Pycnogenol(PYC)가 세포고사 유발이 있는 것으로 알려지고 있으나 세포고사 기전에 대하여 연구된 바가 없다. 이번 실험에서 인체 간암세포주인 HepG2, Huh7, SK-Hep-1, Hep3B를 대상으로 비교 실험하였다. PYC의 처리에 따라 MTT assay를 이용한 세포성장의 측정에서 HepG2세포주는 처리 농도 의존적으로 암세포의 형태적 변화를 동반하면서 증식이 억제되었으며, 생존율이 현저히 저하되었다. 세포의 핵의 형태적 변화를 관찰할 수 있는 DAPI stain에서 HepG2세포주는 핵의 농축과 세포고사체 형성을 관찰 할 수 있었으며, Huh7세포주는 PYC 100㎍/ml과 200㎍/ml 농도에서 약간의 핵 농축의 모습을 관찰 할 수 있었으나, Hep3B와 SK-Hep-1세포주에서는 어떠한 변화양상도 관찰 할 수 없었다. PYC의 처리에 의한 인체 간암세포주들의 생존율 감소 및 성장억제가 세포고사 유발에 연관성이 있을 것으로 추측되어 PYC를 24시간 동안 처리한 후 ...
Pycnogenol(PYC)가 세포고사 유발이 있는 것으로 알려지고 있으나 세포고사 기전에 대하여 연구된 바가 없다. 이번 실험에서 인체 간암세포주인 HepG2, Huh7, SK-Hep-1, Hep3B를 대상으로 비교 실험하였다. PYC의 처리에 따라 MTT assay를 이용한 세포성장의 측정에서 HepG2세포주는 처리 농도 의존적으로 암세포의 형태적 변화를 동반하면서 증식이 억제되었으며, 생존율이 현저히 저하되었다. 세포의 핵의 형태적 변화를 관찰할 수 있는 DAPI stain에서 HepG2세포주는 핵의 농축과 세포고사체 형성을 관찰 할 수 있었으며, Huh7세포주는 PYC 100㎍/ml과 200㎍/ml 농도에서 약간의 핵 농축의 모습을 관찰 할 수 있었으나, Hep3B와 SK-Hep-1세포주에서는 어떠한 변화양상도 관찰 할 수 없었다. PYC의 처리에 의한 인체 간암세포주들의 생존율 감소 및 성장억제가 세포고사 유발에 연관성이 있을 것으로 추측되어 PYC를 24시간 동안 처리한 후 유세포 분석기에 의한 세포주기의 sub-G1를 정량적으로 분석한 결과는 HepG2, Huh7, Hep3B세포주에서 apoptotic sub-G1기에 해당하는 세포들의 빈도가 처리농도 의존적으로 증가하였으나 SK-Hep-1세포주는 어떠한 변화 양상도 볼 수 없었다. 또한 Annexin-V분석으로도 HepG2, Huh7세포주에서 농도 의존적으로 early apoptosis와 late apoptosis가 증가하였음을 확인하였으며, SK-Hep-1세포주는 early apoptosis와 late apoptosis에서 어떠한 변화양상도 확인 할 수 없었다. 또한 단백질 변화 수준의 양상에서 Fas 및 FasL는 인체 간암 세포주들인 HepG2, Huh7, SK-Hep-1, Hep3B에서 모두 증가양상을 보였으며, HepG2, Huh7, Hep3B세포주는 caspase-3, cleaved caspase-3와 caspase-7, cleaved caspase-7, caspase-8, cleaved caspase-8와 PARP, cleaved PARP는 처리 농도 의존적으로 활성화되었으며, SK-Hep-1세포주의 단백질 변화 수준은 찾아 볼 수 없었다. 또한 HepG2, SK-Hep-1세포주에서 Bax와 Bcl-2 member에 속하는 단백질 수준의 변화는 연관성이 없었으며, Huh7세포주에서 Bax는 증가양상과 Bcl-2는 감소가 뚜렷하였다. Bcl-2 family 단백질의 발현 변화가 미토콘드리아의 기능 변화에 기여하였으리라 추정된다. 이상의 결과에서 PYC에 의한 암세포의 생존율 저하는 세포고사의 조절에 중요한 단백질 변화의 수준에 대한 세포고사 유발과 밀접한 관련이 있었으며, 인체 암세포에서 PYC의 항암작용을 이해하는데 중요한 자료가 될 것이며, PYC는 항암제 개발 가능성이 매우 높은 물질중의 하나로서 지속적인 연구가 수행되어야 할 것으로 생각되어진다.
Pycnogenol(PYC)가 세포고사 유발이 있는 것으로 알려지고 있으나 세포고사 기전에 대하여 연구된 바가 없다. 이번 실험에서 인체 간암세포주인 HepG2, Huh7, SK-Hep-1, Hep3B를 대상으로 비교 실험하였다. PYC의 처리에 따라 MTT assay를 이용한 세포성장의 측정에서 HepG2세포주는 처리 농도 의존적으로 암세포의 형태적 변화를 동반하면서 증식이 억제되었으며, 생존율이 현저히 저하되었다. 세포의 핵의 형태적 변화를 관찰할 수 있는 DAPI stain에서 HepG2세포주는 핵의 농축과 세포고사체 형성을 관찰 할 수 있었으며, Huh7세포주는 PYC 100㎍/ml과 200㎍/ml 농도에서 약간의 핵 농축의 모습을 관찰 할 수 있었으나, Hep3B와 SK-Hep-1세포주에서는 어떠한 변화양상도 관찰 할 수 없었다. PYC의 처리에 의한 인체 간암세포주들의 생존율 감소 및 성장억제가 세포고사 유발에 연관성이 있을 것으로 추측되어 PYC를 24시간 동안 처리한 후 유세포 분석기에 의한 세포주기의 sub-G1를 정량적으로 분석한 결과는 HepG2, Huh7, Hep3B세포주에서 apoptotic sub-G1기에 해당하는 세포들의 빈도가 처리농도 의존적으로 증가하였으나 SK-Hep-1세포주는 어떠한 변화 양상도 볼 수 없었다. 또한 Annexin-V분석으로도 HepG2, Huh7세포주에서 농도 의존적으로 early apoptosis와 late apoptosis가 증가하였음을 확인하였으며, SK-Hep-1세포주는 early apoptosis와 late apoptosis에서 어떠한 변화양상도 확인 할 수 없었다. 또한 단백질 변화 수준의 양상에서 Fas 및 FasL는 인체 간암 세포주들인 HepG2, Huh7, SK-Hep-1, Hep3B에서 모두 증가양상을 보였으며, HepG2, Huh7, Hep3B세포주는 caspase-3, cleaved caspase-3와 caspase-7, cleaved caspase-7, caspase-8, cleaved caspase-8와 PARP, cleaved PARP는 처리 농도 의존적으로 활성화되었으며, SK-Hep-1세포주의 단백질 변화 수준은 찾아 볼 수 없었다. 또한 HepG2, SK-Hep-1세포주에서 Bax와 Bcl-2 member에 속하는 단백질 수준의 변화는 연관성이 없었으며, Huh7세포주에서 Bax는 증가양상과 Bcl-2는 감소가 뚜렷하였다. Bcl-2 family 단백질의 발현 변화가 미토콘드리아의 기능 변화에 기여하였으리라 추정된다. 이상의 결과에서 PYC에 의한 암세포의 생존율 저하는 세포고사의 조절에 중요한 단백질 변화의 수준에 대한 세포고사 유발과 밀접한 관련이 있었으며, 인체 암세포에서 PYC의 항암작용을 이해하는데 중요한 자료가 될 것이며, PYC는 항암제 개발 가능성이 매우 높은 물질중의 하나로서 지속적인 연구가 수행되어야 할 것으로 생각되어진다.
The mechanism by which Pycnogenol initiates apoptosis remains poorly understood. In this study, we investigated the anti-tumor effects of Pycnogenol on HepG2, Hep3B, SK-Hep-1, Huh7 human hepatoma cell lines. In order to evaluate the inhibitory effect of pycnogenol on the growth of HepG2, Huh7, SK-He...
The mechanism by which Pycnogenol initiates apoptosis remains poorly understood. In this study, we investigated the anti-tumor effects of Pycnogenol on HepG2, Hep3B, SK-Hep-1, Huh7 human hepatoma cell lines. In order to evaluate the inhibitory effect of pycnogenol on the growth of HepG2, Huh7, SK-Hep-1, Hep3B cell lines, the culture was exposed to different concentrations of the drug for up to 24h underwent significant shape and volume changes. Using the MTT assay, The data obtained in this study revealed the inhibitory effect of PYC on HepG2 cancer cell growth. In DAPI staining, nuclear condensation and formation of apoptotic bodies of HepG2 cell line were observed in all doses, while indications of nuclear condensation of Huh7 cell line was detectable only in high concentrations of 100ug/ml and 200ug/ml. These apoptosis-related morphological alterations were not found in Hep3B and SK-Hep-1 cell lines. Flow cytometric analysis revealed that the number of apoptotic sub-G1 fraction of cells increased after PYC treatment in a dose-dependent manner in HepG2, Huh7, Hep3B cell lines. No such trend was observed in SK-Hep-1 cell line after the identical treatment. Annexin-V staining followed by flow cytometric analysis also revealed that PYC induced increased number of early apoptosis and late apoptosis of HepG2 and Huh7 cell lines in a dose-dependent manner. In contrast, no such alteration of early apoptosis or late apoptosis was observed in SK-Hep-1 cell line. PYC also increased Fas, FasL expression of HepG2, Huh7, Hep3B, SK-Hep-1 cell lines and activated caspase-3, cleaved caspase-3, caspase7, cleaved caspase-7, caspase-8, cleaved caspase-8, PARP and cleaved PARP in a dose-dependent manner in HepG2, Huh7, Hep3B cell lines but not in SK-Hep-1 cell line. No protein level alteration of Bax and Bcl-2 family was observed in HepG2 and SK-Hep-1 cell lines, while clear indication of increase and decrease of Bax and Bcl-2 expression, respectively, was observed in Huh7 cell line. Altered expression of Bcl-2 family seems to be responsible for functional change of mitochondria. In conclusion, these results indicate that decreased survival rate of cancer cells after PYC treatment is closely related with protein level alteration that lead to apoptosis. Potentiality of PYC as a potent cancer chemopreventive or chemotherapeutic agent should be continued to be investigated.
The mechanism by which Pycnogenol initiates apoptosis remains poorly understood. In this study, we investigated the anti-tumor effects of Pycnogenol on HepG2, Hep3B, SK-Hep-1, Huh7 human hepatoma cell lines. In order to evaluate the inhibitory effect of pycnogenol on the growth of HepG2, Huh7, SK-Hep-1, Hep3B cell lines, the culture was exposed to different concentrations of the drug for up to 24h underwent significant shape and volume changes. Using the MTT assay, The data obtained in this study revealed the inhibitory effect of PYC on HepG2 cancer cell growth. In DAPI staining, nuclear condensation and formation of apoptotic bodies of HepG2 cell line were observed in all doses, while indications of nuclear condensation of Huh7 cell line was detectable only in high concentrations of 100ug/ml and 200ug/ml. These apoptosis-related morphological alterations were not found in Hep3B and SK-Hep-1 cell lines. Flow cytometric analysis revealed that the number of apoptotic sub-G1 fraction of cells increased after PYC treatment in a dose-dependent manner in HepG2, Huh7, Hep3B cell lines. No such trend was observed in SK-Hep-1 cell line after the identical treatment. Annexin-V staining followed by flow cytometric analysis also revealed that PYC induced increased number of early apoptosis and late apoptosis of HepG2 and Huh7 cell lines in a dose-dependent manner. In contrast, no such alteration of early apoptosis or late apoptosis was observed in SK-Hep-1 cell line. PYC also increased Fas, FasL expression of HepG2, Huh7, Hep3B, SK-Hep-1 cell lines and activated caspase-3, cleaved caspase-3, caspase7, cleaved caspase-7, caspase-8, cleaved caspase-8, PARP and cleaved PARP in a dose-dependent manner in HepG2, Huh7, Hep3B cell lines but not in SK-Hep-1 cell line. No protein level alteration of Bax and Bcl-2 family was observed in HepG2 and SK-Hep-1 cell lines, while clear indication of increase and decrease of Bax and Bcl-2 expression, respectively, was observed in Huh7 cell line. Altered expression of Bcl-2 family seems to be responsible for functional change of mitochondria. In conclusion, these results indicate that decreased survival rate of cancer cells after PYC treatment is closely related with protein level alteration that lead to apoptosis. Potentiality of PYC as a potent cancer chemopreventive or chemotherapeutic agent should be continued to be investigated.
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