옻나무는 중국과 히말라야, 한반도 각지에서 자라거나 재배되며, 우리나라에서는 전통적으로 식품 첨가물이나 도료의 옻칠에 사용되었고 특히 각종 부인병과 자양강장을 위한 약품으로도 사용되어 왔다. 옻나무에는 알러지를 일으키는 urusiol 외에도 다양한 약리작용을 보이는 butein, butin, fisetin, fustin, garbanzol, sulfuretin 등의 ...
옻나무는 중국과 히말라야, 한반도 각지에서 자라거나 재배되며, 우리나라에서는 전통적으로 식품 첨가물이나 도료의 옻칠에 사용되었고 특히 각종 부인병과 자양강장을 위한 약품으로도 사용되어 왔다. 옻나무에는 알러지를 일으키는 urusiol 외에도 다양한 약리작용을 보이는 butein, butin, fisetin, fustin, garbanzol, sulfuretin 등의 flavonoid 물질이 포함되어 있다. 이 연구는 여성 갱년기 장애 개선용 기능성 식품 개발을 위해 옻나무 추출물(RVE)및 분리 물질들의 여성호르몬 작용과 관련한 약리효능과 기전을 알아보기 위한 실험을 실시했다. In vitro 에서 옻나무의 (anti)estrogenic 작용을 알아보기 위해 우선 MCF7/ERE stable cell line과 HEK293T를 이용한 reporter gene assay를 실시하였다. ERα와 ERβ가 9:1 비율로 분포되어 있는 MCF7/ERE 세포에서는 RVE에 의한 reporter gene 활성 효과가 최고 에스트라다이올(E2)의 94.6% 까지 나타났고 EC50 값은 28.91 μg/ml이 나왔다. HEK293T 세포주에 각각 ER 또는 ER 플라스미드를 과발현 시킨 환경에서 실시한 reporter gene assay에서는 RVE에 의한 에스트로젠 효과가 나타났는데 특히 ERα보다 ERβ에서 더 강한 효과를 보이는 것이 확인되었다. 추가로 COS-7 세포에 ERα 또는 ERβ 플라스미드를 과발현 시킨 환경에서 실시한 receptor binding assay에서도 500g/ml 의 RVE 농도에서 ERβ가([H3]E2 결합의 89.3% 억제) ERα 보다([H3]E2 결합의 59.0% 억제)더 강한 수용체 결합 효과를 가지는 것이 확인되었다. RVE에 의한 유전자 발현을 알아보기 위해 MCF-7 세포에서 행한 RT-PCR 실험에서는, RVE가 ERα의 mRNA 발현을 저하시키고 PgR, PS2 genes의 발현은 증가시키는 것을 확인하였다.
옻나무의 에스트로겐 작용에 주 역할을 하는 물질을 추적하기위하여 옻나무 분리 물질들 중 butin, butein, fisetin, fustin, garbanzol, resorcinol, sulfuretin의 7개의 물질에 대해서 상기와 같은 reporter gene assay, receptor binding assay 및 유전자 발현 변화를 관찰하였다. Butin, butein, garbanzol, sulfuretin의 경우 reporter gene assay에서 강한 estrogenic 효과가 확인되었고, receptor binding assay에서 butin, butein, sulfuretin이 ER과 강한 결합을 하는 것이 관찰되었다. 이상의 결과는 옻나무 추출물이 estrogenic 효과를 가지는 것을 나타내며 이는 갱년기 여성을 위한 치료제 개발에 도움이 될 것이다.
옻나무는 중국과 히말라야, 한반도 각지에서 자라거나 재배되며, 우리나라에서는 전통적으로 식품 첨가물이나 도료의 옻칠에 사용되었고 특히 각종 부인병과 자양강장을 위한 약품으로도 사용되어 왔다. 옻나무에는 알러지를 일으키는 urusiol 외에도 다양한 약리작용을 보이는 butein, butin, fisetin, fustin, garbanzol, sulfuretin 등의 flavonoid 물질이 포함되어 있다. 이 연구는 여성 갱년기 장애 개선용 기능성 식품 개발을 위해 옻나무 추출물(RVE)및 분리 물질들의 여성호르몬 작용과 관련한 약리효능과 기전을 알아보기 위한 실험을 실시했다. In vitro 에서 옻나무의 (anti)estrogenic 작용을 알아보기 위해 우선 MCF7/ERE stable cell line과 HEK293T를 이용한 reporter gene assay를 실시하였다. ERα와 ERβ가 9:1 비율로 분포되어 있는 MCF7/ERE 세포에서는 RVE에 의한 reporter gene 활성 효과가 최고 에스트라다이올(E2)의 94.6% 까지 나타났고 EC50 값은 28.91 μg/ml이 나왔다. HEK293T 세포주에 각각 ER 또는 ER 플라스미드를 과발현 시킨 환경에서 실시한 reporter gene assay에서는 RVE에 의한 에스트로젠 효과가 나타났는데 특히 ERα보다 ERβ에서 더 강한 효과를 보이는 것이 확인되었다. 추가로 COS-7 세포에 ERα 또는 ERβ 플라스미드를 과발현 시킨 환경에서 실시한 receptor binding assay에서도 500g/ml 의 RVE 농도에서 ERβ가([H3]E2 결합의 89.3% 억제) ERα 보다([H3]E2 결합의 59.0% 억제)더 강한 수용체 결합 효과를 가지는 것이 확인되었다. RVE에 의한 유전자 발현을 알아보기 위해 MCF-7 세포에서 행한 RT-PCR 실험에서는, RVE가 ERα의 mRNA 발현을 저하시키고 PgR, PS2 genes의 발현은 증가시키는 것을 확인하였다.
옻나무의 에스트로겐 작용에 주 역할을 하는 물질을 추적하기위하여 옻나무 분리 물질들 중 butin, butein, fisetin, fustin, garbanzol, resorcinol, sulfuretin의 7개의 물질에 대해서 상기와 같은 reporter gene assay, receptor binding assay 및 유전자 발현 변화를 관찰하였다. Butin, butein, garbanzol, sulfuretin의 경우 reporter gene assay에서 강한 estrogenic 효과가 확인되었고, receptor binding assay에서 butin, butein, sulfuretin이 ER과 강한 결합을 하는 것이 관찰되었다. 이상의 결과는 옻나무 추출물이 estrogenic 효과를 가지는 것을 나타내며 이는 갱년기 여성을 위한 치료제 개발에 도움이 될 것이다.
Rhus verniciflua Strokes (RVS) has been used as a traditional herbal medicine, a food additives and a material for lacquer in Korea. In this study, we investigated the estrogenic activities of the hot water extracts of Rhus verniciflua Strokes xyleme (RVE) and its purified compounds. The in vitro e...
Rhus verniciflua Strokes (RVS) has been used as a traditional herbal medicine, a food additives and a material for lacquer in Korea. In this study, we investigated the estrogenic activities of the hot water extracts of Rhus verniciflua Strokes xyleme (RVE) and its purified compounds. The in vitro estrogen receptor (ER)-mediated estrogenic/antiestrogenic activities were determined using an estrogen responsive element-driven reporter gene assay in MCF7/ERE and HEK293T cells. RVE showed estrogenic activity with a maximum 95.1% of 10-10 M estradiol (E2) and at 28.9 μg of EC50 in MCF7/ERE cells. Estrogenic activity of RVE mediated by ERβ was stronger than that by ERα in HEK293T cells which were transiently transfected with ERα or ERβ and reporter plasmid. It also showed a stronger binding affinity to ERβ (89.3 % inhibition of radioactive E2 binding) than to ERα (59.0 % inhibition of E2 binding) at 500 ug/ml concentration in ERa or ERβ-transfected Cos-7 cells. Estrogenic activity of RVE was confirmed by measuring the estrogen related gene mRNA expression in MCF-7 cells using RT-PCR. RVE down-regulated ERα mRNA level and up-regulated mRNA levels of PR, and pS2 genes. All of RVE compounds had a higher affinity to ERβ compared with ERa as the results of RVE in reporter gene assay and ER binding assay. Among the seven compounds which were purified from RVE, butin, butein, sulfuretin, and garbanzol had a strong estrogenic activity in ERE-mediated reporter gene assay. In receptor binding assay, butein and sulfuretin showed a stronger ERβ binding affinity compared with others. Collectively, these results indicated that RVE has estrogenic activity, which could be helpful to use for postmenopausal women.
Rhus verniciflua Strokes (RVS) has been used as a traditional herbal medicine, a food additives and a material for lacquer in Korea. In this study, we investigated the estrogenic activities of the hot water extracts of Rhus verniciflua Strokes xyleme (RVE) and its purified compounds. The in vitro estrogen receptor (ER)-mediated estrogenic/antiestrogenic activities were determined using an estrogen responsive element-driven reporter gene assay in MCF7/ERE and HEK293T cells. RVE showed estrogenic activity with a maximum 95.1% of 10-10 M estradiol (E2) and at 28.9 μg of EC50 in MCF7/ERE cells. Estrogenic activity of RVE mediated by ERβ was stronger than that by ERα in HEK293T cells which were transiently transfected with ERα or ERβ and reporter plasmid. It also showed a stronger binding affinity to ERβ (89.3 % inhibition of radioactive E2 binding) than to ERα (59.0 % inhibition of E2 binding) at 500 ug/ml concentration in ERa or ERβ-transfected Cos-7 cells. Estrogenic activity of RVE was confirmed by measuring the estrogen related gene mRNA expression in MCF-7 cells using RT-PCR. RVE down-regulated ERα mRNA level and up-regulated mRNA levels of PR, and pS2 genes. All of RVE compounds had a higher affinity to ERβ compared with ERa as the results of RVE in reporter gene assay and ER binding assay. Among the seven compounds which were purified from RVE, butin, butein, sulfuretin, and garbanzol had a strong estrogenic activity in ERE-mediated reporter gene assay. In receptor binding assay, butein and sulfuretin showed a stronger ERβ binding affinity compared with others. Collectively, these results indicated that RVE has estrogenic activity, which could be helpful to use for postmenopausal women.
주제어
#Rhus verniciflua stokes
#Estrogen activity
#Estrogen receptor alpha and beta
학위논문 정보
저자
선승한
학위수여기관
School of Life Sciences and Biotechnology, Korea University
학위구분
국내석사
학과
生命工學科 分子生物學專攻
지도교수
安秉潤
발행연도
2014
총페이지
ix, 68장
키워드
Rhus verniciflua stokes,
Estrogen activity,
Estrogen receptor alpha and beta
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