스핑고마이엘린은 세포증식과 생존에 관련된 필수적인 내인성 지질물질로서 주로 세포막에 존재한다. 본 연구에서 고성능 액체크로마토그래피 (HPLC)를 이용하여 재현성이 높은 스핑고마이엘린 분석방법을 개발하였으며, 사람 혈액, 생쥐 조직 및 혈액, 배양세포에서 스핑고마이엘린 함량을 측정하였다. 내부표준물질로서 다이하이드로스핑고마이엘린을 생체시료에 첨가하고 지질을 추출하였다. 내부표준물질의 사용은 추출효율에 따른 실험오차를 최소화시켰다. 스핑고마이엘린은 고성능박층크로마토그라피 (HPTLC)를 사용하여 정제하였고, 스핑고리피드-세라마이드-탈아실효소 (Sphingolipid ...
스핑고마이엘린은 세포증식과 생존에 관련된 필수적인 내인성 지질물질로서 주로 세포막에 존재한다. 본 연구에서 고성능 액체크로마토그래피 (HPLC)를 이용하여 재현성이 높은 스핑고마이엘린 분석방법을 개발하였으며, 사람 혈액, 생쥐 조직 및 혈액, 배양세포에서 스핑고마이엘린 함량을 측정하였다. 내부표준물질로서 다이하이드로스핑고마이엘린을 생체시료에 첨가하고 지질을 추출하였다. 내부표준물질의 사용은 추출효율에 따른 실험오차를 최소화시켰다. 스핑고마이엘린은 고성능박층크로마토그라피 (HPTLC)를 사용하여 정제하였고, 스핑고리피드-세라마이드-탈아실효소 (Sphingolipid ceramide N-deacylase, SCDase)와 스핑고마이엘린분해효소 (Sphingomyelinase, SMase)를 사용하여 스핑고마이엘린을 가수분해함으로써 스핑고신을 생성하였다. 생성된 스핑고신은 OPA 유도체화를 통하여 형광검출에 대한 특이성과 미량 (10 picomole) 수준의 정량분석을 가능하게 하였다. 본 분석법을 사용하여 사람 혈액, 생쥐 혈액 및 장기조직과 다양한 종류의 배양세포로부터 스핑고마이엘린의 함량을 분석하였다. 생쥐 장기 중 스핑고마이엘린 함량이 가장 높은 생체조직은 뇌(Brain)이며, 그 순서는 뇌, 신장 및 간으로 나타났다. 또한 사람 혈액에서의 함량이 생쥐 혈액보다 다소 높은 것도 확인 할 수 있었다. 본 분석법은 스핑고마이엘린을 정량분석 할 수 있으므로 생체 내 기전 및 생리기능 연구에 유용할 것으로 생각된다. 3T3-L1 지방전구세포에서 스핑고리피드 신생합성의 억제제인 미리오신 (myriocin)을 시간별로 처리함으로써 스핑고마이엘린과 세라마이드의 함량의 감소를 확인하였고, 동시에 세포증식이 억제되고 세포사가 유발되는 것을 관찰하였다. 따라서 본 연구결과들은 스핑고마이엘린이 세포생리 기능을 생체지표로 활용 가능성을 제시한다.
스핑고마이엘린은 세포증식과 생존에 관련된 필수적인 내인성 지질물질로서 주로 세포막에 존재한다. 본 연구에서 고성능 액체크로마토그래피 (HPLC)를 이용하여 재현성이 높은 스핑고마이엘린 분석방법을 개발하였으며, 사람 혈액, 생쥐 조직 및 혈액, 배양세포에서 스핑고마이엘린 함량을 측정하였다. 내부표준물질로서 다이하이드로스핑고마이엘린을 생체시료에 첨가하고 지질을 추출하였다. 내부표준물질의 사용은 추출효율에 따른 실험오차를 최소화시켰다. 스핑고마이엘린은 고성능박층크로마토그라피 (HPTLC)를 사용하여 정제하였고, 스핑고리피드-세라마이드-탈아실효소 (Sphingolipid ceramide N-deacylase, SCDase)와 스핑고마이엘린분해효소 (Sphingomyelinase, SMase)를 사용하여 스핑고마이엘린을 가수분해함으로써 스핑고신을 생성하였다. 생성된 스핑고신은 OPA 유도체화를 통하여 형광검출에 대한 특이성과 미량 (10 picomole) 수준의 정량분석을 가능하게 하였다. 본 분석법을 사용하여 사람 혈액, 생쥐 혈액 및 장기조직과 다양한 종류의 배양세포로부터 스핑고마이엘린의 함량을 분석하였다. 생쥐 장기 중 스핑고마이엘린 함량이 가장 높은 생체조직은 뇌(Brain)이며, 그 순서는 뇌, 신장 및 간으로 나타났다. 또한 사람 혈액에서의 함량이 생쥐 혈액보다 다소 높은 것도 확인 할 수 있었다. 본 분석법은 스핑고마이엘린을 정량분석 할 수 있으므로 생체 내 기전 및 생리기능 연구에 유용할 것으로 생각된다. 3T3-L1 지방전구세포에서 스핑고리피드 신생합성의 억제제인 미리오신 (myriocin)을 시간별로 처리함으로써 스핑고마이엘린과 세라마이드의 함량의 감소를 확인하였고, 동시에 세포증식이 억제되고 세포사가 유발되는 것을 관찰하였다. 따라서 본 연구결과들은 스핑고마이엘린이 세포생리 기능을 생체지표로 활용 가능성을 제시한다.
Sphingomyelins are the most abundant sphingolipid in mammalian cells, and are mostly present in plasma membrane. An analytical method using HPLC has been developed for the quantification of sphingomyelin in mouse plasma and tissues, 3T3-L1 cells, rat aortic smooth muscle cells and HT-29 cells. Sphin...
Sphingomyelins are the most abundant sphingolipid in mammalian cells, and are mostly present in plasma membrane. An analytical method using HPLC has been developed for the quantification of sphingomyelin in mouse plasma and tissues, 3T3-L1 cells, rat aortic smooth muscle cells and HT-29 cells. Sphingomyelin and dihydrosphingomyelin, an internal standard, were separated by HPTLC, and simultaneously hydrolyzed by sphingolipid ceramide N-deacylase and sphingomyelinase to release sphingosine. Sphingomyelin content was measured by HPLC following o-phthalaldehyde derivatization. The concentrations of sphingomyelin in 3T3-L1 cells, rat aortic smooth muscle cells and HT-29 cells were 60.10?}0.24, 62.69?}0.08 and 58.38?} 0.37 nmol/mg protein, respectively, while those in brain, kidney and liver of ICR mice were 55.60?}0.43, 43.75?}0.21 and 22.26?}0.14 nmol/mg protein. Plasma concentration of sphingomyelin from mice was 407.40?}0.31 ??M. Linearity was validated for sphingomyelin in 3T3-L1 cells, and mouse brain tissue. Accuracy and recovery were validated using standard sphingomyelin and dihydrosphingomyelin. In conclusion, the results demonstrated that this method was precise and specific. The analytical method was a novel technique for sphingomyelin quantification and was successfully applied to diverse biological samples.
Sphingomyelins are the most abundant sphingolipid in mammalian cells, and are mostly present in plasma membrane. An analytical method using HPLC has been developed for the quantification of sphingomyelin in mouse plasma and tissues, 3T3-L1 cells, rat aortic smooth muscle cells and HT-29 cells. Sphingomyelin and dihydrosphingomyelin, an internal standard, were separated by HPTLC, and simultaneously hydrolyzed by sphingolipid ceramide N-deacylase and sphingomyelinase to release sphingosine. Sphingomyelin content was measured by HPLC following o-phthalaldehyde derivatization. The concentrations of sphingomyelin in 3T3-L1 cells, rat aortic smooth muscle cells and HT-29 cells were 60.10?}0.24, 62.69?}0.08 and 58.38?} 0.37 nmol/mg protein, respectively, while those in brain, kidney and liver of ICR mice were 55.60?}0.43, 43.75?}0.21 and 22.26?}0.14 nmol/mg protein. Plasma concentration of sphingomyelin from mice was 407.40?}0.31 ??M. Linearity was validated for sphingomyelin in 3T3-L1 cells, and mouse brain tissue. Accuracy and recovery were validated using standard sphingomyelin and dihydrosphingomyelin. In conclusion, the results demonstrated that this method was precise and specific. The analytical method was a novel technique for sphingomyelin quantification and was successfully applied to diverse biological samples.
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