Bordetella bronchiseptica aroA 변이주의 확립 그리고 면역원성과 돼지 써코바이러스 2형 capsid 단백질의 발현 평가 Construction and immunogenicity of Bordetella bronchiseptica aroA mutant and evaluation of its expressing the capsid protein of porcine circovirus type 2원문보기
Bordetella bronchiseptica (Bbs)는 많은 종류의 숙주에 감수성이 있으며, 특히 돼지에서는 경미하거나 비진행적인 위축성 비염과 기관지 폐렴을 일으키는 원인체로 알려져 있다. 유전적으로 일부분 결함이 있는 약독화 된 생 Bbs 백신의 호흡기로의 직접적인 접종은 아마도 현재 사용되어지고 있는 백신을 뛰어넘는 장점을 가질 것이다. 5-enolpyruvyshikimat-3- phosphate 를 포함하고 있는 aroA 유전자 제거는 방향족 아미노산의 생합성을 중단시킨다. 본 연구에서는, 상동 재조합을 이용한 Bbs aroA 제거 변이주를 확립하였다. 이 변이주를 이용하여 마우스에서 생 점막 백신과 면역원성에 관한 연구를 실시하였다. Bbs aroA 변이주는 Bbs 야외주에 비해 호흡기와 폐에서 생존 능력이 상당히 약화 되었다. Bbs aroA 변이주는 공격접종 이 후 하루 만에 기관지 ...
Bordetella bronchiseptica (Bbs)는 많은 종류의 숙주에 감수성이 있으며, 특히 돼지에서는 경미하거나 비진행적인 위축성 비염과 기관지 폐렴을 일으키는 원인체로 알려져 있다. 유전적으로 일부분 결함이 있는 약독화 된 생 Bbs 백신의 호흡기로의 직접적인 접종은 아마도 현재 사용되어지고 있는 백신을 뛰어넘는 장점을 가질 것이다. 5-enolpyruvyshikimat-3- phosphate 를 포함하고 있는 aroA 유전자 제거는 방향족 아미노산의 생합성을 중단시킨다. 본 연구에서는, 상동 재조합을 이용한 Bbs aroA 제거 변이주를 확립하였다. 이 변이주를 이용하여 마우스에서 생 점막 백신과 면역원성에 관한 연구를 실시하였다. Bbs aroA 변이주는 Bbs 야외주에 비해 호흡기와 폐에서 생존 능력이 상당히 약화 되었다. Bbs aroA 변이주는 공격접종 이 후 하루 만에 기관지 폐포 세척액에서 모두 제거되었지만, Bbs 야외주는 6 일 이 후에도 완전히 제거되지 않았다. Bbs aroA 변이주는 백신 이 후, Bbs 에 대한 높은 IgG 와 IgA 항체 수준을 유도할 수 있었다. 열처리된 사균 Bbs 항원에 의해 자극된 마우스 신장세포에서 IFN-γ 와 IL-4 분비 정도는 유의성있게 증가되었다. 열처리된 사균 Bbs 항원으로 면역화된 마우스는 호흡기로의 직접적인 Bbs 야외주 공격접종에 대항해 면역이 안된 대조군에 비해 빠르게 세균을 제거하였다. 방어효과에 있어서 점막면역의 역할을 시험하기 위해, Bbs 변이주로 면역된 마우스 기관지 폐포 세척액과 함께 배양된 Bbs 를 마우스에 접종한 결과 Bbs 변이주로 면역된 마우스에서 점막 면역이 형성된 것을 확인 하였다. 장기간 방어 실험에서, 면역화된 마우스는 2 차 추가접종 이후 3 달동안 여전히 높은 수준의 항체가를 유지하였고 Bbs 감염을 방어하였다. Bbs aroA 변이주로 면역화된 마우스는 폐의 염증 감소와 낮은 평균 폐 병변 지수를 보여주었다. 돼지모델 실험에서, Bbs aroA 변이주로 면역화 된 돼지에서는 Bbs 에 대해 높은 혈청 IgA 와 IgG 수준이 유도되었고 살아있는 Bbs 의 수는 감소하였다. 뿐만 아니라, Bbs 야외주로 공격접종 후에도 폐의 염증이 감소되는 것이 나타났다. 이러한 결과를 종합하여 보면, Bbs aroA 변이주는 생 점막 백신으로 가능성이 있으며, 이종성 항원을 위한 벡터로 사용 가능성이 있다. 돼지에서 돼지 써코 바이러스 2 형에 의해 발생하는 이유후전신성소모성 증후군은 근래에 발생하기 시작한 질병으로 돼지 산업에 경제적인 손실을 일으킨다. 본 연구에서는, Bbs-MCP (돼지 써코 바이러스 2 형 major capsid protein(MCP)을 발현시키기 위해 사용된 Bbs aroA 변이주)의 발현을 수행하였으며,이 것을 생 백신 매개체로 사용하였다. 생 Bbs-MCP 로 면역된 마우스에서 효소결합 면역흡수 분석법 (ELISA)을 통해 혈청 시료에서 돼지 써코바이러스 2 형에 대한 성공적인 항체 생성을 확인하였다. Bbs-MCP 로 면역된 돼지에서도 돼지 써코바이러스 2 형에 대한 항체가 생성되었고, 돼지 써코바이러스 2 형 공격접종 후에 조직내에서 바이러스 DNA 의 감소가 관찰되었다. 이러한 결과들을 종합하여 보면, Bbs-MCP 는 돼지 써코바이러스 2 형 감염에 대한 생 점막 백신으로 활용 가능성이 있다.
Bordetella bronchiseptica (Bbs)는 많은 종류의 숙주에 감수성이 있으며, 특히 돼지에서는 경미하거나 비진행적인 위축성 비염과 기관지 폐렴을 일으키는 원인체로 알려져 있다. 유전적으로 일부분 결함이 있는 약독화 된 생 Bbs 백신의 호흡기로의 직접적인 접종은 아마도 현재 사용되어지고 있는 백신을 뛰어넘는 장점을 가질 것이다. 5-enolpyruvyshikimat-3- phosphate 를 포함하고 있는 aroA 유전자 제거는 방향족 아미노산의 생합성을 중단시킨다. 본 연구에서는, 상동 재조합을 이용한 Bbs aroA 제거 변이주를 확립하였다. 이 변이주를 이용하여 마우스에서 생 점막 백신과 면역원성에 관한 연구를 실시하였다. Bbs aroA 변이주는 Bbs 야외주에 비해 호흡기와 폐에서 생존 능력이 상당히 약화 되었다. Bbs aroA 변이주는 공격접종 이 후 하루 만에 기관지 폐포 세척액에서 모두 제거되었지만, Bbs 야외주는 6 일 이 후에도 완전히 제거되지 않았다. Bbs aroA 변이주는 백신 이 후, Bbs 에 대한 높은 IgG 와 IgA 항체 수준을 유도할 수 있었다. 열처리된 사균 Bbs 항원에 의해 자극된 마우스 신장세포에서 IFN-γ 와 IL-4 분비 정도는 유의성있게 증가되었다. 열처리된 사균 Bbs 항원으로 면역화된 마우스는 호흡기로의 직접적인 Bbs 야외주 공격접종에 대항해 면역이 안된 대조군에 비해 빠르게 세균을 제거하였다. 방어효과에 있어서 점막면역의 역할을 시험하기 위해, Bbs 변이주로 면역된 마우스 기관지 폐포 세척액과 함께 배양된 Bbs 를 마우스에 접종한 결과 Bbs 변이주로 면역된 마우스에서 점막 면역이 형성된 것을 확인 하였다. 장기간 방어 실험에서, 면역화된 마우스는 2 차 추가접종 이후 3 달동안 여전히 높은 수준의 항체가를 유지하였고 Bbs 감염을 방어하였다. Bbs aroA 변이주로 면역화된 마우스는 폐의 염증 감소와 낮은 평균 폐 병변 지수를 보여주었다. 돼지모델 실험에서, Bbs aroA 변이주로 면역화 된 돼지에서는 Bbs 에 대해 높은 혈청 IgA 와 IgG 수준이 유도되었고 살아있는 Bbs 의 수는 감소하였다. 뿐만 아니라, Bbs 야외주로 공격접종 후에도 폐의 염증이 감소되는 것이 나타났다. 이러한 결과를 종합하여 보면, Bbs aroA 변이주는 생 점막 백신으로 가능성이 있으며, 이종성 항원을 위한 벡터로 사용 가능성이 있다. 돼지에서 돼지 써코 바이러스 2 형에 의해 발생하는 이유후전신성소모성 증후군은 근래에 발생하기 시작한 질병으로 돼지 산업에 경제적인 손실을 일으킨다. 본 연구에서는, Bbs-MCP (돼지 써코 바이러스 2 형 major capsid protein(MCP)을 발현시키기 위해 사용된 Bbs aroA 변이주)의 발현을 수행하였으며,이 것을 생 백신 매개체로 사용하였다. 생 Bbs-MCP 로 면역된 마우스에서 효소결합 면역흡수 분석법 (ELISA)을 통해 혈청 시료에서 돼지 써코바이러스 2 형에 대한 성공적인 항체 생성을 확인하였다. Bbs-MCP 로 면역된 돼지에서도 돼지 써코바이러스 2 형에 대한 항체가 생성되었고, 돼지 써코바이러스 2 형 공격접종 후에 조직내에서 바이러스 DNA 의 감소가 관찰되었다. 이러한 결과들을 종합하여 보면, Bbs-MCP 는 돼지 써코바이러스 2 형 감염에 대한 생 점막 백신으로 활용 가능성이 있다.
Bordetella bronchiseptica (Bbs) is able to infect a large number of host species and is the etiological agent of mild and non-progressive atrophic rhinitis and bronchopneumonia in swine. A genetically-de?ned, rationally attenuated live Bbs vaccine that can be administered directly to the respiratory...
Bordetella bronchiseptica (Bbs) is able to infect a large number of host species and is the etiological agent of mild and non-progressive atrophic rhinitis and bronchopneumonia in swine. A genetically-de?ned, rationally attenuated live Bbs vaccine that can be administered directly to the respiratory tract may have advantages over currently avail￢able vaccines. Mutation of the aroA gene, encoding 5-enolpyruvyshikimate-3-phosphate synthase, disrupts the biosynthesis of aromatic amino acids. In this study, the construction of a Bbs aroA mutant using homologous recombination was done. This strain was used as a live mucosal vaccine and investigated its immunogenicity in mice. Compared to Bbs wild type, the Bbs aroA mutant was significantly attenuated in its ability for colonization of the respiratory tract and lungs. The Bbs aroA mutant in the bronchoalveolar lavage (BAL) and the lungs were cleared by day 1, whereas, Bbs wild type were not cleared until day 6. The Bbs aroA mutant was able to induce the high level of IgG and IgA antibodies against Bbs after vaccination. The level of IFN-? and IL-4 secretion of immunized spleenocytes stimulated by heat-killed Bbs antigen was significantly increased. After Bbs wild type respiratory challenge, those immunized mice eradicated the bacterial infection significantly faster than control mice. To examine the role of mucosal immunity in protection, mice were infected with preparation of Bbs which had been incubated with immunized BAL. This data showed mucosal immunity might play an important role in protective immunity. For long-term protection, immunized mice after second boosting 3 months still remained significantly high level of antibodies and protected Bbs infection. Mice were immunized with Bbs aroA mutant showed the reduction of inflammation in lung and low mean lung lesion scores. In pig experiment, pigs immunized with Bbs aroA mutant induced significantly high serum IgA and IgG antibodies level response to Bbs, reduced the total of viable Bbs and showed less inflammation in lung after challenge with Bbs wild type. These results demonstrated that this strain, Bbs aroA mutant, could be used as a candidate for a live mucosal vaccine and vector for heterologous antigens. Post-weaning multisystemic wasting syndrome caused by porcine circovirus type 2 (PCV2) in pigs is an emerging disease and may cause the economic losses to porcine industry. In this study, the expression of PCV2 major capsid protein (MCP) in Bbs aroA mutant strain (Bbs - MCP) was done and used this as a live vaccine vehicle. Antibodies against PCV2 were successfully induced in serum samples as determined using ELISA in mice immunized with live Bbs - MCP. In pigs immunized with Bbs - MCP, the antibodies against to PCV2 were produced and a decrease of viral DNA in most of tissues was observed. When consider these results, Bbs - MCP may be a good candidate for the development of a live mucosal vaccine against PCV2 infection.
Bordetella bronchiseptica (Bbs) is able to infect a large number of host species and is the etiological agent of mild and non-progressive atrophic rhinitis and bronchopneumonia in swine. A genetically-de?ned, rationally attenuated live Bbs vaccine that can be administered directly to the respiratory tract may have advantages over currently avail￢able vaccines. Mutation of the aroA gene, encoding 5-enolpyruvyshikimate-3-phosphate synthase, disrupts the biosynthesis of aromatic amino acids. In this study, the construction of a Bbs aroA mutant using homologous recombination was done. This strain was used as a live mucosal vaccine and investigated its immunogenicity in mice. Compared to Bbs wild type, the Bbs aroA mutant was significantly attenuated in its ability for colonization of the respiratory tract and lungs. The Bbs aroA mutant in the bronchoalveolar lavage (BAL) and the lungs were cleared by day 1, whereas, Bbs wild type were not cleared until day 6. The Bbs aroA mutant was able to induce the high level of IgG and IgA antibodies against Bbs after vaccination. The level of IFN-? and IL-4 secretion of immunized spleenocytes stimulated by heat-killed Bbs antigen was significantly increased. After Bbs wild type respiratory challenge, those immunized mice eradicated the bacterial infection significantly faster than control mice. To examine the role of mucosal immunity in protection, mice were infected with preparation of Bbs which had been incubated with immunized BAL. This data showed mucosal immunity might play an important role in protective immunity. For long-term protection, immunized mice after second boosting 3 months still remained significantly high level of antibodies and protected Bbs infection. Mice were immunized with Bbs aroA mutant showed the reduction of inflammation in lung and low mean lung lesion scores. In pig experiment, pigs immunized with Bbs aroA mutant induced significantly high serum IgA and IgG antibodies level response to Bbs, reduced the total of viable Bbs and showed less inflammation in lung after challenge with Bbs wild type. These results demonstrated that this strain, Bbs aroA mutant, could be used as a candidate for a live mucosal vaccine and vector for heterologous antigens. Post-weaning multisystemic wasting syndrome caused by porcine circovirus type 2 (PCV2) in pigs is an emerging disease and may cause the economic losses to porcine industry. In this study, the expression of PCV2 major capsid protein (MCP) in Bbs aroA mutant strain (Bbs - MCP) was done and used this as a live vaccine vehicle. Antibodies against PCV2 were successfully induced in serum samples as determined using ELISA in mice immunized with live Bbs - MCP. In pigs immunized with Bbs - MCP, the antibodies against to PCV2 were produced and a decrease of viral DNA in most of tissues was observed. When consider these results, Bbs - MCP may be a good candidate for the development of a live mucosal vaccine against PCV2 infection.
AI-Helper
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.