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세포주를 사용하여 생산되는 모든 생물학적 의약품은 원료 물질 유래 바이러스의 오염 가능성이 있다 이러한 심각한 오염은 바이러스가 감염된 세포주로부터 유입될 수도 있고 세포 조작 시 바이러스로부터 오염될 수 있다. 바이러스 오염의 중요한 원인은 세포배양 공정에 첨가되는 소유래 혈청(FBS)이나 돼지유래 트립신에 의해 오염될 수 있다. 따라서 바이러스 동물세포에서의 바이러스 검출은, 소 유래 혈청과 돼지 유래 트립신에의 오염될수 있기 때문에 신속한 바이러스 검출 시험법이 최종 제품에서 ...

세포주를 사용하여 생산되는 모든 생물학적 의약품은 원료 물질 유래 바이러스의 오염 가능성이 있다 이러한 심각한 오염은 바이러스가 감염된 세포주로부터 유입될 수도 있고 세포 조작 시 바이러스로부터 오염될 수 있다. 바이러스 오염의 중요한 원인은 세포배양 공정에 첨가되는 소유래 혈청(FBS)이나 돼지유래 트립신에 의해 오염될 수 있다. 따라서 바이러스 동물세포에서의 바이러스 검출은, 소 유래 혈청과 돼지 유래 트립신에의 오염될수 있기 때문에 신속한 바이러스 검출 시험법이 최종 제품에서 바이오의약품에 대한 안전성 보증을 위해 필요하다. 본 연구에서는 rabies virus와 PRoV를 신속하게 정량적으로 검출 할 수 있는 TaqMan probe real-time PCR 시험법을 확립하였다. Rabies virus와 PRoV 핵산 증폭을 위한 특이적인 primer를 선별하였으며, TaqMan probe를 이용한 정량 분석법을 최적화 하였다. rabies virus의 모든 야외종과 백신 균주를 검출 할 수 있었다. Rabies virus의 분석법의 민감도는 3.87 × 100 copies/μL로 계산하였다. 확립된 시험법의 신뢰성 검증결과 이 real-time PCR 방법은 BRbv에 매우 특이성이 높았으며 재현성이 우수하였다. PRoV의 분석법의 민감도는 3.37 × 101 copies/μL로 계산하였다. 확립된 시험법의 신뢰성 검증결과 이 real-time PCR 방법은 PRoV에 매우 특이성이 높았으며 재현성이 우수하였다. Rabies virus와 PRoV의 TaqMan probe real-time PCR을 이용한 정량 분석법은 세포배양유래 생물의약품 생산공정에서 위해성 바이러스를 검출을 위한 기존의 시험법을 대체할 수 있는 우수한 방법으로 사료된다.

Abstract ▼ AI-Helper

The risk of viral contamination is a feature common to all biotechnology products derived from cell lines. Such contamination could have serious clinical consequences and can arise from the contamination of the source cell lines themselves or from adventitious introduction of virus during production...

The risk of viral contamination is a feature common to all biotechnology products derived from cell lines. Such contamination could have serious clinical consequences and can arise from the contamination of the source cell lines themselves or from adventitious introduction of virus during production. The major source, of viral contamination are fetal bovine serum (FBS) and porcine trypsin used for cell culture. Therefore viral detection in the mammalian cells, FBS and porcine trypsin as well as final products is necessary to ensure the safety of biopharmaceuticals against viruses. In this study, were TaqMan-based real-time quantitative PCR assay to detect rabies virus and PRoV were developed and validated. Specific primers for amplification of rabies virus and PRoV RNA was selected, and rabies viurs and PRoV RNA were quantified by use of TaqMan probe. The sensitivity for could detect all field and vaccine strains of rabies virus tested. Rabies virus real-time PCR was calculated to be 3.87 × 100 copies/μL. The TaqMan probe real-time PCR assay was proven to be reproducible and very specific to rabies virus. Therefore, it was concluded that these rapid, specific, and robust assays could replace the conventional biological assay for detection of these viruses. The sensitivity for PRoV real-time PCR calculated to be 3.37 × 101 copies/μL. The TaqMan probe real-time PCR was proven to be reproducible and very specific to PRoV.

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