연구목적
재조합 표피성장인자(rh-EGF)는 여러 연구에서 창상 치유를 촉진시키는 것으로 보고 되고 있다. 키토산(chitosan)은 양성 전하를 가지며 이것은 표면에 음성 전하를 가지는 적혈구를 끌어 들이는 작용을 함으로써 새로운 지혈제 재료로서의 개발 가능성이 많은 물질이다. 본 실험에서는 재조합 표피성장인자(rh-EGF)가 함유된 키토산 필름의 지혈 효과를 재조합 표피성장인자(rh-EGF)가 함유되지 않은 키토산 필름과 지혈 효과가 증명되어 상품화된 큐탄플라스트(Cutanplast○R)와 비교하고, 표피성장인자(...
연구목적
재조합 표피성장인자(rh-EGF)는 여러 연구에서 창상 치유를 촉진시키는 것으로 보고 되고 있다. 키토산(chitosan)은 양성 전하를 가지며 이것은 표면에 음성 전하를 가지는 적혈구를 끌어 들이는 작용을 함으로써 새로운 지혈제 재료로서의 개발 가능성이 많은 물질이다. 본 실험에서는 재조합 표피성장인자(rh-EGF)가 함유된 키토산 필름의 지혈 효과를 재조합 표피성장인자(rh-EGF)가 함유되지 않은 키토산 필름과 지혈 효과가 증명되어 상품화된 큐탄플라스트(Cutanplast○R)와 비교하고, 표피성장인자(EGF)가 지혈에는 영향을 주지 않으면서 조직학적으로 치유를 촉진할 수 있는지를 관찰하고자 하였다.
재료 및 방법
대조군(group A)과 큐탄플라스트 군(group B), 키토산 군(group C), 키토산 + 표피성장인자(EGF)(group D)의 네 군을 설정하였다.
실험 방법은 백서의 대퇴동맥에 인슐린 주사기로 천공하여 출혈을 시키고 대조군은 거즈를 1.5x1.5cm 크기로, 나머지 군들은 각 군들의 제재를 같은 크기로 잘라 출혈 부위에 대고 200g의 추를 올려 지혈되는 시간을 30초, 60초, 90초, 90초 이상(지혈실패)으로 4개 항목으로 평가하였다. 1차 실험에서 각 군마다 8마리씩 실험을 진행하였고, 각 군의 제재를 출혈 부위에 덮은 후 봉합한 후 다음날 백서의 사망 여부를 확인하여 지연 출혈 여부를 확인하였다.
2차 실험에서는 혈관의 조직학적 변화를 추가로 관찰하기로 하였다. 각 군마다 4마리씩 추가하여 좌측과 우측 대퇴 동맥에 천공 전에 10-0 나일론으로 천공 부위를 표시한 후에 천공 후 각 군의 제재를 덮은 후에 1차 실험과 마찬가지로 지혈 시간을 확인하고 제재를 덮은 후에 봉합하였다. 이로써 지혈 시간 데이터를 각 군별로 8개씩 더 얻을 수 있었다. 다음날 사망 여부를 확인하였다. 일주일 후에 좌측, 우측 실험 부위를 절개하여 각 군의 제재를 제거 한 후에 나일론으로 천공 위치를 표시한 대퇴 동맥 일부를 잘라내어 조직학적 변화를 관찰하였다.
각 군의 지혈 시간을 비교하여 통계적으로 유의한 차이가 있는지를 비교하고, 각 군별로 혈관의 조직학적 변화와 차이를 비교하고자 하였다.
결과
재조합 표피성장인자(rh-EGF) 키토산 필름 군의 전체 지혈 성공률(91.3%)은 대조군(56.5%)에 비하여서는 유의하게 높았으나 큐탄플라스트 군(95.7%), 키토산 필름 군(87.0%)과는 유의한 차이가 없었다. 빠른 지혈의 기준을 30초, 60초로 각각 놓고 보았을 때 30초 이내에 지혈 성공률은 재조합 표피성장인자(rh-EGF) 키토산 필름 군(30.4%)이 대조군(0%)에 비해서는 유의하게 빨랐으나 큐탄플라스트 군(30.4%), 키토산 필름군(26.1%)에 비하여서는 유의하게 빠르지 않았다. 60초 이내 지혈 성공률 역시 재조합 표피성장인자(rh-EGF) 키토산 필름 군(65.2%)이 대조군(30.4%)에 비해서는 유의하게 빨랐으나 큐탄플라스트 군(69.6%), 키토산 필름 군(60.9%)에 비하여서는 유의하게 빠르지 않았다. 조직학적 분석에서 재조합 표피성장인자(rh-EGF) 키토산 필름 군의 혈관벽 치유가 다른 군들보다 더 견고하게 이루어지는 것을 관찰할 수 있었다.
결론
재조합 표피성장인자(rh-EGF) 키토산 필름군이 다른 지혈 효과가 증명된 군들과 비교하여 육안으로 지혈 효과를 관찰한 거시적인 측면에서는 동등한 효과를 나타내는 것을 알 수 있었다. 조직학적 변화 관찰 결과 재조합 표피성장인자(rh-EGF) 키토산 필름 그룹의 혈관벽 치유가 더 견고하게 이루어지는 것을 바탕으로 하여 미시적인 지혈 측면에서 다른 군들에 비해 우수한 효과가 있다고 판단 할 수 있을 것으로 보인다. 앞으로 키토산 필름 외에 표피성장인자(EGF)와 상호 작용하여 지혈 효과를 상승시키면서 또한 표피성장인자(EGF)의 창상 치유 효과 또한 상승시킬 수 있는 지혈 제재의 개발이 필요할 것으로 생각되며 임상 실험을 통하여 실제 당뇨 족부 궤양 환자에서의 효과를 증명하는 것이 과제로 남을 것으로 생각된다.
Purpose of study
Many studies showed that the EGF promotes wound healing. Chitosan has a positive electric charge and draws the negatively charged RBCs towards them. This property gives Chitosan a higher chance to be developed into a new hemostatic material. In this experiment, evaluation of hemostatic effect of rh-EGF containing Chitosan film was studied by comparing it with Chitosan film without rh-EGF and commodified Cutanplast○R which is a verified hemostatic material. And also this study evaluated whether EGF can accelerate wound healing without affecting hemostasis.
Materials and Methods
The study was divided in to 4 groups and treated with control (group A), Cutanplast○R (group B), Chitosan only (group C), and rh-EGF containing Chitosan (group D). A Sprague-Dawley was used for the study. Punturing was made to the femoral artery with a insulin syringe and covered the bleeding site of the control group with 1.5 X 1.5cm gauze, and other groups with selectively chosen material mentioned above, all in same size as control group. We put a 200g weighing pendulum on each material to maintain pressure.
The time of hemostasis was classified into 4 categories: 30 seconds, 60 seconds, 90 seconds, over 90 seconds(fail to stop bleeding). 8 Sprague-Dawley were used for each group’s study. Comparing the time of hemostasis and observing statistical significance was made in this study.
And histologic evaluation was performed by gaining femoral artery including puncture site which was marked with 10-0 Nylon already after 7 days.
Results
The successful rate of hemostasis in rh-EGF Chitosan film (91.3%) was meaningfully higher than the control group. But there was no significant difference compared to Cutanplast○R group(95.7%) and Chitosan group(87.0%). Considering ‘30 seconds’ and ’60 seconds’ as the fast hemostatic time, rh-EGF containing Chitosan group was meaningfully faster than the control group. But, still there was no significant difference compared to Cutanplast○R group and Chitosan group.
In histologic evaluation, rh-EGF Chitosan group showed more robust healing than other groups.
Conclusion
This study shows that EGF Chitosan film shows better hemostatic effect than other groups. Further study will be needed to develop a material that will increase the hemostatic effect by interacting with EGF. Further study is also needed to compare the overall healing rates. As the function of EGF is to enhance angiogenesis and epithelialization, it will remain a challenge in a clinical trial to prove the benefit of the material used in a patient who has diabetic foot ulcer.
연구목적
재조합 표피성장인자(rh-EGF)는 여러 연구에서 창상 치유를 촉진시키는 것으로 보고 되고 있다. 키토산(chitosan)은 양성 전하를 가지며 이것은 표면에 음성 전하를 가지는 적혈구를 끌어 들이는 작용을 함으로써 새로운 지혈제 재료로서의 개발 가능성이 많은 물질이다. 본 실험에서는 재조합 표피성장인자(rh-EGF)가 함유된 키토산 필름의 지혈 효과를 재조합 표피성장인자(rh-EGF)가 함유되지 않은 키토산 필름과 지혈 효과가 증명되어 상품화된 큐탄플라스트(Cutanplast○R)와 비교하고, 표피성장인자(EGF)가 지혈에는 영향을 주지 않으면서 조직학적으로 치유를 촉진할 수 있는지를 관찰하고자 하였다.
재료 및 방법
대조군(group A)과 큐탄플라스트 군(group B), 키토산 군(group C), 키토산 + 표피성장인자(EGF)(group D)의 네 군을 설정하였다.
실험 방법은 백서의 대퇴동맥에 인슐린 주사기로 천공하여 출혈을 시키고 대조군은 거즈를 1.5x1.5cm 크기로, 나머지 군들은 각 군들의 제재를 같은 크기로 잘라 출혈 부위에 대고 200g의 추를 올려 지혈되는 시간을 30초, 60초, 90초, 90초 이상(지혈실패)으로 4개 항목으로 평가하였다. 1차 실험에서 각 군마다 8마리씩 실험을 진행하였고, 각 군의 제재를 출혈 부위에 덮은 후 봉합한 후 다음날 백서의 사망 여부를 확인하여 지연 출혈 여부를 확인하였다.
2차 실험에서는 혈관의 조직학적 변화를 추가로 관찰하기로 하였다. 각 군마다 4마리씩 추가하여 좌측과 우측 대퇴 동맥에 천공 전에 10-0 나일론으로 천공 부위를 표시한 후에 천공 후 각 군의 제재를 덮은 후에 1차 실험과 마찬가지로 지혈 시간을 확인하고 제재를 덮은 후에 봉합하였다. 이로써 지혈 시간 데이터를 각 군별로 8개씩 더 얻을 수 있었다. 다음날 사망 여부를 확인하였다. 일주일 후에 좌측, 우측 실험 부위를 절개하여 각 군의 제재를 제거 한 후에 나일론으로 천공 위치를 표시한 대퇴 동맥 일부를 잘라내어 조직학적 변화를 관찰하였다.
각 군의 지혈 시간을 비교하여 통계적으로 유의한 차이가 있는지를 비교하고, 각 군별로 혈관의 조직학적 변화와 차이를 비교하고자 하였다.
결과
재조합 표피성장인자(rh-EGF) 키토산 필름 군의 전체 지혈 성공률(91.3%)은 대조군(56.5%)에 비하여서는 유의하게 높았으나 큐탄플라스트 군(95.7%), 키토산 필름 군(87.0%)과는 유의한 차이가 없었다. 빠른 지혈의 기준을 30초, 60초로 각각 놓고 보았을 때 30초 이내에 지혈 성공률은 재조합 표피성장인자(rh-EGF) 키토산 필름 군(30.4%)이 대조군(0%)에 비해서는 유의하게 빨랐으나 큐탄플라스트 군(30.4%), 키토산 필름군(26.1%)에 비하여서는 유의하게 빠르지 않았다. 60초 이내 지혈 성공률 역시 재조합 표피성장인자(rh-EGF) 키토산 필름 군(65.2%)이 대조군(30.4%)에 비해서는 유의하게 빨랐으나 큐탄플라스트 군(69.6%), 키토산 필름 군(60.9%)에 비하여서는 유의하게 빠르지 않았다. 조직학적 분석에서 재조합 표피성장인자(rh-EGF) 키토산 필름 군의 혈관벽 치유가 다른 군들보다 더 견고하게 이루어지는 것을 관찰할 수 있었다.
결론
재조합 표피성장인자(rh-EGF) 키토산 필름군이 다른 지혈 효과가 증명된 군들과 비교하여 육안으로 지혈 효과를 관찰한 거시적인 측면에서는 동등한 효과를 나타내는 것을 알 수 있었다. 조직학적 변화 관찰 결과 재조합 표피성장인자(rh-EGF) 키토산 필름 그룹의 혈관벽 치유가 더 견고하게 이루어지는 것을 바탕으로 하여 미시적인 지혈 측면에서 다른 군들에 비해 우수한 효과가 있다고 판단 할 수 있을 것으로 보인다. 앞으로 키토산 필름 외에 표피성장인자(EGF)와 상호 작용하여 지혈 효과를 상승시키면서 또한 표피성장인자(EGF)의 창상 치유 효과 또한 상승시킬 수 있는 지혈 제재의 개발이 필요할 것으로 생각되며 임상 실험을 통하여 실제 당뇨 족부 궤양 환자에서의 효과를 증명하는 것이 과제로 남을 것으로 생각된다.
Purpose of study
Many studies showed that the EGF promotes wound healing. Chitosan has a positive electric charge and draws the negatively charged RBCs towards them. This property gives Chitosan a higher chance to be developed into a new hemostatic material. In this experiment, evaluation of hemostatic effect of rh-EGF containing Chitosan film was studied by comparing it with Chitosan film without rh-EGF and commodified Cutanplast○R which is a verified hemostatic material. And also this study evaluated whether EGF can accelerate wound healing without affecting hemostasis.
Materials and Methods
The study was divided in to 4 groups and treated with control (group A), Cutanplast○R (group B), Chitosan only (group C), and rh-EGF containing Chitosan (group D). A Sprague-Dawley was used for the study. Punturing was made to the femoral artery with a insulin syringe and covered the bleeding site of the control group with 1.5 X 1.5cm gauze, and other groups with selectively chosen material mentioned above, all in same size as control group. We put a 200g weighing pendulum on each material to maintain pressure.
The time of hemostasis was classified into 4 categories: 30 seconds, 60 seconds, 90 seconds, over 90 seconds(fail to stop bleeding). 8 Sprague-Dawley were used for each group’s study. Comparing the time of hemostasis and observing statistical significance was made in this study.
And histologic evaluation was performed by gaining femoral artery including puncture site which was marked with 10-0 Nylon already after 7 days.
Results
The successful rate of hemostasis in rh-EGF Chitosan film (91.3%) was meaningfully higher than the control group. But there was no significant difference compared to Cutanplast○R group(95.7%) and Chitosan group(87.0%). Considering ‘30 seconds’ and ’60 seconds’ as the fast hemostatic time, rh-EGF containing Chitosan group was meaningfully faster than the control group. But, still there was no significant difference compared to Cutanplast○R group and Chitosan group.
In histologic evaluation, rh-EGF Chitosan group showed more robust healing than other groups.
Conclusion
This study shows that EGF Chitosan film shows better hemostatic effect than other groups. Further study will be needed to develop a material that will increase the hemostatic effect by interacting with EGF. Further study is also needed to compare the overall healing rates. As the function of EGF is to enhance angiogenesis and epithelialization, it will remain a challenge in a clinical trial to prove the benefit of the material used in a patient who has diabetic foot ulcer.
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