고병원성 조류 인플루엔자바이러스 A/H5N1 은 전 세계적으로 인플루엔자 대유행을 초래할 수 있는 주요한 병원체이다. 현재 이에 대한 혈청학적 진단을 위하여 마이크로 중화항체시험법이 주로 이용되고 있으나, 이 방법은 고병원성 wildtype 바이러스와 3단계 생물안전밀폐실험실이 요구되어 실험자의 안전성과 접근성이 제한되는 단점이 있다. 이에, 본 연구에서는 고병원성 H5N1 바이러스의 HA 유전자를 포함하는 비감염성 pseudotype virus 를 이용한 중화항체시험법을 확립하고자 하였다. 2003년 및 2006년 국내 가금류 (닭) 로부터 분리된 고병원성 A/H5N1 바이러스 2주 [A/chicken/Korea/ES/03 (ES, clade 2.5) and A/chicken/Korea/IS/2006 (...
고병원성 조류 인플루엔자바이러스 A/H5N1 은 전 세계적으로 인플루엔자 대유행을 초래할 수 있는 주요한 병원체이다. 현재 이에 대한 혈청학적 진단을 위하여 마이크로 중화항체시험법이 주로 이용되고 있으나, 이 방법은 고병원성 wildtype 바이러스와 3단계 생물안전밀폐실험실이 요구되어 실험자의 안전성과 접근성이 제한되는 단점이 있다. 이에, 본 연구에서는 고병원성 H5N1 바이러스의 HA 유전자를 포함하는 비감염성 pseudotype virus 를 이용한 중화항체시험법을 확립하고자 하였다. 2003년 및 2006년 국내 가금류 (닭) 로부터 분리된 고병원성 A/H5N1 바이러스 2주 [A/chicken/Korea/ES/03 (ES, clade 2.5) and A/chicken/Korea/IS/2006 (IS, clade 2.2)] 로부터 hemagglutinin (HA) 유전자 1.7 kb 를 증폭하여 클로닝하였다. 293T 세포와 lentiviral vector 시스템에서 확보된 고병원성 A/H5N1 의 HA 유전자를 포함하는 pseudotype virus 가 55 kDa 의 HA 단백질을 발현함을 western blotting 을 통해 확인하였고, (RT)-PCR 을 통해 감염성이 없음을 확인하였다. 이후, pseudotype virus 를 이용하여 세포수는 2x105 cells/㎖, 바이러스 감염농도는 100,000 RLU/㎖ 이 중화항체시험법에 최적조건임을 확인하였다. 총 13개의 혈청을 대상으로 wildtype 바이러스를 이용하는 기존 중화항체시험법과의 효능을 비교한 결과, 두 시험법간의 상관성이 ES 바이러스에 대해서는 89.3%, IS 바이러스에 대해서는 88.4%로 나타났다. 본 연구를 통해 국내에서의 고병원성 조류 인플루엔자바이러스 A/H5N1에 대한 보다 안전하고 감도가 높은 혈청학적 검사법을 확립하였으며, 본 시험법을 이용함으로 향후 신속한 진단을 통한 환자 관리 대책의 과학적 근거자료로서 활용될 수 있으리라 본다.
고병원성 조류 인플루엔자바이러스 A/H5N1 은 전 세계적으로 인플루엔자 대유행을 초래할 수 있는 주요한 병원체이다. 현재 이에 대한 혈청학적 진단을 위하여 마이크로 중화항체시험법이 주로 이용되고 있으나, 이 방법은 고병원성 wildtype 바이러스와 3단계 생물안전밀폐실험실이 요구되어 실험자의 안전성과 접근성이 제한되는 단점이 있다. 이에, 본 연구에서는 고병원성 H5N1 바이러스의 HA 유전자를 포함하는 비감염성 pseudotype virus 를 이용한 중화항체시험법을 확립하고자 하였다. 2003년 및 2006년 국내 가금류 (닭) 로부터 분리된 고병원성 A/H5N1 바이러스 2주 [A/chicken/Korea/ES/03 (ES, clade 2.5) and A/chicken/Korea/IS/2006 (IS, clade 2.2)] 로부터 hemagglutinin (HA) 유전자 1.7 kb 를 증폭하여 클로닝하였다. 293T 세포와 lentiviral vector 시스템에서 확보된 고병원성 A/H5N1 의 HA 유전자를 포함하는 pseudotype virus 가 55 kDa 의 HA 단백질을 발현함을 western blotting 을 통해 확인하였고, (RT)-PCR 을 통해 감염성이 없음을 확인하였다. 이후, pseudotype virus 를 이용하여 세포수는 2x105 cells/㎖, 바이러스 감염농도는 100,000 RLU/㎖ 이 중화항체시험법에 최적조건임을 확인하였다. 총 13개의 혈청을 대상으로 wildtype 바이러스를 이용하는 기존 중화항체시험법과의 효능을 비교한 결과, 두 시험법간의 상관성이 ES 바이러스에 대해서는 89.3%, IS 바이러스에 대해서는 88.4%로 나타났다. 본 연구를 통해 국내에서의 고병원성 조류 인플루엔자바이러스 A/H5N1에 대한 보다 안전하고 감도가 높은 혈청학적 검사법을 확립하였으며, 본 시험법을 이용함으로 향후 신속한 진단을 통한 환자 관리 대책의 과학적 근거자료로서 활용될 수 있으리라 본다.
Highly pathogenic avian influenza (HPAI) A/H5N1 virus is known to be a major pathogen that may cause another influenza pandemic. The conventional microneutralization (MN) test is used as the gold standard serological test for the diagnosis of HPAI human infection at present. However it has disadvant...
Highly pathogenic avian influenza (HPAI) A/H5N1 virus is known to be a major pathogen that may cause another influenza pandemic. The conventional microneutralization (MN) test is used as the gold standard serological test for the diagnosis of HPAI human infection at present. However it has disadvantages of limited safety and accessibility by using wildtype virus and need biosafety level (BSL)-3 facilities. In this study, we tried to establish an applicable MN test by using pseudotype virus which containing hemagglutinin (HA) gene of HPAI A/H5N1 and without infectivity. The HA genes of 1.7 kb were amplified from two HPAI A/H5N1 viruses, A/chicken/Korea/ES/03 (ES, clade 2.5) and A/chicken/Korea/IS/2006 (IS, clade 2.2), and cloned. Pseudotype virus was produced in 293T cells by lentiviral vector system. The expression of 55 kDa of HA protein was confirmed by western blotting, and the non-infectivity was confirmed by (RT)-PCR. Optimal conditions of MN test using pseudotype virus were evaluated and 2x105 cells/㎖ and 100,000 RLU/㎖ of virus was confirmed to be optimal. The MN test results of ES and IS strains with 13 serum samples showed 89.3% and 88.4% of correlation between wildtype and pseudotype MN test, respectively. In conclusion, the serological test for HPAI A/H5N1 using pseudotype virus was established and found to be safer and more sensitive than conventional MN test. This method can be used for the management of HPAI patient policy through rapid diagnosis and scientific support.
Highly pathogenic avian influenza (HPAI) A/H5N1 virus is known to be a major pathogen that may cause another influenza pandemic. The conventional microneutralization (MN) test is used as the gold standard serological test for the diagnosis of HPAI human infection at present. However it has disadvantages of limited safety and accessibility by using wildtype virus and need biosafety level (BSL)-3 facilities. In this study, we tried to establish an applicable MN test by using pseudotype virus which containing hemagglutinin (HA) gene of HPAI A/H5N1 and without infectivity. The HA genes of 1.7 kb were amplified from two HPAI A/H5N1 viruses, A/chicken/Korea/ES/03 (ES, clade 2.5) and A/chicken/Korea/IS/2006 (IS, clade 2.2), and cloned. Pseudotype virus was produced in 293T cells by lentiviral vector system. The expression of 55 kDa of HA protein was confirmed by western blotting, and the non-infectivity was confirmed by (RT)-PCR. Optimal conditions of MN test using pseudotype virus were evaluated and 2x105 cells/㎖ and 100,000 RLU/㎖ of virus was confirmed to be optimal. The MN test results of ES and IS strains with 13 serum samples showed 89.3% and 88.4% of correlation between wildtype and pseudotype MN test, respectively. In conclusion, the serological test for HPAI A/H5N1 using pseudotype virus was established and found to be safer and more sensitive than conventional MN test. This method can be used for the management of HPAI patient policy through rapid diagnosis and scientific support.
Keyword
#Avian Influenza Pseudotyped Virus Microneutralization Test
학위논문 정보
저자
신경철
학위수여기관
Graduate School, Korea University
학위구분
국내석사
학과
生命工學科
지도교수
金準
발행연도
2011
총페이지
iii, 58장
키워드
Avian Influenza Pseudotyped Virus Microneutralization Test
AI-Helper
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.