지난 30년동안 여러 많은 연구자들은 암을 극복하기 위해 노력을 기울여 왔다. 그러나 현재 암을 치유하기위한 방법으로는 수술이외에 큰 효과를 나타내지 못하는 것으로 알려져 있다. 이러한 수술외 방법에는 화학요법, 방사선요법등이 있지만, 이들 치료법은 부작용이 심각하여 치료의 효과적인 방법이 되지 않을 수도 있다. 최근 이러한 폐해를 줄이고 환자의 더 나은 삶의 질을 부여하기 위한 면역세포치료법이 대두되어 많은 발전이 이루어지고 있는 실정이다. 본 연구는 ...
지난 30년동안 여러 많은 연구자들은 암을 극복하기 위해 노력을 기울여 왔다. 그러나 현재 암을 치유하기위한 방법으로는 수술이외에 큰 효과를 나타내지 못하는 것으로 알려져 있다. 이러한 수술외 방법에는 화학요법, 방사선요법등이 있지만, 이들 치료법은 부작용이 심각하여 치료의 효과적인 방법이 되지 않을 수도 있다. 최근 이러한 폐해를 줄이고 환자의 더 나은 삶의 질을 부여하기 위한 면역세포치료법이 대두되어 많은 발전이 이루어지고 있는 실정이다. 본 연구는 림프종 및 각종 암종에 대한 자기 활성화 림프구의 영향을 전임상 및 임상 연구를 통해 수행하였다. 전임상의 연구를 위하여 정상 또는 암환자로 부터 혈액을 공여받아 14일간 배양하여 배양된 세포의 성상을 확인하고, 암세포에 대한 활성화된 림프구의 영향을 조사하고, 림프종세포로 종괴를 유발시킨 6주령의 BALB/c 누드마우스에 사람의 활성화된 림프구를 정맥투여하여 그 영향을 조사하였고, 임상시험을 위해서 임상시험중인 림프종 환자의 혈액을 공여받아 배양하고, 14일후 전남대 화순병원을 통해 치료제를 6회 정맥 투여하고 CT를 통해 그 영향을 조사하였다. 세포의 성상을 조사하기 위해서 Flow cytometry로 분석하였으며, 암세포에 대한 자기활성화 림프구의 독성효과는 LDH release법과 Calceim AM형광물질을 이용하여 TeraScan으로 분석하였다. 동물실험에서는 종괴의 크기와 마우스의 생존율을 조사하였다. 연구결과는 다음과 같다. 1. 본 실험의 배양법으로 정상인과 암환자의 혈액내 PBMC를 분리하여 배양한 결과 활성화 된 림프구의 성상은 Natural Killer(NK)세포인 경우 27± 4.08%, NKT세포의 경우 35± 4.4%, T세포의 경우 39± 4.1% 이었다. 2. 혈액공여자의 PBMC를 분리하여 배양하여 일별조사하면 NK세포의 배양된 세포내 분량이 점차 증가하는 경향을 보이며, T세포의 경우 점차 줄어드는 현상을 보였다. 3. 배양된 세포의 조성에 따라 K562(Leukemia cell line)세포에 대한 세포독성효과는 NK/NKT세포의 분량이 24±3.2/38±2.4%, T세포의 분량이 42±3.1% 일때 최고값을 나타내었다. 4. NK/NKT세포의 분량이 69±2.9/19±3.1%, T세포의 분량이 10±1.1%의 림프구(A)와 NK/NKT세포의 분량이 24±3.2/38±2.4%, T세포의 분량이 42±3.1%의 활성화된 림프구(B)가 기타 암세포에 미치는 영향을 조사한 결과, 각각 40:1의 비율로 반응시켰을 때 암세포에 대한 세포독성효과가 높음을 보였고 B실험군의 경우 A의 실험군의 각종 암세포에 대한 세포독성효과 보다 크게 나타났으나, 암세포의 종류에 따라 그 효과는 다르게 나타남을 보였다. 5. 한국의 폐암세포주에 대한 자기 활성화림프구의 세포독성효과는 세포주에 따라 각기 다른 양상을 보이고 NK세포의 분량이 많을 수록 높은 세포독성효과를 보였다. 6. 림프종의 종괴를 유발시킨 마우스에 자기활성화림프구를 투여하면 종괴의 크기가 줄어들며, 그 생존율에도 영향을 준다. 7. 림프종 환자의 혈액을 활성화시키고 임상시험의 과정에 따라 투여한 결과, 투여 전에 크기가 커지고 종괴의 수가 증가하던 환자에서 종괴의 크기가 줄어들고 또한 사라짐을 보였다. 또한 치료를 위해 자기 활성화 림프구의 투여전과 6회 투여후의 환자에서의 병리학적 변화는 없었다. 이상의 결과를 종합하여 볼 때, 자기 활성화림프구 세포치료제는 NK세포와 NKT세포 그리고 T세포가 분량에 따라, 그 효과는 다르며, 효과의 증가를 위한 치료제 내의 세포 분량이 적정 조성으로 배양되어야 하며, 그리고 각종 암세포에 대하여 세포독성효과도 증가함을 보인다. 동물실험의 경우 활성화된 NK세포로 인하여 생존율 분석의 어려운 점을 감안하여 보더라도 종괴의 크기 감소나 생존율에 큰 영향을 주며, 임상시험에서도 자기활성화림프구는 환자의 QOL(Quality Of Life)의 향상과 종괴의 감소 및 생존율의 증가에 큰 영향을 미치며, 또한 항암제 및 방사선치료등으로 유발되는 심각한 부작용에서 벗어나 더 나은 암치료법으로서 적용이 가능하다.
지난 30년동안 여러 많은 연구자들은 암을 극복하기 위해 노력을 기울여 왔다. 그러나 현재 암을 치유하기위한 방법으로는 수술이외에 큰 효과를 나타내지 못하는 것으로 알려져 있다. 이러한 수술외 방법에는 화학요법, 방사선요법등이 있지만, 이들 치료법은 부작용이 심각하여 치료의 효과적인 방법이 되지 않을 수도 있다. 최근 이러한 폐해를 줄이고 환자의 더 나은 삶의 질을 부여하기 위한 면역세포치료법이 대두되어 많은 발전이 이루어지고 있는 실정이다. 본 연구는 림프종 및 각종 암종에 대한 자기 활성화 림프구의 영향을 전임상 및 임상 연구를 통해 수행하였다. 전임상의 연구를 위하여 정상 또는 암환자로 부터 혈액을 공여받아 14일간 배양하여 배양된 세포의 성상을 확인하고, 암세포에 대한 활성화된 림프구의 영향을 조사하고, 림프종세포로 종괴를 유발시킨 6주령의 BALB/c 누드마우스에 사람의 활성화된 림프구를 정맥투여하여 그 영향을 조사하였고, 임상시험을 위해서 임상시험중인 림프종 환자의 혈액을 공여받아 배양하고, 14일후 전남대 화순병원을 통해 치료제를 6회 정맥 투여하고 CT를 통해 그 영향을 조사하였다. 세포의 성상을 조사하기 위해서 Flow cytometry로 분석하였으며, 암세포에 대한 자기활성화 림프구의 독성효과는 LDH release법과 Calceim AM 형광물질을 이용하여 TeraScan으로 분석하였다. 동물실험에서는 종괴의 크기와 마우스의 생존율을 조사하였다. 연구결과는 다음과 같다. 1. 본 실험의 배양법으로 정상인과 암환자의 혈액내 PBMC를 분리하여 배양한 결과 활성화 된 림프구의 성상은 Natural Killer(NK)세포인 경우 27± 4.08%, NKT세포의 경우 35± 4.4%, T세포의 경우 39± 4.1% 이었다. 2. 혈액공여자의 PBMC를 분리하여 배양하여 일별조사하면 NK세포의 배양된 세포내 분량이 점차 증가하는 경향을 보이며, T세포의 경우 점차 줄어드는 현상을 보였다. 3. 배양된 세포의 조성에 따라 K562(Leukemia cell line)세포에 대한 세포독성효과는 NK/NKT세포의 분량이 24±3.2/38±2.4%, T세포의 분량이 42±3.1% 일때 최고값을 나타내었다. 4. NK/NKT세포의 분량이 69±2.9/19±3.1%, T세포의 분량이 10±1.1%의 림프구(A)와 NK/NKT세포의 분량이 24±3.2/38±2.4%, T세포의 분량이 42±3.1%의 활성화된 림프구(B)가 기타 암세포에 미치는 영향을 조사한 결과, 각각 40:1의 비율로 반응시켰을 때 암세포에 대한 세포독성효과가 높음을 보였고 B실험군의 경우 A의 실험군의 각종 암세포에 대한 세포독성효과 보다 크게 나타났으나, 암세포의 종류에 따라 그 효과는 다르게 나타남을 보였다. 5. 한국의 폐암세포주에 대한 자기 활성화림프구의 세포독성효과는 세포주에 따라 각기 다른 양상을 보이고 NK세포의 분량이 많을 수록 높은 세포독성효과를 보였다. 6. 림프종의 종괴를 유발시킨 마우스에 자기활성화림프구를 투여하면 종괴의 크기가 줄어들며, 그 생존율에도 영향을 준다. 7. 림프종 환자의 혈액을 활성화시키고 임상시험의 과정에 따라 투여한 결과, 투여 전에 크기가 커지고 종괴의 수가 증가하던 환자에서 종괴의 크기가 줄어들고 또한 사라짐을 보였다. 또한 치료를 위해 자기 활성화 림프구의 투여전과 6회 투여후의 환자에서의 병리학적 변화는 없었다. 이상의 결과를 종합하여 볼 때, 자기 활성화림프구 세포치료제는 NK세포와 NKT세포 그리고 T세포가 분량에 따라, 그 효과는 다르며, 효과의 증가를 위한 치료제 내의 세포 분량이 적정 조성으로 배양되어야 하며, 그리고 각종 암세포에 대하여 세포독성효과도 증가함을 보인다. 동물실험의 경우 활성화된 NK세포로 인하여 생존율 분석의 어려운 점을 감안하여 보더라도 종괴의 크기 감소나 생존율에 큰 영향을 주며, 임상시험에서도 자기활성화림프구는 환자의 QOL(Quality Of Life)의 향상과 종괴의 감소 및 생존율의 증가에 큰 영향을 미치며, 또한 항암제 및 방사선치료등으로 유발되는 심각한 부작용에서 벗어나 더 나은 암치료법으로서 적용이 가능하다.
This study has been undertaken to investigated the efffects of activated autologous lymphocytes to lymphoma and various cancer cell lines in the pre-clinical and clinical research. In the pre-clinical research, PBMC was cultured for 14 days obtained from peripheral blood of healthy volunteers an...
This study has been undertaken to investigated the efffects of activated autologous lymphocytes to lymphoma and various cancer cell lines in the pre-clinical and clinical research. In the pre-clinical research, PBMC was cultured for 14 days obtained from peripheral blood of healthy volunteers and cancer patients. Composition of cultured lymphocyte was analyzed by flowcytometry method, and the effects of activated lymphocytes to cancer cell lines was analyzed by LDH release and calcein AM dyeing method using Terascan. Activated human lymphocytes were injected to a tail vein of 6 weeks BALB/c nude mouse induced grafts by lymphoma cell, and the effects were investigated. For the clinical research, the blood was obtained from clinical trial volunteer lymphoma patients in Chonnam National University Hwasun Hospital (CNUHH). PBMC was cultured for 14 days, and activated autologous lymphocytes injected to patient vein in CNUHH, the effects of injections of autologous activated lymphocyte were investigated by CT. Cell composition was analyzed by flowcymety , LDH release method and Terascan(Calceim AM fluorescent substance using microscope) were used to analyze cytotoxocity of activated autologous lymphocytes to cancer cell lines. In animal experiments, size of graft and survival of mouse hans been investigated. The present results as follows,
1. In this culture method, PBMC of normal human and patient were separated and cultured, activated autologous NK cells were 27±4.08%, NKT cells were 35±4.37%, T cells were 39±4.05%.
2. NK cells tended to increased in numbers and T cells tended to decreasing in daily culture of PBMC.
3. As the cultured cell composition, cytotoxicity to K562 cell (Leukemia cell line) were the highest value at 24±3.2/38±2.4% NK/NKT cell composition and 42±3.1% T cell composition. 4. Comparative study was done to investigate the cytotoxicity to various cancer cell lines, composition of NK/NKT cell were 69±2.9/19±3.1%, T cell wes 10±1.1% (A), and NK/NKT cell were 24±3.2/38± 2.4%, T cell was 42±3.1% (B). Each formula reacted with cancer cells, and cytotoxicity was the best result in 40:1 ratio (Effector:Target). B experimental groups were more cytoxicity than A experimental groups, and the results showed different cytotoxicity depends on tumor cells.
5. Different results of cytoxicity efficiency has been shown against Korean lung cancer cell line. As distribution of lymphocytes composition was suitable, cytoxicities to lung cancer cell lines were high.
6. The survivors and the rate of reduction of size of tumor grafts of nude mouse group treatment with activated lymphocyte was higher than that of the group without treatment with activated lymphocyte.
7. Before the clinical trial, patients’ size and number of tumor grafts had been increasing. After activated autologous lymphocytes injection to patient, the size and number of tumorous edema has been reduced or disappeared. And there are not pathological changes in patients non-treated and after 6 times treated with autologous activated lymphocyte.
Considering overall results , it may be suggested that the effects to cancer cell lines are different according to composition of NK cells, NKT cells and T cells in activated lymphocytes. In animal experimentation, though hard to calculate analysis of survivals but size and number of tumor grafts in mouse effectively decrease. In clinical trial, activated autologous lymphocytes are effectively decreasing tumor size and numbers, and are increasing of patients' life. This method has very little known side effects not like chemotherapy or radiotherapy, so it improves patients' quality of life during cancer therapy. Activated autologous lymphocytes is recommended for cancer therapy.
This study has been undertaken to investigated the efffects of activated autologous lymphocytes to lymphoma and various cancer cell lines in the pre-clinical and clinical research. In the pre-clinical research, PBMC was cultured for 14 days obtained from peripheral blood of healthy volunteers and cancer patients. Composition of cultured lymphocyte was analyzed by flowcytometry method, and the effects of activated lymphocytes to cancer cell lines was analyzed by LDH release and calcein AM dyeing method using Terascan. Activated human lymphocytes were injected to a tail vein of 6 weeks BALB/c nude mouse induced grafts by lymphoma cell, and the effects were investigated. For the clinical research, the blood was obtained from clinical trial volunteer lymphoma patients in Chonnam National University Hwasun Hospital (CNUHH). PBMC was cultured for 14 days, and activated autologous lymphocytes injected to patient vein in CNUHH, the effects of injections of autologous activated lymphocyte were investigated by CT. Cell composition was analyzed by flowcymety , LDH release method and Terascan(Calceim AM fluorescent substance using microscope) were used to analyze cytotoxocity of activated autologous lymphocytes to cancer cell lines. In animal experiments, size of graft and survival of mouse hans been investigated. The present results as follows,
1. In this culture method, PBMC of normal human and patient were separated and cultured, activated autologous NK cells were 27±4.08%, NKT cells were 35±4.37%, T cells were 39±4.05%.
2. NK cells tended to increased in numbers and T cells tended to decreasing in daily culture of PBMC.
3. As the cultured cell composition, cytotoxicity to K562 cell (Leukemia cell line) were the highest value at 24±3.2/38±2.4% NK/NKT cell composition and 42±3.1% T cell composition. 4. Comparative study was done to investigate the cytotoxicity to various cancer cell lines, composition of NK/NKT cell were 69±2.9/19±3.1%, T cell wes 10±1.1% (A), and NK/NKT cell were 24±3.2/38± 2.4%, T cell was 42±3.1% (B). Each formula reacted with cancer cells, and cytotoxicity was the best result in 40:1 ratio (Effector:Target). B experimental groups were more cytoxicity than A experimental groups, and the results showed different cytotoxicity depends on tumor cells.
5. Different results of cytoxicity efficiency has been shown against Korean lung cancer cell line. As distribution of lymphocytes composition was suitable, cytoxicities to lung cancer cell lines were high.
6. The survivors and the rate of reduction of size of tumor grafts of nude mouse group treatment with activated lymphocyte was higher than that of the group without treatment with activated lymphocyte.
7. Before the clinical trial, patients’ size and number of tumor grafts had been increasing. After activated autologous lymphocytes injection to patient, the size and number of tumorous edema has been reduced or disappeared. And there are not pathological changes in patients non-treated and after 6 times treated with autologous activated lymphocyte.
Considering overall results , it may be suggested that the effects to cancer cell lines are different according to composition of NK cells, NKT cells and T cells in activated lymphocytes. In animal experimentation, though hard to calculate analysis of survivals but size and number of tumor grafts in mouse effectively decrease. In clinical trial, activated autologous lymphocytes are effectively decreasing tumor size and numbers, and are increasing of patients' life. This method has very little known side effects not like chemotherapy or radiotherapy, so it improves patients' quality of life during cancer therapy. Activated autologous lymphocytes is recommended for cancer therapy.
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