인터루킨-32 (IL-32)는 최근 IL-18 발현을 유도하는 염증성 사이토카인으로 밝혀졌으며 자가 면역 질환과 염증성 질환에서 중요한 역할을 하는 것으로도 알려져 있다. 본 논문에서는, IL-32 특이적인 항체를 제작하고 위암 환자에서의 IL-32 발현을 연구하였다. 또한 Sandwich ELISA system을 확립하고 이것을 응용하여 mammalian cell의 상층액과 위암환자의 혈청으로부터 IL-32를 탐지하였다. goat anti-IL-32 다클론항체로 코팅시킨 microtiter plate에 IL-32α 재조합단백질과 biotinylated KU32-52를 추가하여 Sandwich immunoassay를 최적화하였다. 확립된 ...
인터루킨-32 (IL-32)는 최근 IL-18 발현을 유도하는 염증성 사이토카인으로 밝혀졌으며 자가 면역 질환과 염증성 질환에서 중요한 역할을 하는 것으로도 알려져 있다. 본 논문에서는, IL-32 특이적인 항체를 제작하고 위암 환자에서의 IL-32 발현을 연구하였다. 또한 Sandwich ELISA system을 확립하고 이것을 응용하여 mammalian cell의 상층액과 위암환자의 혈청으로부터 IL-32를 탐지하였다. goat anti-IL-32 다클론항체로 코팅시킨 microtiter plate에 IL-32α 재조합단백질과 biotinylated KU32-52를 추가하여 Sandwich immunoassay를 최적화하였다. 확립된 ELISA system은 매우 특이적이며, 최대 3000 pg/ml 범주에서 80 pg/ml (mean ±3SD of zero calibrator)의 최소 검출 한계치를 가진다. 또한 hIL-1α, hIL-1β, hIL-2, hIL-6, hIL-8, hIL-10, hIL-18 그리고 hTNF-α와 같은 사이토카인들과 교차 반응을 하지 않았다. Intra-assay 의 변이계수는 18.5%에서 4.6%까지, Inter-assay 의 변이계수는 23%에서 9%까지 이다. 위암환자의 혈청에서 탐지된 IL-32의 평균치는 189 pg/ml로 대조군의 평균인 109 pg/ml에 비해 높게 나타났다. Microtubule inhibitor인 Paclitaxel은 이미 다양한 암 세포의 죽음(apoptosis)을 유도하는 것으로 알려져 있으며 대표적인 자궁경부암 cell line인 CaSki, SiHa cell에 Paclitaxel을 처리한 뒤 cell viability assay를 통해 Paclitaxel의 영향으로 세포의 성장이 저해됨을 확인하였다. 또한 대조군 세포에 비해 Paclitaxel이 처리된 자궁경부암 세포에게서 분비된 IL-32의 양이 약간 증가된다는 것을 확립된 sandwich ELISA로 통해 확인하였다. 본 연구를 통해 serum 내에서 발현된 IL-32는 확립된 ELISA system을 이용하여 탐지 가능하고, 단일클론항체 KU32-09를 이용한 조직면역염색법을 통해서 위암 환자에서 발현되고 분비되는 IL-32를 탐지할 수 있도록 하였다.
인터루킨-32 (IL-32)는 최근 IL-18 발현을 유도하는 염증성 사이토카인으로 밝혀졌으며 자가 면역 질환과 염증성 질환에서 중요한 역할을 하는 것으로도 알려져 있다. 본 논문에서는, IL-32 특이적인 항체를 제작하고 위암 환자에서의 IL-32 발현을 연구하였다. 또한 Sandwich ELISA system을 확립하고 이것을 응용하여 mammalian cell의 상층액과 위암환자의 혈청으로부터 IL-32를 탐지하였다. goat anti-IL-32 다클론항체로 코팅시킨 microtiter plate에 IL-32α 재조합단백질과 biotinylated KU32-52를 추가하여 Sandwich immunoassay를 최적화하였다. 확립된 ELISA system은 매우 특이적이며, 최대 3000 pg/ml 범주에서 80 pg/ml (mean ±3SD of zero calibrator)의 최소 검출 한계치를 가진다. 또한 hIL-1α, hIL-1β, hIL-2, hIL-6, hIL-8, hIL-10, hIL-18 그리고 hTNF-α와 같은 사이토카인들과 교차 반응을 하지 않았다. Intra-assay 의 변이계수는 18.5%에서 4.6%까지, Inter-assay 의 변이계수는 23%에서 9%까지 이다. 위암환자의 혈청에서 탐지된 IL-32의 평균치는 189 pg/ml로 대조군의 평균인 109 pg/ml에 비해 높게 나타났다. Microtubule inhibitor인 Paclitaxel은 이미 다양한 암 세포의 죽음(apoptosis)을 유도하는 것으로 알려져 있으며 대표적인 자궁경부암 cell line인 CaSki, SiHa cell에 Paclitaxel을 처리한 뒤 cell viability assay를 통해 Paclitaxel의 영향으로 세포의 성장이 저해됨을 확인하였다. 또한 대조군 세포에 비해 Paclitaxel이 처리된 자궁경부암 세포에게서 분비된 IL-32의 양이 약간 증가된다는 것을 확립된 sandwich ELISA로 통해 확인하였다. 본 연구를 통해 serum 내에서 발현된 IL-32는 확립된 ELISA system을 이용하여 탐지 가능하고, 단일클론항체 KU32-09를 이용한 조직면역염색법을 통해서 위암 환자에서 발현되고 분비되는 IL-32를 탐지할 수 있도록 하였다.
Interleukin (IL)-32 is a recently identified proinflammatory cytokine which is one of IL-18 inducible genes and plays an important role in autoimmune and inflammatory diseases. We produced antibodies reactive to IL-32 and studied the expression of IL-32 in human stomach cancer. We have established a...
Interleukin (IL)-32 is a recently identified proinflammatory cytokine which is one of IL-18 inducible genes and plays an important role in autoimmune and inflammatory diseases. We produced antibodies reactive to IL-32 and studied the expression of IL-32 in human stomach cancer. We have established a sandwich ELISA and detected the IL-32 secreted from K-562 cells stably transfected with IL-32 and in the sera of stomach cancer patients by a sandwich ELISA using a monoclonal antibody KU32-52 and a polyclonal antibody. In order to optimize a sandwich immunoassay, recombinant IL-32α was added, followed by the addition of a biotinylated KU32-52 into microtiter plate wells precoated with a goat anti-IL-32 antibody. The bound biotinylated KU32-52 was probed with a streptavidin conjugated to HRP. This sandwich ELISA was highly specific and had a minimal detection limit of 80 pg/ml (mean ±3SD of zero calibrator) and measuring range of up to 3000 pg/ml. This ELISA had no cross-reaction with other cytokines such as hIL-1α, hIL-1ß, hIL-2, hIL-6, hIL-8, hIL-10, hIL-18, and hTNF-α. Intra-assay coefficients of variation were 18.5 to 4.6% (n=10) and inter-assay coefficients were 23 to 9% (n=10). The average IL-32 level in the sera of 16 stomach cancer patients (189 pg/ml) was higher than that of 12 healthy control men (109 pg/ml). This sandwich ELISA was applied to evaluate the secreted IL-32 in Paclitaxel-treated cervical cancer. The level of IL-32 secreted or excluded from Paclitaxel-treated cells was increased a little compared to control, suggesting that IL-32 might be associated with Paclitaxel-induced apoptosis in cervical cancer cells.
Our results indicate that serum IL-32 level can be detected by using an established ELISA and this immunoassay and mAb KU32-09 specific for immunohistochemistry can be used in the detection of expressed and secreted IL-32 and in stomach cancer patients.
Interleukin (IL)-32 is a recently identified proinflammatory cytokine which is one of IL-18 inducible genes and plays an important role in autoimmune and inflammatory diseases. We produced antibodies reactive to IL-32 and studied the expression of IL-32 in human stomach cancer. We have established a sandwich ELISA and detected the IL-32 secreted from K-562 cells stably transfected with IL-32 and in the sera of stomach cancer patients by a sandwich ELISA using a monoclonal antibody KU32-52 and a polyclonal antibody. In order to optimize a sandwich immunoassay, recombinant IL-32α was added, followed by the addition of a biotinylated KU32-52 into microtiter plate wells precoated with a goat anti-IL-32 antibody. The bound biotinylated KU32-52 was probed with a streptavidin conjugated to HRP. This sandwich ELISA was highly specific and had a minimal detection limit of 80 pg/ml (mean ±3SD of zero calibrator) and measuring range of up to 3000 pg/ml. This ELISA had no cross-reaction with other cytokines such as hIL-1α, hIL-1ß, hIL-2, hIL-6, hIL-8, hIL-10, hIL-18, and hTNF-α. Intra-assay coefficients of variation were 18.5 to 4.6% (n=10) and inter-assay coefficients were 23 to 9% (n=10). The average IL-32 level in the sera of 16 stomach cancer patients (189 pg/ml) was higher than that of 12 healthy control men (109 pg/ml). This sandwich ELISA was applied to evaluate the secreted IL-32 in Paclitaxel-treated cervical cancer. The level of IL-32 secreted or excluded from Paclitaxel-treated cells was increased a little compared to control, suggesting that IL-32 might be associated with Paclitaxel-induced apoptosis in cervical cancer cells.
Our results indicate that serum IL-32 level can be detected by using an established ELISA and this immunoassay and mAb KU32-09 specific for immunohistochemistry can be used in the detection of expressed and secreted IL-32 and in stomach cancer patients.
주제어
#IL-32
#ELISA
#IHC
#monoclonal antibody
#stomach cancer
학위논문 정보
저자
서은희
학위수여기관
건국대학교 대학원
학위구분
국내석사
학과
생명공학과 Immunology, Cell biochemistry
지도교수
윤도영
발행연도
2009
총페이지
vi, 37 p.
키워드
IL-32,
ELISA,
IHC,
monoclonal antibody,
stomach cancer
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