줄기세포는 모든 세포나 조직의 근간이 되는 세포로 분화 할 수 있는 다분화 능력과 미분화 상태로 끊임없이 스스로 증식하는 자가 재생능력을 가진 세포이다. 1998년 Thomson 등이 배반포에서 유래된 인간 배아 줄기 세포주가 확립이 된 후, 난치병과 불치병의 세포 치료제나 치료제 개발의 재료로써 연구가 활발히 진행 되고 있다. 지금까지 세포의 손상에 의해 발생하는 뇌졸중과 심장병, 당뇨 등과 같은 난치병의 치료로써 단지 손상된 부위를 제거하거나 일시적으로 회복시킬 수는 있었지만 정상세포로 다시 회복시키지 못한다는 한계를 가지고 있었다. 이에 배아줄기 세포를 손상된 세포대신 이식하여 난치병을 치료하는 데에 도움을 줄 것으로 기대 되고 있다. 특히 뇌세포가 손상되어 발생하는 척추손상과 파킨슨병의 치료에 세포치료제로서 기대되는 신경세포로의 분화연구가 많은 연구자에 의해 보고 되고 있다. 하지만 지금까지의 분화 방법은 분화과정 중에 세포의 손실이 많고, 세포의 상태와 실험자에 따라 결과에 차이를 보이는 단점을 가지고 있다. 본 실험에서는 샘플과 실험자의 따라 발생하는 격차를 줄이고자 샘플의 크기와 분화 유도 시기를 일정하게 하여 기존의 방법 보다 효과적이고 효율적인 새로운 분화 기술을 확립할 수 있었다. 이렇게 분화 유도된 세포의 특성을 확인하기 위하여 ...
줄기세포는 모든 세포나 조직의 근간이 되는 세포로 분화 할 수 있는 다분화 능력과 미분화 상태로 끊임없이 스스로 증식하는 자가 재생능력을 가진 세포이다. 1998년 Thomson 등이 배반포에서 유래된 인간 배아 줄기 세포주가 확립이 된 후, 난치병과 불치병의 세포 치료제나 치료제 개발의 재료로써 연구가 활발히 진행 되고 있다. 지금까지 세포의 손상에 의해 발생하는 뇌졸중과 심장병, 당뇨 등과 같은 난치병의 치료로써 단지 손상된 부위를 제거하거나 일시적으로 회복시킬 수는 있었지만 정상세포로 다시 회복시키지 못한다는 한계를 가지고 있었다. 이에 배아줄기 세포를 손상된 세포대신 이식하여 난치병을 치료하는 데에 도움을 줄 것으로 기대 되고 있다. 특히 뇌세포가 손상되어 발생하는 척추손상과 파킨슨병의 치료에 세포치료제로서 기대되는 신경세포로의 분화연구가 많은 연구자에 의해 보고 되고 있다. 하지만 지금까지의 분화 방법은 분화과정 중에 세포의 손실이 많고, 세포의 상태와 실험자에 따라 결과에 차이를 보이는 단점을 가지고 있다. 본 실험에서는 샘플과 실험자의 따라 발생하는 격차를 줄이고자 샘플의 크기와 분화 유도 시기를 일정하게 하여 기존의 방법 보다 효과적이고 효율적인 새로운 분화 기술을 확립할 수 있었다. 이렇게 분화 유도된 세포의 특성을 확인하기 위하여 마이크로어레이를 수행하였고, 분화가 되면서 증가되거나 감소되는 유전자들을 분석하였다. 또한 효과적으로 분화 실험을 할 수 있도록 인간 배아 줄기 세포의 배양 방법을 개선하기 위하여 divider(embryonic stem cell divider, ESCD)를 고안하였다. 그 결과, 기존의 배양기술에 비해 대량으로 배양이 가능해 졌고, 쉽고 빠르며 또 높은 질을 유지할 수 있음을 확인하였다. Divider를 이용하여 15회 이상 계대한 세포를 면역세포염색과 핵형분석을 통하여 정상적으로 배양됨을 확인하였다. 따라서 본 연구에서 확립한 divider와 신경세포로의 분화 기술을 이용하면 인간배아 줄기세포 연구와 세포 치료제 연구에 도움이 될 것으로 사료된다.
줄기세포는 모든 세포나 조직의 근간이 되는 세포로 분화 할 수 있는 다분화 능력과 미분화 상태로 끊임없이 스스로 증식하는 자가 재생능력을 가진 세포이다. 1998년 Thomson 등이 배반포에서 유래된 인간 배아 줄기 세포주가 확립이 된 후, 난치병과 불치병의 세포 치료제나 치료제 개발의 재료로써 연구가 활발히 진행 되고 있다. 지금까지 세포의 손상에 의해 발생하는 뇌졸중과 심장병, 당뇨 등과 같은 난치병의 치료로써 단지 손상된 부위를 제거하거나 일시적으로 회복시킬 수는 있었지만 정상세포로 다시 회복시키지 못한다는 한계를 가지고 있었다. 이에 배아줄기 세포를 손상된 세포대신 이식하여 난치병을 치료하는 데에 도움을 줄 것으로 기대 되고 있다. 특히 뇌세포가 손상되어 발생하는 척추손상과 파킨슨병의 치료에 세포치료제로서 기대되는 신경세포로의 분화연구가 많은 연구자에 의해 보고 되고 있다. 하지만 지금까지의 분화 방법은 분화과정 중에 세포의 손실이 많고, 세포의 상태와 실험자에 따라 결과에 차이를 보이는 단점을 가지고 있다. 본 실험에서는 샘플과 실험자의 따라 발생하는 격차를 줄이고자 샘플의 크기와 분화 유도 시기를 일정하게 하여 기존의 방법 보다 효과적이고 효율적인 새로운 분화 기술을 확립할 수 있었다. 이렇게 분화 유도된 세포의 특성을 확인하기 위하여 마이크로어레이를 수행하였고, 분화가 되면서 증가되거나 감소되는 유전자들을 분석하였다. 또한 효과적으로 분화 실험을 할 수 있도록 인간 배아 줄기 세포의 배양 방법을 개선하기 위하여 divider(embryonic stem cell divider, ESCD)를 고안하였다. 그 결과, 기존의 배양기술에 비해 대량으로 배양이 가능해 졌고, 쉽고 빠르며 또 높은 질을 유지할 수 있음을 확인하였다. Divider를 이용하여 15회 이상 계대한 세포를 면역세포염색과 핵형분석을 통하여 정상적으로 배양됨을 확인하였다. 따라서 본 연구에서 확립한 divider와 신경세포로의 분화 기술을 이용하면 인간배아 줄기세포 연구와 세포 치료제 연구에 도움이 될 것으로 사료된다.
Neural stem cells have considerable therapeutic potential because of their ability to generate various neural cells which can be used in cell-replacement therapies for neurodegenerative diseases. Only very small numbers of these stem cells are found in a tissue or organ and they are difficult to iso...
Neural stem cells have considerable therapeutic potential because of their ability to generate various neural cells which can be used in cell-replacement therapies for neurodegenerative diseases. Only very small numbers of these stem cells are found in a tissue or organ and they are difficult to isolate. At this point, human embryonic stem cells (hESCs) have advantages in self-renewing, being potential to differentiate into every cell type, and proliferating rapidly. Therefore, hESCs are suitable materials to obtain neural stem cells. By using hESCs for differentiation research more suitable culture environment was prepared and specific differentiation protocols that are very important were established. In this study, the method of hESC culture was improved to be easier and simpler, and methods of differentiating into neural stem cells were modified to have high quantity and quality via embryoid body (EB) stage. In addition neuroectoderm spheres from three hESC lines were screened. Genome-wide expressions of hESCs were detected by Affymetrixs Human Genome U133 plus 2.0 Array. All these expression profiles were analyzed by the methods of hierarchical clustering and principal component analysis. As a result, total 49995 genes were changed during differentiation into neural stem cells from EBs and 963 genes (>5 fold) were isolated. Up-regulated genes (621) were related to axon guidance, MAPK signaling pathway, focal adhesion, and Wnt signaling pathway. From these results, these methods are expected to help hESCs differentiate into neural stem cells effectively and guide to find factors inducing neural stem cells.
Neural stem cells have considerable therapeutic potential because of their ability to generate various neural cells which can be used in cell-replacement therapies for neurodegenerative diseases. Only very small numbers of these stem cells are found in a tissue or organ and they are difficult to isolate. At this point, human embryonic stem cells (hESCs) have advantages in self-renewing, being potential to differentiate into every cell type, and proliferating rapidly. Therefore, hESCs are suitable materials to obtain neural stem cells. By using hESCs for differentiation research more suitable culture environment was prepared and specific differentiation protocols that are very important were established. In this study, the method of hESC culture was improved to be easier and simpler, and methods of differentiating into neural stem cells were modified to have high quantity and quality via embryoid body (EB) stage. In addition neuroectoderm spheres from three hESC lines were screened. Genome-wide expressions of hESCs were detected by Affymetrixs Human Genome U133 plus 2.0 Array. All these expression profiles were analyzed by the methods of hierarchical clustering and principal component analysis. As a result, total 49995 genes were changed during differentiation into neural stem cells from EBs and 963 genes (>5 fold) were isolated. Up-regulated genes (621) were related to axon guidance, MAPK signaling pathway, focal adhesion, and Wnt signaling pathway. From these results, these methods are expected to help hESCs differentiate into neural stem cells effectively and guide to find factors inducing neural stem cells.
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