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국내 콩 (Glycine max) 품종에 대한 효율적인 형질전환체계를 확립하기 위하여 Agrobacterium 감염에 순응적인 품종을 선발하였다. 이를 위해 59개의 국내 콩 장려품종을 screen하여 광안콩을 형질전환에 가장 적합한 품종으로 선발하였으며, 선발 agent로는 PPT를 선택하였다. 효율적인 PPT 농도는 0 ppm에서 10 ppm, 그리고 후기에는 5 ppm이 가장 적합하였다. 보다 높은 형질전환 효율을 위하여 scalpel (# 11 blade)로 상처를 내었고 진공처리와 고농축액 dipping 방법을 이용하여 비교 실험을 한 결과, 진공처리와 dipping 방법을 동시에 이용하였을 때 82%의 정확한 목표부위에 유전자의 높은 도입을 transient ...

국내 콩 (Glycine max) 품종에 대한 효율적인 형질전환체계를 확립하기 위하여 Agrobacterium 감염에 순응적인 품종을 선발하였다. 이를 위해 59개의 국내 콩 장려품종을 screen하여 광안콩을 형질전환에 가장 적합한 품종으로 선발하였으며, 선발 agent로는 PPT를 선택하였다. 효율적인 PPT 농도는 0 ppm에서 10 ppm, 그리고 후기에는 5 ppm이 가장 적합하였다. 보다 높은 형질전환 효율을 위하여 scalpel (# 11 blade)로 상처를 내었고 진공처리와 고농축액 dipping 방법을 이용하여 비교 실험을 한 결과, 진공처리와 dipping 방법을 동시에 이용하였을 때 82%의 정확한 목표부위에 유전자의 높은 도입을 transient GUS (β-glucuronidase) 분석을 통하여 알 수 있었다. 유전자의 효율적인 도입으로 인해 shoot elongation의 많은 개선과 발근에서도 매우 높은 효율을 나타내었다. 개발된 형질전환 체계를 이용하여 bar 및 Epsps 유전자가 도입된 형질전환 벡터를 통해 형질전환이 광안콩에 수행되었고, 제초제 저항성 형질전환체를 생산하여 종자 (T1 종자)를 수확하였다. 빠른 세대의 진행을 위해 종자를 심어 T1 식물체를 생산하였고 T2 종자를 수확하였다. Southern blot 분석을 수행하였고, 유전자의 도입은 GUS 분석과 PCR을 통하여 확인하였으며, RT-PCR로 발현을 확인하였다. 또한 후기 성체에 대한 PPT leaf painting과 basta 살포를 한 결과, 형질전환체에는 아무런 변화가 없는 반면, 비형질전환체는 모두 고사하였다. 제초제 저항성에 대하여 공동연구를 하고 있는 ‘한국화학연구원’에 종자를 보내어 glufosinate 및 glyphosate 처리를 하여 유전자의 안정적 도입과 발현을 확인하였다.