초록 ▼

o 병원성미생물의 분자생물학적 조기검출방법 관련 자료 조사
o 감염성 바이러스의 정량적 조기검출을 위한 실험
- 역전사 중합효소연쇄반응(RT-PCR) 의 민감도 실험
- ICC-PCR(integrated cell culture) 의 민감도 실험
- 현장시료의 Q-ICC-PCR(quantitative ICC PCR) 실험
o 원생동물 및 세균에 대한 분자생물학적 검출기법의 적용 실험원생동물(크립토스포리디움, 지아디아) 및 세균(살모넬라, 쉬겔라)
- 표준균주별 PCR 반응조건 (DNA추출방법, pnrn

o 병원성미생물의 분자생물학적 조기검출방법 관련 자료 조사
o 감염성 바이러스의 정량적 조기검출을 위한 실험
- 역전사 중합효소연쇄반응(RT-PCR) 의 민감도 실험
- ICC-PCR(integrated cell culture) 의 민감도 실험
- 현장시료의 Q-ICC-PCR(quantitative ICC PCR) 실험
o 원생동물 및 세균에 대한 분자생물학적 검출기법의 적용 실험원생동물(크립토스포리디움, 지아디아) 및 세균(살모넬라, 쉬겔라)
- 표준균주별 PCR 반응조건 (DNA추출방법, pnrner 선정 등) 정립
- Real time PCR의 민감도 및 특이성 조사
o 바이러스,원생동물, 세균 등의 조기검출기법 시험 방법(안) 제시

Abstract ▼

Development of new rapid detection method or establishment of improved analysis system is needed to work out a response and countermeasure for the risk of pathogen at emergency such as water pollution accident. But, TCVA(total culturable virus assay) method, present standard method, takes much time

Development of new rapid detection method or establishment of improved analysis system is needed to work out a response and countermeasure for the risk of pathogen at emergency such as water pollution accident. But, TCVA(total culturable virus assay) method, present standard method, takes much time to obtain results for inoculating sample on BGM(Buffalo green monkey kidney) cell line, reading a observable cytophatic effect( CPE) in cell cultures. the experimental procedure of the assay is labor intensive and time consummg. And, although immunomagnetic separation/immuno fluorescent assay, standard method of protozoa, is widely used, it takes much analysis time and needs much labor. The aim of study is evaluate the detection reliability and to obtain optimal detection method of pathogenic microorganism such as virus, pathogenic protozoa, for supplying safe drinking water and prompt countermeasure at emergency. First year of this study (2006) , we evaluated sensitivity and specificity of real time PCR as protozoa and bacteria, and applied RT -PCR(reverse transcription-PCR), ICC- PCR(integrated cell culture-PCR), Q-ICC-PCR (quantitative ICC-PCR) as virus analysis

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 요약문 ... 3
• Abstract ... 7
• 차례 ... 9
• 표차례 ... 11
• 그림 차례 ... 12
• Ⅰ. 서 론 ... 15
• Ⅱ. 재료 및 방법 ... 18
• 1. 바이러스의 분석 방법 ... 18
• 가. 바이러스와 숙주세포 ... 18
• 나. RNA 추출 ... 18
• 다. RT-PCR(reverse transcription-PCR) ... 19
• 라. 전기영동 ... 20
• 마. RT-PCR의 민감도 조사 ... 20
• 바. FBS (fetal bovine serum) 의 영향 조사 ... 20
• 사. ICC-PCR을 통한 BGM세포에서 표준바이러스의 겸출 ... 21
• 아. 환경시료 채수 및 Q-ICC-PCR 법의 적용 ... 21
• 2. 원생동물의 분석 방법 ... 24
• 가. DNA 추출 ... 24
• 나. Real Time PCR primer 및 probe 제작 ... 24
• 다. Real time PCR ... 24
• 3. 세균의 분석 방법 ... 27
• 가. 표준 균주 ... 27
• 나. DNA 추출 ... 27
• 다. Real time PCR primer 및 probe 제작 ... 28
• 라. Rea1 time PCR ... 29
• Ⅲ. 연구결과 및 고찰 ... 30
• 1. 바이러스 조기검출 방법 ... 30
• 가. 감염성 바이러스의 조기검출방법 ... 30
• 나. 바이러스 조기검출 방법의 민감도 및 현장 시료 적용 실험 ... 32
• 다. 바이러스의 조기검출 Q-ICC-PCR 법 (안) ... 41
• 2. 원생동물의 조기검출 방법 ... 45
• 가. 국내외의 원생동물 분석방법 ... 45
• 나. Real time PCR의 민감도 및 특이성 ... 49
• 다. 원생동물 조기검출시험방법(안) ... 61
• 3. 세균의 조기검출 방법 ... 63
• 가. 세균의 분자생물학적 분석방법 ... 65
• 나. Real time PCR의 민감도 및 특이성 ... 67
• 라. 세균의 조기검출 시험방법 (안) ... 82
• Ⅳ. 결 론 ... 85
• 1. 바이러스의 조기검출기법 ... 85
• 2. Real time PCR에 의한 원생동물의 조기검출기법 ... 85
• 3. Real time PCR에 의한 세균의 조기검출기법 ... 86
• 4. 조기검출기법(안)의 제시 ... 86
• Ⅴ. 참고문헌 ... 88
• 부 록 ... 97