙치 병어에서 분리한 S. parauberis를 우리 나라에서 주로 분리되는 연쇄구균에 대한 각각의 특이 primer를 동시에 넣어서 수행한 multiplex PCR으로 신속하게 유전학적으로 동정하였다. S. parauberis의 분리 균주는 α 또는 γ 용혈능을 나타내었지만 S. iniae의 경우 β 용혈능을 나타내어 두 균주 사이에 명백한 차이가 있었고 ferritin-labelled antisera를 이용하여 S. parauberis 세포벽 바깥쪽의 capsule을 TEM으로 관찰하였다. S. parauberis Formalin Killed whole cell protein profiles은 47 KDa 주위에 두개의 major band가 관찰되었으며 S. parauberis 시험 균주 및 S. parauberis 참조 균주의 protein pattern이 매우 유사하였다. 그리고 최적 성장 적온 및 염분 농도는 27 ℃ and 0 % NaCl이었으며 45 ℃ and 10 % NaCl에서는 성장이 관찰되지 않았다. S. parauberis 면역학적 특성은 어류 병원체로서 잘 알려진 S. iniae 균주 중 병원성이 높으며 capsule이 존재하는 BS 9 균주와 병원성 낮으며 capsule이 존재하지 않는 S. iniae BS 10 균주와 비교하였다. capsule이 존재하는 S. parauberis와 S. iniae는 혈청에 의한 균주 살해능에 저항성을 나타내는 반면, capsule이 존재하지 않는 S. iniae는 넙치 혈청에서 시간이 지남에 따라 살균되었다. 또한 capsule이 존재하는 균주는 식작용을 회피하는 기작이 나타났으며 낮은 ROIs 생산을 자극하였다. 이상의 결과에서 넙치 병어에서 분리한 S. parauberis를 생화학 및 유전학적으로 동정하고 세균 표면 바깥쪽에 존재하는 capsule이 식작용과 혈청 살해능 등에 저항성을 가지며 높은 폐사율을 나타내었다. 따라서 S. parauberis는 우리 나라 대표 양식 어종인 넙치에서 병원성이 강한 균주로 사료된다.
연쇄구균증은 우리 나라 양식 넙치에 큰 피해를 주는 세균성 질병의 원인균으로 알려져 있다. 특히, 연쇄구균증 중 Sreptococcus parauberis가 큰 피해를 내고 있으나 원인균에 대한 구체적인 연구가 미흡한 실정이다. 따라서 본 연구에서는 우리 나라의 주 양식종인 넙치 병어에서 분리된 S. parauberis를 생화학적 및 유전학적으로 동정하고 형태학적 특성, 시험균주의 protein profile, ECPs 효소 활성 및 EPC cell line에 대한 세포 독성 효과를 조사하였다. 또한 넙치 혈청에서의 생존능 및 넙치 혈액에서의 식균율과 식균지수를 조사하고 넙치 두신 macrophage의 ROIs 생성능을 측정하였다. 본 연구 결과, 넙치 병어에서 분리한 S. parauberis를 우리 나라에서 주로 분리되는 연쇄구균에 대한 각각의 특이 primer를 동시에 넣어서 수행한 multiplex PCR으로 신속하게 유전학적으로 동정하였다. S. parauberis의 분리 균주는 α 또는 γ 용혈능을 나타내었지만 S. iniae의 경우 β 용혈능을 나타내어 두 균주 사이에 명백한 차이가 있었고 ferritin-labelled antisera를 이용하여 S. parauberis 세포벽 바깥쪽의 capsule을 TEM으로 관찰하였다. S. parauberis Formalin Killed whole cell protein profiles은 47 KDa 주위에 두개의 major band가 관찰되었으며 S. parauberis 시험 균주 및 S. parauberis 참조 균주의 protein pattern이 매우 유사하였다. 그리고 최적 성장 적온 및 염분 농도는 27 ℃ and 0 % NaCl이었으며 45 ℃ and 10 % NaCl에서는 성장이 관찰되지 않았다. S. parauberis 면역학적 특성은 어류 병원체로서 잘 알려진 S. iniae 균주 중 병원성이 높으며 capsule이 존재하는 BS 9 균주와 병원성 낮으며 capsule이 존재하지 않는 S. iniae BS 10 균주와 비교하였다. capsule이 존재하는 S. parauberis와 S. iniae는 혈청에 의한 균주 살해능에 저항성을 나타내는 반면, capsule이 존재하지 않는 S. iniae는 넙치 혈청에서 시간이 지남에 따라 살균되었다. 또한 capsule이 존재하는 균주는 식작용을 회피하는 기작이 나타났으며 낮은 ROIs 생산을 자극하였다. 이상의 결과에서 넙치 병어에서 분리한 S. parauberis를 생화학 및 유전학적으로 동정하고 세균 표면 바깥쪽에 존재하는 capsule이 식작용과 혈청 살해능 등에 저항성을 가지며 높은 폐사율을 나타내었다. 따라서 S. parauberis는 우리 나라 대표 양식 어종인 넙치에서 병원성이 강한 균주로 사료된다.
Streptococcal diseases are serious problems in fresh water and marine fish culture industry worldwide. In recent years, the importance of infection caused by Streptococcus parauberis has increased since severe outbreaks in cultured olive flounder (Paralichthys olivaceus) were recorded in Korea. The ...
Streptococcal diseases are serious problems in fresh water and marine fish culture industry worldwide. In recent years, the importance of infection caused by Streptococcus parauberis has increased since severe outbreaks in cultured olive flounder (Paralichthys olivaceus) were recorded in Korea. The aims of the present study were to investigate phenotypic characteristics of S. parauberis, and pathogenic and immunological characteristics between S. parauberis and S. iniae. In this study, S. parauberis isolated from infected olive flounder was identified by biochemical and genotypic characteristics and was investigated the characteristics of morphological, physiological, protein profile and enzyme activity of ECP. Immune responses of the fish to the pathogen was characterized by bactericidal activity in the serum, phagocytic activity and reactive oxygen intermediaters (ROIs) production of olive flounder. S. parauberis strains used in this study were overall very similar on the basis of biochemical characteristics. S. parauberis appeared α or γ hemolytic activity whereas S. iniae showed β hemolytic activity. A multiplex PCR-based method using 4 different primer sets was performed for rapid detection of various Gram-positive cocci fish pathogens, i.e. Lactococcus garviae, S. iniae and S. parauberis. The protein profiles of formalin killed cells of S. parauberis presented two major bands around 47 KDa, and overall the profiles were very similar to the reference strain. The optimum temperature and salinity for the growth of strains were 27 ℃ and 0 % NaCl, and they did not grow at 45 ℃ and 10 % NaCl, respectively. The capsule of both S. parauberis and S. iniae seems to be associated with the ability to resist killing by normal sera. Also, capsulated strains could survive in phagocytes and induce low ROIs production.
Streptococcal diseases are serious problems in fresh water and marine fish culture industry worldwide. In recent years, the importance of infection caused by Streptococcus parauberis has increased since severe outbreaks in cultured olive flounder (Paralichthys olivaceus) were recorded in Korea. The aims of the present study were to investigate phenotypic characteristics of S. parauberis, and pathogenic and immunological characteristics between S. parauberis and S. iniae. In this study, S. parauberis isolated from infected olive flounder was identified by biochemical and genotypic characteristics and was investigated the characteristics of morphological, physiological, protein profile and enzyme activity of ECP. Immune responses of the fish to the pathogen was characterized by bactericidal activity in the serum, phagocytic activity and reactive oxygen intermediaters (ROIs) production of olive flounder. S. parauberis strains used in this study were overall very similar on the basis of biochemical characteristics. S. parauberis appeared α or γ hemolytic activity whereas S. iniae showed β hemolytic activity. A multiplex PCR-based method using 4 different primer sets was performed for rapid detection of various Gram-positive cocci fish pathogens, i.e. Lactococcus garviae, S. iniae and S. parauberis. The protein profiles of formalin killed cells of S. parauberis presented two major bands around 47 KDa, and overall the profiles were very similar to the reference strain. The optimum temperature and salinity for the growth of strains were 27 ℃ and 0 % NaCl, and they did not grow at 45 ℃ and 10 % NaCl, respectively. The capsule of both S. parauberis and S. iniae seems to be associated with the ability to resist killing by normal sera. Also, capsulated strains could survive in phagocytes and induce low ROIs production.
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