수산생물질병 중에 가장 많은 병을 유발하는 바이러스로 알려진 것은 Viral hemorrhagic septicemia virus (VHSV)와 Infectious hematopoietic necrosis virus (IHNV)이다. VHSV와 IHNV는 무지개송어를 비롯한 담수 연어과 어류에 감염되어 심각한 바이러스 질병을 야기하는 병원체이다. VHSV와 IHNV는 자연계 내의 바이러스가 양식환경에 유입되어 질병의 원인이 될 수 있으며 수산자원의 관리를 위하여 해마다 수백만 마리의 수산종묘가 연안에 방류되고 있어 양식산 어류와 자연산 어류에서의 바이러스 검출방법 ...
수산생물질병 중에 가장 많은 병을 유발하는 바이러스로 알려진 것은 Viral hemorrhagic septicemia virus (VHSV)와 Infectious hematopoietic necrosis virus (IHNV)이다. VHSV와 IHNV는 무지개송어를 비롯한 담수 연어과 어류에 감염되어 심각한 바이러스 질병을 야기하는 병원체이다. VHSV와 IHNV는 자연계 내의 바이러스가 양식환경에 유입되어 질병의 원인이 될 수 있으며 수산자원의 관리를 위하여 해마다 수백만 마리의 수산종묘가 연안에 방류되고 있어 양식산 어류와 자연산 어류에서의 바이러스 검출방법 최적화가 필요하다. VHSV 와 IHNV를 검출하는 방법으로 polyclonal antibody를 이용한 효소 면역측정법이나 웨스턴 블랏팅, 전자 현미경 관찰 등의 방법이 주로 사용되고 있으나 잠복성 및 감염초기의 바이러스 질병을 신속 진단하는 데에는 어려움이 있고, polyclonal antibody는 같은 성질의 항체를 계속적으로 얻을 수 없어 실험범위가 제한되어 있다. 최근에 바이러스의 검출을 위한 시험법으로 민감도와 특이도가 우수한 중합효소 연쇄반응 (polymerase chain reaction; PCR)을 활용한 유전자 증폭기술이 널리 활용되고 있다. 이 PCR법은 빠른 시간 내에 병원체의 검출이 가능하고 검출감도가 높으며, 또한 짧은 시간에 많은 시료를 분석할 수 있어 생물학적 시험법에 비해 시간과 경비를 절약 할 수 있다. 또한 바이러스 특이적 primer를 사용하여 바이러스 존재 유무를 검출하기 때문에 특이도가 매우 높다. 본 연구에서는 VHSV와 IHNV를 신속하게 정량적으로 검출 할 수 있는 TaqMan probereal-time PCR 시험법을 확립하였다. VHSV와 IHNV 핵산 증폭을 위한 특이적인 primer를 선별하였으며, TaqMan probe를 이용한 정량 분석법을 최적화 하였다. VHSV 분석법의 민감도는 8.10 × 10-1 TCID50/mL로 계산되었다. 확립된 시험법의 신뢰성 검증결과 이 real-time PCR 방법은 VHSV에 매우 특이성이 높았으며 재현성이 우수하였다. IHNV의 분석법의 민감도는 1.32× 100 TCID50/mL로 계산되었다. 확립된 시험법의 신뢰성 검증결과 이 real-time PCR 방법은 IHNV에 매우 특이성이 높았으며 재현성이 우수하였다. VHSV와 IHNV의 TaqMan probe real-time PCR을 이용한 정량 분석법은 양식산 어류와 자연산 어류에서의 바이러스 검출을 위한 기존의 시험법을 대체할 수 있는 우수한 방법으로 사료된다.
수산생물질병 중에 가장 많은 병을 유발하는 바이러스로 알려진 것은 Viral hemorrhagic septicemia virus (VHSV)와 Infectious hematopoietic necrosis virus (IHNV)이다. VHSV와 IHNV는 무지개송어를 비롯한 담수 연어과 어류에 감염되어 심각한 바이러스 질병을 야기하는 병원체이다. VHSV와 IHNV는 자연계 내의 바이러스가 양식환경에 유입되어 질병의 원인이 될 수 있으며 수산자원의 관리를 위하여 해마다 수백만 마리의 수산종묘가 연안에 방류되고 있어 양식산 어류와 자연산 어류에서의 바이러스 검출방법 최적화가 필요하다. VHSV 와 IHNV를 검출하는 방법으로 polyclonal antibody를 이용한 효소 면역측정법이나 웨스턴 블랏팅, 전자 현미경 관찰 등의 방법이 주로 사용되고 있으나 잠복성 및 감염초기의 바이러스 질병을 신속 진단하는 데에는 어려움이 있고, polyclonal antibody는 같은 성질의 항체를 계속적으로 얻을 수 없어 실험범위가 제한되어 있다. 최근에 바이러스의 검출을 위한 시험법으로 민감도와 특이도가 우수한 중합효소 연쇄반응 (polymerase chain reaction; PCR)을 활용한 유전자 증폭기술이 널리 활용되고 있다. 이 PCR법은 빠른 시간 내에 병원체의 검출이 가능하고 검출감도가 높으며, 또한 짧은 시간에 많은 시료를 분석할 수 있어 생물학적 시험법에 비해 시간과 경비를 절약 할 수 있다. 또한 바이러스 특이적 primer를 사용하여 바이러스 존재 유무를 검출하기 때문에 특이도가 매우 높다. 본 연구에서는 VHSV와 IHNV를 신속하게 정량적으로 검출 할 수 있는 TaqMan probe real-time PCR 시험법을 확립하였다. VHSV와 IHNV 핵산 증폭을 위한 특이적인 primer를 선별하였으며, TaqMan probe를 이용한 정량 분석법을 최적화 하였다. VHSV 분석법의 민감도는 8.10 × 10-1 TCID50/mL로 계산되었다. 확립된 시험법의 신뢰성 검증결과 이 real-time PCR 방법은 VHSV에 매우 특이성이 높았으며 재현성이 우수하였다. IHNV의 분석법의 민감도는 1.32× 100 TCID50/mL로 계산되었다. 확립된 시험법의 신뢰성 검증결과 이 real-time PCR 방법은 IHNV에 매우 특이성이 높았으며 재현성이 우수하였다. VHSV와 IHNV의 TaqMan probe real-time PCR을 이용한 정량 분석법은 양식산 어류와 자연산 어류에서의 바이러스 검출을 위한 기존의 시험법을 대체할 수 있는 우수한 방법으로 사료된다.
Viral hemorrhagic septicemia virus (VHSV) and Infectious hematopoietic necrosis virus (IHNV) are known as the most common causes of diseases in fisheries. VHSV and IHNV infect fishes of fresh water as well as ocean. Natural VHSV and IHNV may cause of disease by introducing into fish farm. A huge amo...
Viral hemorrhagic septicemia virus (VHSV) and Infectious hematopoietic necrosis virus (IHNV) are known as the most common causes of diseases in fisheries. VHSV and IHNV infect fishes of fresh water as well as ocean. Natural VHSV and IHNV may cause of disease by introducing into fish farm. A huge amount of fry are stocked into the coast. Therefore development of virus detection method is required. For the detection of VHSV and IHNV, enzyme immunoassay using polyclonal antibodies, western blotting, and electron microscopy are mainly used. However these methods have limitation to detect latent infection and an initial viral disease. Recently nucleotide amplification test using polymerase chain reaction (PCR) has been used widely for rapid and specific detection of viruses. In this study, TaqMan probe real-time quantitative PCR assays to detect VHSV and IHNV were developed and validated. Specific primers for amplification of VHSV and IHNV were selected, and VHSV and IHNV were quantified by use of TaqMan probe. The sensitivity for VHSV real-time PCR was calculated to be 8.10 × 10-1 TCID50/mL. The TaqMan probe real-time PCR assay was proven to be reproducible and very specific to VHSV. The sensitivity for IHNV real-time PCR was calculated to be 1.32× 100 TCID50/mL. The TaqMan probe real-time PCR assay was proven to be reproducible and very specific to IHNV. Therefore, it was concluded that these rapid, specific, and robust assays could replace the conventional assay for detection of these viruses.
Viral hemorrhagic septicemia virus (VHSV) and Infectious hematopoietic necrosis virus (IHNV) are known as the most common causes of diseases in fisheries. VHSV and IHNV infect fishes of fresh water as well as ocean. Natural VHSV and IHNV may cause of disease by introducing into fish farm. A huge amount of fry are stocked into the coast. Therefore development of virus detection method is required. For the detection of VHSV and IHNV, enzyme immunoassay using polyclonal antibodies, western blotting, and electron microscopy are mainly used. However these methods have limitation to detect latent infection and an initial viral disease. Recently nucleotide amplification test using polymerase chain reaction (PCR) has been used widely for rapid and specific detection of viruses. In this study, TaqMan probe real-time quantitative PCR assays to detect VHSV and IHNV were developed and validated. Specific primers for amplification of VHSV and IHNV were selected, and VHSV and IHNV were quantified by use of TaqMan probe. The sensitivity for VHSV real-time PCR was calculated to be 8.10 × 10-1 TCID50/mL. The TaqMan probe real-time PCR assay was proven to be reproducible and very specific to VHSV. The sensitivity for IHNV real-time PCR was calculated to be 1.32× 100 TCID50/mL. The TaqMan probe real-time PCR assay was proven to be reproducible and very specific to IHNV. Therefore, it was concluded that these rapid, specific, and robust assays could replace the conventional assay for detection of these viruses.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.