중추 와 말초 신경계의 중요한 신경전달물질인 norepinephrine(NE), epinephrine(E), dopamine(DA), serotonin(5-hydroxytryptamine, 5HT), DA의 대사물인 3,4-dihydroxyphenylacetic acid(DOPAC)와 5HT의 대사물인 5-hydroxyindoleacetic acid(5HIAA)를 3,4-dihydroxyhydrocinnamic aicd를 내부 표준품(...
중추 와 말초 신경계의 중요한 신경전달물질인 norepinephrine(NE), epinephrine(E), dopamine(DA), serotonin(5-hydroxytryptamine, 5HT), DA의 대사물인 3,4-dihydroxyphenylacetic acid(DOPAC)와 5HT의 대사물인 5-hydroxyindoleacetic acid(5HIAA)를 3,4-dihydroxyhydrocinnamic aicd를 내부 표준품(IS)으로 사용하여 30 ℃에서 C18 (5 ㎛ 4.6x150 mm)컬럼을 통하여 기울기 용리방법으로 동시에 정량분석 한 결과 NE, E, DA, DOPAC, 5HIAA, 5HT, IS가 각각 3.7 분, 6.8 분, 9.4 분, 10.2 분, 14.0 분, 16.3 분 그리고 17.8 분의 머무름 시간을 나타내었다. 일곱 가지 화합물 모두 5×10-6 M 과 1×10-4 M 농도범위에서 직선성을 나타내었고 검출한계는 0.6 μM ~ 1.9 μM 이었다. 본 연구의 HPLC-ECD방법으로 1.48×10-5 M ~ 8.82×10-5 M 범위의 NE, E, DA, 5HT, DOPAC 과 5HIAA로 구성된 표준 용액에 대하여 9회 반복 정량하였을 때 각 화합물에 대한 정밀도는 0.4% 내지 1.9% 범위 이었고 상대오차는 -1.4% 내지 1.1%로 합리적 이었다. 혈청 1 mL에 각각 50 nmoles로 첨가한 카테콜 아민류, 세로토닌 및 대사물질들을 C18 cartridge를 사용하여 methanol과 citrate 완충용액의 부피 비가 9 : 1인 추출용매를 1 mL씩 2회 반복 추출하여 0.45 μm 멤브레인 필터로 걸렀을 때 각 화합물의 회수율은 57% ~ 86%이었다. 참수한 Sprague-Dawley 흰쥐의 혈청 중 NE와 5HT의 농도는 각각 1.4×10-6 M와 2.6×10-6 M로 분석되었으며 30분 간 몸통을 플라스틱 원통에 넣어 스트레스를 준 흰쥐에서 NE와 5HT의 농도는 각각 5.6배와 1.4배로 더 높게 나타났다. 3,4-dihydroxyhydrocinnamic aicd를 IS로 사용하고 분절 기울기 용리법을 시도한 본 연구의 HPLC-ECD법은 생체 시료 중 카테콜 아민류와 세로토닌 및 대사물질들을 합리적인 분석시간 내에 동시에 정량할 수 있음을 입증하였다.
중추 와 말초 신경계의 중요한 신경전달물질인 norepinephrine(NE), epinephrine(E), dopamine(DA), serotonin(5-hydroxytryptamine, 5HT), DA의 대사물인 3,4-dihydroxyphenylacetic acid(DOPAC)와 5HT의 대사물인 5-hydroxyindoleacetic acid(5HIAA)를 3,4-dihydroxyhydrocinnamic aicd를 내부 표준품(IS)으로 사용하여 30 ℃에서 C18 (5 ㎛ 4.6x150 mm)컬럼을 통하여 기울기 용리방법으로 동시에 정량분석 한 결과 NE, E, DA, DOPAC, 5HIAA, 5HT, IS가 각각 3.7 분, 6.8 분, 9.4 분, 10.2 분, 14.0 분, 16.3 분 그리고 17.8 분의 머무름 시간을 나타내었다. 일곱 가지 화합물 모두 5×10-6 M 과 1×10-4 M 농도범위에서 직선성을 나타내었고 검출한계는 0.6 μM ~ 1.9 μM 이었다. 본 연구의 HPLC-ECD방법으로 1.48×10-5 M ~ 8.82×10-5 M 범위의 NE, E, DA, 5HT, DOPAC 과 5HIAA로 구성된 표준 용액에 대하여 9회 반복 정량하였을 때 각 화합물에 대한 정밀도는 0.4% 내지 1.9% 범위 이었고 상대오차는 -1.4% 내지 1.1%로 합리적 이었다. 혈청 1 mL에 각각 50 nmoles로 첨가한 카테콜 아민류, 세로토닌 및 대사물질들을 C18 cartridge를 사용하여 methanol과 citrate 완충용액의 부피 비가 9 : 1인 추출용매를 1 mL씩 2회 반복 추출하여 0.45 μm 멤브레인 필터로 걸렀을 때 각 화합물의 회수율은 57% ~ 86%이었다. 참수한 Sprague-Dawley 흰쥐의 혈청 중 NE와 5HT의 농도는 각각 1.4×10-6 M와 2.6×10-6 M로 분석되었으며 30분 간 몸통을 플라스틱 원통에 넣어 스트레스를 준 흰쥐에서 NE와 5HT의 농도는 각각 5.6배와 1.4배로 더 높게 나타났다. 3,4-dihydroxyhydrocinnamic aicd를 IS로 사용하고 분절 기울기 용리법을 시도한 본 연구의 HPLC-ECD법은 생체 시료 중 카테콜 아민류와 세로토닌 및 대사물질들을 합리적인 분석시간 내에 동시에 정량할 수 있음을 입증하였다.
The important neurotransmitters in the central and peripheral nervous system which are norepinephrine(NE), epinephrine(E), dopamine(DA) and serotonin(5-hydroxytryptamine, 5HT), the metabolite of DA, 3,4-dihydroxyphenylacetic acid(DOPAC) and the metabolite of 5HT, 5-hydroxyindoleacetic acid(5HIAA) we...
The important neurotransmitters in the central and peripheral nervous system which are norepinephrine(NE), epinephrine(E), dopamine(DA) and serotonin(5-hydroxytryptamine, 5HT), the metabolite of DA, 3,4-dihydroxyphenylacetic acid(DOPAC) and the metabolite of 5HT, 5-hydroxyindoleacetic acid(5HIAA) were simultaneously determined using 3,4-dihydroxyhydrocinnamic aicd as the internal standard(IS) employing the segmented gradient elution through a C18 (5 ㎛ 4.6x150 mm) column at 30 oC. A typical chromatogram showed retention times as follows; NE at 3.7 min, E at 6.8 min, DA at 9.4 min, DOPAC at 10.2 min, 5HIAA at 14.0 min, 5HT at 16.3 min and IS at 17.8 min. Linearities were obtained in the concentration range between 5×10-6 M and 1×10-4 M for all 7 compounds with detection limits of 0.6 μM ~ 1.9 μM. The present HPLC/ECD method yielded reasonable accuracy of Er between -1.4% and 1.1% and precision of RSD between 0.4% and 1.9% for 9 measurements of the standard solution consisting of NE, E, DA, 5HT, DOPAC and 5HIAA compounds. Recoveries of catecholamines, serotonin and their metabolites from human serum were in the range of 57% ~ 86% with the solid phase extraction using a C18 cartridge and the extracting solvent of MeOH : citrate buffer (9 : 1), subsequently followed by filtration with a 0.45 μm membrane. While the concentrations of NE and 5HT in the serum of normal Sprague-Dawley rat were found as 1.4×10-6 M and 2.6×10-6 M, respectively, the contents of NE and 5HT in the serum of the stressed rat were increased 5.6 times and 1.4 times more, respectively.
The important neurotransmitters in the central and peripheral nervous system which are norepinephrine(NE), epinephrine(E), dopamine(DA) and serotonin(5-hydroxytryptamine, 5HT), the metabolite of DA, 3,4-dihydroxyphenylacetic acid(DOPAC) and the metabolite of 5HT, 5-hydroxyindoleacetic acid(5HIAA) were simultaneously determined using 3,4-dihydroxyhydrocinnamic aicd as the internal standard(IS) employing the segmented gradient elution through a C18 (5 ㎛ 4.6x150 mm) column at 30 oC. A typical chromatogram showed retention times as follows; NE at 3.7 min, E at 6.8 min, DA at 9.4 min, DOPAC at 10.2 min, 5HIAA at 14.0 min, 5HT at 16.3 min and IS at 17.8 min. Linearities were obtained in the concentration range between 5×10-6 M and 1×10-4 M for all 7 compounds with detection limits of 0.6 μM ~ 1.9 μM. The present HPLC/ECD method yielded reasonable accuracy of Er between -1.4% and 1.1% and precision of RSD between 0.4% and 1.9% for 9 measurements of the standard solution consisting of NE, E, DA, 5HT, DOPAC and 5HIAA compounds. Recoveries of catecholamines, serotonin and their metabolites from human serum were in the range of 57% ~ 86% with the solid phase extraction using a C18 cartridge and the extracting solvent of MeOH : citrate buffer (9 : 1), subsequently followed by filtration with a 0.45 μm membrane. While the concentrations of NE and 5HT in the serum of normal Sprague-Dawley rat were found as 1.4×10-6 M and 2.6×10-6 M, respectively, the contents of NE and 5HT in the serum of the stressed rat were increased 5.6 times and 1.4 times more, respectively.
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