유비퀴틴은 단백질 분해를 조절하는 주요 단백질이다. 사전연구에서 폴리유비퀴틴 유전자 Ubc 부족은 잘못 접힌 단백질 응집체의 축적과 낮은 세포 생존도를 보였다. 또한 Ubc 결손 마우스 태아 섬유화 세포에서 기초 프로테아좀 활성의 낮은 레벨과 아비산나트륨에 대한 낮은 저항성을 보였다. 그러나 단백질 응집체가 형성 됬을 때 세포 생존와 저항성에 유비퀴틴 레벨의 역할 및 프로테아좀의 기능에 끼치는 영향에 대해서는 알려져 있지 않다. 첫번째로, 이러한 표현형을 모방하기위해, c-myc 표시된 폴리글루타민103 ...
유비퀴틴은 단백질 분해를 조절하는 주요 단백질이다. 사전연구에서 폴리유비퀴틴 유전자 Ubc 부족은 잘못 접힌 단백질 응집체의 축적과 낮은 세포 생존도를 보였다. 또한 Ubc 결손 마우스 태아 섬유화 세포에서 기초 프로테아좀 활성의 낮은 레벨과 아비산나트륨에 대한 낮은 저항성을 보였다. 그러나 단백질 응집체가 형성 됬을 때 세포 생존와 저항성에 유비퀴틴 레벨의 역할 및 프로테아좀의 기능에 끼치는 영향에 대해서는 알려져 있지 않다. 첫번째로, 이러한 표현형을 모방하기위해, c-myc 표시된 폴리글루타민103 아데노 바이러스를 폴리글루타민 확장 응집체를 형성하기 위해 사용되었다. Ubc 결손 마우스 태아 섬유화세포에서 비정상적인 단백질 응집체의 축적은 증가되며, 이의 분해 속도는 지연되고, 세포 생존도는 떨어졌다. Ubc 결손 마우스 태아 섬유화세포에서 분해 지연된 단백질 응집체는 감소된 오토파지 분해 때문으로 설명된다. 두번째, Ubc 결손 마우스 태아 섬유화세포의 감소된 프로테아좀 활성은 프로테이좀의 서브유닛의 mRNA 레벨이 반응하기 않은 것에 결과이며, 이는 Nrf1과 관련되어있다. Nrf1은 프로테아좀 억제 후에 프로테아좀 회복에 잘 알려진 조절자이다. 아비산나트륨 처리시에 qRT-PCR을 통한 프로테아좀 서브유닛 표현을 측정하면서 이러한 가설은 실험되었다. 세번째, 폴리 유비퀴틴 유전자 Ubc는 Nrf2의 직접적인 타겟인지 확인하기 위해, 프로모터 어세이를 수행하였다. Nrf2는 산화방지 반응 요소 (ARE) 에 붙는 전사 조절 인자이며, Nrf2-Keap1 경로를 통해 산화 환원의 항상성을 조절한다. 여기서, 번역 시작점으로 부터 -1951~-1943 bp 상위 영역을 ARE라 가설을 세운다. 하지만, tBHQ 처리와 Nrf2과발현과 함께 추측하는 ARE가 돌연변이된 부분적으로 제거된 프로모터를 사용하면서 Ubc 프로모터에 ARE가 관찰되는 것을 재확인하지 못했다.
유비퀴틴은 단백질 분해를 조절하는 주요 단백질이다. 사전연구에서 폴리유비퀴틴 유전자 Ubc 부족은 잘못 접힌 단백질 응집체의 축적과 낮은 세포 생존도를 보였다. 또한 Ubc 결손 마우스 태아 섬유화 세포에서 기초 프로테아좀 활성의 낮은 레벨과 아비산나트륨에 대한 낮은 저항성을 보였다. 그러나 단백질 응집체가 형성 됬을 때 세포 생존와 저항성에 유비퀴틴 레벨의 역할 및 프로테아좀의 기능에 끼치는 영향에 대해서는 알려져 있지 않다. 첫번째로, 이러한 표현형을 모방하기위해, c-myc 표시된 폴리글루타민103 아데노 바이러스를 폴리글루타민 확장 응집체를 형성하기 위해 사용되었다. Ubc 결손 마우스 태아 섬유화세포에서 비정상적인 단백질 응집체의 축적은 증가되며, 이의 분해 속도는 지연되고, 세포 생존도는 떨어졌다. Ubc 결손 마우스 태아 섬유화세포에서 분해 지연된 단백질 응집체는 감소된 오토파지 분해 때문으로 설명된다. 두번째, Ubc 결손 마우스 태아 섬유화세포의 감소된 프로테아좀 활성은 프로테이좀의 서브유닛의 mRNA 레벨이 반응하기 않은 것에 결과이며, 이는 Nrf1과 관련되어있다. Nrf1은 프로테아좀 억제 후에 프로테아좀 회복에 잘 알려진 조절자이다. 아비산나트륨 처리시에 qRT-PCR을 통한 프로테아좀 서브유닛 표현을 측정하면서 이러한 가설은 실험되었다. 세번째, 폴리 유비퀴틴 유전자 Ubc는 Nrf2의 직접적인 타겟인지 확인하기 위해, 프로모터 어세이를 수행하였다. Nrf2는 산화방지 반응 요소 (ARE) 에 붙는 전사 조절 인자이며, Nrf2-Keap1 경로를 통해 산화 환원의 항상성을 조절한다. 여기서, 번역 시작점으로 부터 -1951~-1943 bp 상위 영역을 ARE라 가설을 세운다. 하지만, tBHQ 처리와 Nrf2과발현과 함께 추측하는 ARE가 돌연변이된 부분적으로 제거된 프로모터를 사용하면서 Ubc 프로모터에 ARE가 관찰되는 것을 재확인하지 못했다.
Ubiquitin is a key protein in the regulation of protein degradation. In a previous study, deficiency in polyubiquitin gene Ubc was shown to increase accumulation of misfolded protein aggregates and lower cell viability. Ubc-/- mouse embryonic fibroblasts (MEFs) also showed a low basal level of prote...
Ubiquitin is a key protein in the regulation of protein degradation. In a previous study, deficiency in polyubiquitin gene Ubc was shown to increase accumulation of misfolded protein aggregates and lower cell viability. Ubc-/- mouse embryonic fibroblasts (MEFs) also showed a low basal level of proteasome activity and less resistance in response to NaAsO2 treatment. However, the role of Ub level on cellular survival and resistance when protein aggregates are formed, and its effect on the function of proteasome, are unknown. First of all, to mimic these phenotypes, c-myc-tagged Q103 adenovirus was used to form polyQ-expanded aggregates. Abnormal accumulation of aggregates increased, its clearance rate was delayed, and cell viability was reduced in Ubc-/- MEFs. Rate of clearance of protein aggregates in Ubc-/- MEFs could be attributed to reduced degradation of autophagy. Second, it is hypothesized that the reduced proteasome activity of Ubc-/- MEFs can be attributed to non-responsive mRNA level of proteasome subunits which is mediated by Nrf1. Nrf1(nuclear factor erythroid 2-like 1) is a well-known regulator of proteasome recovery following proteasome inhibition. I tested this hypothesis by qRT-PCR measuring proteasome subunit expression under NaAsO2 treatment. Third, to confirm polyubiquitin gene Ubc is the direct target of Nrf2, I carried out promoter assay. Nrf2 (nuclear factor erythroid 2-like 2) is a transcription factor to bind to antioxidant response element (ARE) and regulates redox homeostasis through Nrf2-Keap1 pathway. Herein, I propose that the consensus sequence of ARE is at the region -1951~ -1943 bp upstream of translation start site in Ubc promoter. However, I could not reconfirm the exact location of ARE in Ubc promoter using a Ubc-710 deletion construct that the putative ARE was mutated with tBHQ treatment and by overexpression of Nrf2.
Ubiquitin is a key protein in the regulation of protein degradation. In a previous study, deficiency in polyubiquitin gene Ubc was shown to increase accumulation of misfolded protein aggregates and lower cell viability. Ubc-/- mouse embryonic fibroblasts (MEFs) also showed a low basal level of proteasome activity and less resistance in response to NaAsO2 treatment. However, the role of Ub level on cellular survival and resistance when protein aggregates are formed, and its effect on the function of proteasome, are unknown. First of all, to mimic these phenotypes, c-myc-tagged Q103 adenovirus was used to form polyQ-expanded aggregates. Abnormal accumulation of aggregates increased, its clearance rate was delayed, and cell viability was reduced in Ubc-/- MEFs. Rate of clearance of protein aggregates in Ubc-/- MEFs could be attributed to reduced degradation of autophagy. Second, it is hypothesized that the reduced proteasome activity of Ubc-/- MEFs can be attributed to non-responsive mRNA level of proteasome subunits which is mediated by Nrf1. Nrf1(nuclear factor erythroid 2-like 1) is a well-known regulator of proteasome recovery following proteasome inhibition. I tested this hypothesis by qRT-PCR measuring proteasome subunit expression under NaAsO2 treatment. Third, to confirm polyubiquitin gene Ubc is the direct target of Nrf2, I carried out promoter assay. Nrf2 (nuclear factor erythroid 2-like 2) is a transcription factor to bind to antioxidant response element (ARE) and regulates redox homeostasis through Nrf2-Keap1 pathway. Herein, I propose that the consensus sequence of ARE is at the region -1951~ -1943 bp upstream of translation start site in Ubc promoter. However, I could not reconfirm the exact location of ARE in Ubc promoter using a Ubc-710 deletion construct that the putative ARE was mutated with tBHQ treatment and by overexpression of Nrf2.
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