목적 : 종양 세포의 항암제 내성은 항암제 치료 실패의 주요 원인의 하나이다. 최근 연구들은 종양 세포의 상피-중배엽 전이 (epithelial-mesenchymal transition, EMT)는 항암제 내성의 원인 중 하나로 보고하고 있다. Snail은 EMT 주 유도 분자 중 하나이며, 항암제 내성 발생과 연관성이 높은 것으로 보고되어 있다. 본 연구에서는 Snail 발현을 short hairpin RNA (shRNA)와 ...
목적 : 종양 세포의 항암제 내성은 항암제 치료 실패의 주요 원인의 하나이다. 최근 연구들은 종양 세포의 상피-중배엽 전이 (epithelial-mesenchymal transition, EMT)는 항암제 내성의 원인 중 하나로 보고하고 있다. Snail은 EMT 주 유도 분자 중 하나이며, 항암제 내성 발생과 연관성이 높은 것으로 보고되어 있다. 본 연구에서는 Snail 발현을 short hairpin RNA (shRNA)와 활성산소 제거제를 사용하여 직접적인 연관성을 확인하고 또한 Snail 조절을 통한 항암제 내성 극복 가능성을 확인하고자 한다.
방법 : TUBO, TUBO-P2J, Sh3-B3, Sh1-B4 세포주의 Snail 발현을 real-time RT-PCR과 Western blot으로 확인하였다. 각 세포주에 epirubicin을 72 시간 처리한 후 세포의 생존을 WST-1으로 측정하였다. TUBO-P2J 세포주에 N-acetylcysteine (NAC), YCG063를 12 시간동안 전 처리한 후 Snail 단백질 감소와 epirubicin에 대한 감수성을 Western blot과 WST-1으로 각각 확인하였다. 인간유방암 세포주인 BT-20, MCF-7, MDA-MB-231, MDA-MB-453세포에서 YCG063 전처리에 따른 epirubicin에 대한 감수성 변화를 WST-1으로 확인하였다.
결과 : Epirubicin에 대한 IC50은 TUBO 세포주에서 0.278 ng/ml, TUBO-P2J세포주에서 31.96 ng/ml, Sh3-B3세포주에서는 7.03 ng/ml, 그리고 Sh1-B4세포주에서는 7.06 ng/ml이었으며 세포의 Snail발현양과 비례하였다. TUBO-P2J세포에서 Snail단백질 발현양은 10 mM의 NAC에 의해 35.4%, 10 uM의 YCG063에 의해 67%감소하였다. 활성산소 제거제를 전처리 하였을 때 TUBO-P2J 세포의 생존율은 NAC의 전처리에 의해 2 배 이상 증가되었으며 (p<0.0061), 10 uM의 YCG063에 의해 epirubicin 10 ng/ml에서 22.6% 그리고 100 ng/ml에서 53.6% 감소되었다 (p<0.0032). 또한 10 uM의 YCG063의 전처리는 epirubicin 10, 100 ng/ml 단독처리에 비해 세포자멸사를 2 배 이상 증가시켰다. 인간 유방암 세포주인 BT-20, MCF-7, MDA-MB-231, MDA-MB-453세포주에서 또한 epirubicin 10 ng/ml에서 24.9, 19.5, 16.9, 40.5% 씩, 100 ng/ml에서 20.3, 0, 9.1, 43.1% 씩 epirubicin 단독처리에 비해 세포생존률이 더 감소하였다 (p<0.0434). 또한 10 uM의 YCG063 단독처리에서도 17.2, 20.5, 11.3, 0.3% 씩 세포생존률이 감소하였다 (p<0.0161).
결론 : 본 연구에서는 활성산소 제거제에 의한 유방암세포의 항암제 감수성 증가를 확인하였다. 결과들은 항암제 내성과 Snail단백질발현의 연관성과 항암제 저항성에 대한 YCG063의 유용성을 제시하여 주었다. 그러나 왜 YCG063의 구체적인 작용기전에 대한 추가적인 연구가 필요하다.
목적 : 종양 세포의 항암제 내성은 항암제 치료 실패의 주요 원인의 하나이다. 최근 연구들은 종양 세포의 상피-중배엽 전이 (epithelial-mesenchymal transition, EMT)는 항암제 내성의 원인 중 하나로 보고하고 있다. Snail은 EMT 주 유도 분자 중 하나이며, 항암제 내성 발생과 연관성이 높은 것으로 보고되어 있다. 본 연구에서는 Snail 발현을 short hairpin RNA (shRNA)와 활성산소 제거제를 사용하여 직접적인 연관성을 확인하고 또한 Snail 조절을 통한 항암제 내성 극복 가능성을 확인하고자 한다.
방법 : TUBO, TUBO-P2J, Sh3-B3, Sh1-B4 세포주의 Snail 발현을 real-time RT-PCR과 Western blot으로 확인하였다. 각 세포주에 epirubicin을 72 시간 처리한 후 세포의 생존을 WST-1으로 측정하였다. TUBO-P2J 세포주에 N-acetylcysteine (NAC), YCG063를 12 시간동안 전 처리한 후 Snail 단백질 감소와 epirubicin에 대한 감수성을 Western blot과 WST-1으로 각각 확인하였다. 인간유방암 세포주인 BT-20, MCF-7, MDA-MB-231, MDA-MB-453세포에서 YCG063 전처리에 따른 epirubicin에 대한 감수성 변화를 WST-1으로 확인하였다.
결과 : Epirubicin에 대한 IC50은 TUBO 세포주에서 0.278 ng/ml, TUBO-P2J세포주에서 31.96 ng/ml, Sh3-B3세포주에서는 7.03 ng/ml, 그리고 Sh1-B4세포주에서는 7.06 ng/ml이었으며 세포의 Snail발현양과 비례하였다. TUBO-P2J세포에서 Snail단백질 발현양은 10 mM의 NAC에 의해 35.4%, 10 uM의 YCG063에 의해 67%감소하였다. 활성산소 제거제를 전처리 하였을 때 TUBO-P2J 세포의 생존율은 NAC의 전처리에 의해 2 배 이상 증가되었으며 (p<0.0061), 10 uM의 YCG063에 의해 epirubicin 10 ng/ml에서 22.6% 그리고 100 ng/ml에서 53.6% 감소되었다 (p<0.0032). 또한 10 uM의 YCG063의 전처리는 epirubicin 10, 100 ng/ml 단독처리에 비해 세포자멸사를 2 배 이상 증가시켰다. 인간 유방암 세포주인 BT-20, MCF-7, MDA-MB-231, MDA-MB-453세포주에서 또한 epirubicin 10 ng/ml에서 24.9, 19.5, 16.9, 40.5% 씩, 100 ng/ml에서 20.3, 0, 9.1, 43.1% 씩 epirubicin 단독처리에 비해 세포생존률이 더 감소하였다 (p<0.0434). 또한 10 uM의 YCG063 단독처리에서도 17.2, 20.5, 11.3, 0.3% 씩 세포생존률이 감소하였다 (p<0.0161).
결론 : 본 연구에서는 활성산소 제거제에 의한 유방암세포의 항암제 감수성 증가를 확인하였다. 결과들은 항암제 내성과 Snail단백질발현의 연관성과 항암제 저항성에 대한 YCG063의 유용성을 제시하여 주었다. 그러나 왜 YCG063의 구체적인 작용기전에 대한 추가적인 연구가 필요하다.
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