PART I 등온 증폭법을 이용한 결핵 유전자의 검출 Mycobacterium tuberculosis (MTB) remains a major worldwide public health problem. In recent years, the inci ence of MTB has been rising. Rapid and reliable diagnosis of Mycobacterium tuberculosis is essential to initiate correct treatment, avoid severe complications, and ...
PART I 등온 증폭법을 이용한 결핵 유전자의 검출 Mycobacterium tuberculosis (MTB) remains a major worldwide public health problem. In recent years, the inci ence of MTB has been rising. Rapid and reliable diagnosis of Mycobacterium tuberculosis is essential to initiate correct treatment, avoid severe complications, and prevent transmission. LAMP was used to develop a rapid and sensitive laboratory diagnostic system for the MTB. In this research, the loop-mediated isothermal amplification method (LAMP) that amplifies DNA with high specificity and rapidity at an isothermal condition was evaluated for rapid detection of MTB. Undiluted DNA(2.1× 10^(6) copy/mL), 10^(-1), 10^(-2), 10^(-3), 10^(-4), 10^(-5) and 10^(-6) (copy/mL) of MTB DNA were amplified by PCR and LAMP to etermine the sensitivity of the assay. At results, the LAMP assay reported here has the advantages of rapid amplification, high sensitivity, and high specificity and will be useful for rapid and reliable clinical diagnosis of MTB in hospital clinical laboratory. PART II Micro-PCR과 Real-Time PCR을 이용한 병원성미생물 검출 Members of the Bacillus genus are ubiquitous soil microorganisms and are generally considered harmless contaminants. However, a few species are known to be toxin producers, including the foodborne pathogen, B. cereus. This species produces two distinct types of foodborne illness, the emetic (vomit-inducing) syndrome, associated with consumption of toxin in cooked rice dishes, and the diarrheal illness has seen occasionally following consumption of contaminated meats, sauces, and certain dairy products. Quantitation of circulating B. cereus is an important for monitoring disease progression for assessing the response to antiviral therapy. In this study, by using real-time PCR and micro PCR assay, I detected for B. cereus concentration in the clinical sample. The detection of B.cereus was tested by using serial 10-fold dilutions standard solution. I have compared the limit of detection, sensitivity, specificity and reproducibility of the two assays. These results indicated that the micro-PCR and real-time PCR assays is extremely rapid, highly sensetive and specific, and has potentialusefulness for rapid and reliable detection of B. cereusPART I 등온 증폭법을 이용한 결핵 유전자의 검출 결핵은 전 세계적으로 심각한 공중보건문제로 남아있다. 최근에는 결핵의 발병률이 증가하고 있는 추세이며 이에 따른 결핵의 정확한 조기치료와 심각한 부작용, 그리고 전염을 방지하기 위해서는 신속하고 정확한 결핵의 진단이 절실하게 필요하다. 본 연구에서는 결핵유전자를 빠르게 검출하는데 있어서 등온증폭법이 가지고 있는 높은 특이성과 신속성에 대하여 평가하였다. 결핵 DNA의 순차적 10배위 정량희석 DNA를 사용하였으며 일반PCR 방법과 등온증폭법의 실험방법의 검출한계, 민감성, 특이성, 재현성을 비교하였다. 그 결과 등온 증폭법은 빠른 증폭 시간과 높은 민감성, 높은 특이성을 가지고 있었으며 병원이나 연구실, 진단 검사실 등에서 결핵유전자를 빠르고 정확하게 진단할 수 있는 유용한 방법이 될 수 있을 것이다. PART II Micro-PCR과 Real-Time PCR을 이용한 병원성 미생물 검출 바실러스과 균종들은 빈번한 토양미생물로서 해롭지 않은 특성 을 가지고 있다. 그러나 바실러스 시리우스와 같은 소수 종들은 식인성 병원체로서 독성 물질을 배출한다. 바실러스 시리우스는 특히 두가지 형태의 식인성 매개질환을 유발하는데, 식기구의 독 성물질에 의한 구토 증상과, 간혹 변질된 육류나 소스, 유제품에 의하여 설사질병을 유발하기도 한다. 따라서 병원성미생물의 농도 를 측정하여 질병의 경과를 관찰하고 항체물질을 평가하는 것이 중요하다. 본 연구에서는 real-time PCR과 micro-PCR을 이용하여 B.cereus를 검출하였다. 검출한계의 측정을 위하여 순차적 10배위 정량희석 DNA를 사용 하였으며 두 가지 실험방법의 검출한계, 민감성, 특이성, 재현성을 비교하였다. 그 결과 real-time PCR과 micro-PCR은 빠른 검출 시간과, 높은 민감성, 특이성을 가지고 있어 신뢰성 있고 빠른 임상적 진단, 각종 검사가 요구 되는 곳에서 이용 가치가 높은 방법이라 할수있다.
PART I 등온 증폭법을 이용한 결핵 유전자의 검출 Mycobacterium tuberculosis (MTB) remains a major worldwide public health problem. In recent years, the inci ence of MTB has been rising. Rapid and reliable diagnosis of Mycobacterium tuberculosis is essential to initiate correct treatment, avoid severe complications, and prevent transmission. LAMP was used to develop a rapid and sensitive laboratory diagnostic system for the MTB. In this research, the loop-mediated isothermal amplification method (LAMP) that amplifies DNA with high specificity and rapidity at an isothermal condition was evaluated for rapid detection of MTB. Undiluted DNA(2.1× 10^(6) copy/mL), 10^(-1), 10^(-2), 10^(-3), 10^(-4), 10^(-5) and 10^(-6) (copy/mL) of MTB DNA were amplified by PCR and LAMP to etermine the sensitivity of the assay. At results, the LAMP assay reported here has the advantages of rapid amplification, high sensitivity, and high specificity and will be useful for rapid and reliable clinical diagnosis of MTB in hospital clinical laboratory. PART II Micro-PCR과 Real-Time PCR을 이용한 병원성미생물 검출 Members of the Bacillus genus are ubiquitous soil microorganisms and are generally considered harmless contaminants. However, a few species are known to be toxin producers, including the foodborne pathogen, B. cereus. This species produces two distinct types of foodborne illness, the emetic (vomit-inducing) syndrome, associated with consumption of toxin in cooked rice dishes, and the diarrheal illness has seen occasionally following consumption of contaminated meats, sauces, and certain dairy products. Quantitation of circulating B. cereus is an important for monitoring disease progression for assessing the response to antiviral therapy. In this study, by using real-time PCR and micro PCR assay, I detected for B. cereus concentration in the clinical sample. The detection of B.cereus was tested by using serial 10-fold dilutions standard solution. I have compared the limit of detection, sensitivity, specificity and reproducibility of the two assays. These results indicated that the micro-PCR and real-time PCR assays is extremely rapid, highly sensetive and specific, and has potential usefulness for rapid and reliable detection of B. cereusPART I 등온 증폭법을 이용한 결핵 유전자의 검출 결핵은 전 세계적으로 심각한 공중보건문제로 남아있다. 최근에는 결핵의 발병률이 증가하고 있는 추세이며 이에 따른 결핵의 정확한 조기치료와 심각한 부작용, 그리고 전염을 방지하기 위해서는 신속하고 정확한 결핵의 진단이 절실하게 필요하다. 본 연구에서는 결핵유전자를 빠르게 검출하는데 있어서 등온증폭법이 가지고 있는 높은 특이성과 신속성에 대하여 평가하였다. 결핵 DNA의 순차적 10배위 정량희석 DNA를 사용하였으며 일반PCR 방법과 등온증폭법의 실험방법의 검출한계, 민감성, 특이성, 재현성을 비교하였다. 그 결과 등온 증폭법은 빠른 증폭 시간과 높은 민감성, 높은 특이성을 가지고 있었으며 병원이나 연구실, 진단 검사실 등에서 결핵유전자를 빠르고 정확하게 진단할 수 있는 유용한 방법이 될 수 있을 것이다. PART II Micro-PCR과 Real-Time PCR을 이용한 병원성 미생물 검출 바실러스과 균종들은 빈번한 토양미생물로서 해롭지 않은 특성 을 가지고 있다. 그러나 바실러스 시리우스와 같은 소수 종들은 식인성 병원체로서 독성 물질을 배출한다. 바실러스 시리우스는 특히 두가지 형태의 식인성 매개질환을 유발하는데, 식기구의 독 성물질에 의한 구토 증상과, 간혹 변질된 육류나 소스, 유제품에 의하여 설사질병을 유발하기도 한다. 따라서 병원성미생물의 농도 를 측정하여 질병의 경과를 관찰하고 항체물질을 평가하는 것이 중요하다. 본 연구에서는 real-time PCR과 micro-PCR을 이용하여 B.cereus를 검출하였다. 검출한계의 측정을 위하여 순차적 10배위 정량희석 DNA를 사용 하였으며 두 가지 실험방법의 검출한계, 민감성, 특이성, 재현성을 비교하였다. 그 결과 real-time PCR과 micro-PCR은 빠른 검출 시간과, 높은 민감성, 특이성을 가지고 있어 신뢰성 있고 빠른 임상적 진단, 각종 검사가 요구 되는 곳에서 이용 가치가 높은 방법이라 할수있다.
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