Tetracycline inducible retrovirus vector system을 이용한 사람의 적혈구 생산촉진인자가 발현되는 형질전환 닭의 개발 Development of transgenic chockens expressing human erythropoietin using tetracycline inducile retrovirus vector system원문보기
적혈구를 생산하는 human erythropoietin (hEPO)은 간세포의 유지와 증식, 그리고 분화를 조절하는 당단백 호르몬으로서 중증 빈혈, 신질환, 류마티스 관절염, 다발성 골수종 치료등에 사용된다. hEPO를 대량생산하는 형질전환 동물을 개발하는데 있어서 가장 큰 문제는 외래 유전자의 지속적인 과다발현에 의한 형질전환 동물의 생리적인 부작용이다. 이에 본 연구에서는 외래 유전자의 지속적 과다발현에 의한 개체의 생리적인 부작용을 최소화하기 위한 tet-on system이 적용된 retrovirus vector를 이용한 hEPO가 발현되는 형질전환 닭의 개발에 관한 연구를 수행하였다. 1) 재조합 hEPO 유전자의 전이와 발현 조절을 위해서 ...
적혈구를 생산하는 human erythropoietin (hEPO)은 간세포의 유지와 증식, 그리고 분화를 조절하는 당단백 호르몬으로서 중증 빈혈, 신질환, 류마티스 관절염, 다발성 골수종 치료등에 사용된다. hEPO를 대량생산하는 형질전환 동물을 개발하는데 있어서 가장 큰 문제는 외래 유전자의 지속적인 과다발현에 의한 형질전환 동물의 생리적인 부작용이다. 이에 본 연구에서는 외래 유전자의 지속적 과다발현에 의한 개체의 생리적인 부작용을 최소화하기 위한 tet-on system이 적용된 retrovirus vector를 이용한 hEPO가 발현되는 형질전환 닭의 개발에 관한 연구를 수행하였다. 1) 재조합 hEPO 유전자의 전이와 발현 조절을 위해서 tetracycline inducible expression vector system을 이용하였는데 이 system은 in vitro와 in vivo에서 전이된 hEPO 유전자의 발현을 성공적으로 조절하였다. 2) In vitro에서 발현된 hEPO는 시판되고 있는 CHO세포 유래의 재조합 hEPO보다 더 높은 생물학적 활성을 나타내는 것으로 확인되었다. 3) 고농도로 농축한 virus를 계란의 배반엽층에 미세주입하여 101개 중에서 11마리가 부화하였으며 그 중 9마리가 형질전환 개체로 확인되었으며, 8마리의 수탉에서 생식세포에 hEPO 유전자가 전이되었음을 확인하였다. 4) 형질전환 된 닭의 각 개체에서 hEPO의 발현은 doxycycline이 존재할 경우, 100 ～300 IU/ml의 농도로 나타났으며, doxycycline이 존재하지 않을 경우 hEPO의 발현이 점차 감소하는 것으로 나타났다. 또한 47번, 53번 형질전환 닭의 경우, 혈액에 함유된 hEPO의 생물학적 활성이 시판되고 있는 CHO세포 유래의 재조합 hEPO보다 높은 것으로 확인되었다.
적혈구를 생산하는 human erythropoietin (hEPO)은 간세포의 유지와 증식, 그리고 분화를 조절하는 당단백 호르몬으로서 중증 빈혈, 신질환, 류마티스 관절염, 다발성 골수종 치료등에 사용된다. hEPO를 대량생산하는 형질전환 동물을 개발하는데 있어서 가장 큰 문제는 외래 유전자의 지속적인 과다발현에 의한 형질전환 동물의 생리적인 부작용이다. 이에 본 연구에서는 외래 유전자의 지속적 과다발현에 의한 개체의 생리적인 부작용을 최소화하기 위한 tet-on system이 적용된 retrovirus vector를 이용한 hEPO가 발현되는 형질전환 닭의 개발에 관한 연구를 수행하였다. 1) 재조합 hEPO 유전자의 전이와 발현 조절을 위해서 tetracycline inducible expression vector system을 이용하였는데 이 system은 in vitro와 in vivo에서 전이된 hEPO 유전자의 발현을 성공적으로 조절하였다. 2) In vitro에서 발현된 hEPO는 시판되고 있는 CHO세포 유래의 재조합 hEPO보다 더 높은 생물학적 활성을 나타내는 것으로 확인되었다. 3) 고농도로 농축한 virus를 계란의 배반엽층에 미세주입하여 101개 중에서 11마리가 부화하였으며 그 중 9마리가 형질전환 개체로 확인되었으며, 8마리의 수탉에서 생식세포에 hEPO 유전자가 전이되었음을 확인하였다. 4) 형질전환 된 닭의 각 개체에서 hEPO의 발현은 doxycycline이 존재할 경우, 100 ～300 IU/ml의 농도로 나타났으며, doxycycline이 존재하지 않을 경우 hEPO의 발현이 점차 감소하는 것으로 나타났다. 또한 47번, 53번 형질전환 닭의 경우, 혈액에 함유된 hEPO의 생물학적 활성이 시판되고 있는 CHO세포 유래의 재조합 hEPO보다 높은 것으로 확인되었다.
The glycoprotein hormone human erythropoietin (hEPO) is produced primarily by the kidney, and is the most important factor regulating red blood cell (RBC) production. Due to its strong demand in pharmaceutical area resulting from irreplaceable role in hematopoiesis, the price is tremendously high. I...
The glycoprotein hormone human erythropoietin (hEPO) is produced primarily by the kidney, and is the most important factor regulating red blood cell (RBC) production. Due to its strong demand in pharmaceutical area resulting from irreplaceable role in hematopoiesis, the price is tremendously high. In this study, we tried to produce hEPO from transgenic chickens by injection of concentrated retrovirus solution beneath the blastoderm of freshly laid eggs (stage X). Because it is generally believed that constitutive over-expression of some cytokine genes in the transgenic animals may cause serious physiological disturbances, the vectors were designed to express the hEPO gene in the presence of tetracycline. When the G0 transgenic chicken was fed with doxycycline (0.5 mg per 1 gram of feed), a tetracycline derivative, hEPO concentration of the transgenic chicken blood was 350 IU/㎖. As we expected, the same chicken without doxycycline treatment showed almost no hEPO expression. No evident physiological disturbances have been observed and we demonstrated successful germline transmission of the transgene by generating G1 progeny from a normal hen mated with a transgenic rooster. The biological activity of the recombinant hEPO was comparable to its commercially derived CHO cell counterpart. The resulting tetracycline inducible vector system may be helpful in solving serious physiological disturbance problems which have been a major obstacle in successful production of transgenic animals.
The glycoprotein hormone human erythropoietin (hEPO) is produced primarily by the kidney, and is the most important factor regulating red blood cell (RBC) production. Due to its strong demand in pharmaceutical area resulting from irreplaceable role in hematopoiesis, the price is tremendously high. In this study, we tried to produce hEPO from transgenic chickens by injection of concentrated retrovirus solution beneath the blastoderm of freshly laid eggs (stage X). Because it is generally believed that constitutive over-expression of some cytokine genes in the transgenic animals may cause serious physiological disturbances, the vectors were designed to express the hEPO gene in the presence of tetracycline. When the G0 transgenic chicken was fed with doxycycline (0.5 mg per 1 gram of feed), a tetracycline derivative, hEPO concentration of the transgenic chicken blood was 350 IU/㎖. As we expected, the same chicken without doxycycline treatment showed almost no hEPO expression. No evident physiological disturbances have been observed and we demonstrated successful germline transmission of the transgene by generating G1 progeny from a normal hen mated with a transgenic rooster. The biological activity of the recombinant hEPO was comparable to its commercially derived CHO cell counterpart. The resulting tetracycline inducible vector system may be helpful in solving serious physiological disturbance problems which have been a major obstacle in successful production of transgenic animals.
AI-Helper
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.