Aspergillus fumigatus 의 G 단백질 신호 전달 체계 조절자인 RgsD 유전자의 병원성 제어능력, 무성생식과 외부자극에 대한 내성의 조절 기능에 관한 연구 Regulator of G-protein signaling in Aspergillus fumigatus, RgsD control stress tolerance, asexual development and virulence for pathogenicity원문보기
G 단백질 신호 전달은 모든 진핵 생물에서 보존되며 세포의 생장과 분화, 발달 등 세포 생장에 매우 중요한 역할을 하는 신호전달 체계이다. 이 신호 전달 체계의 핵심은 G 단백질 소단위체인Gα 단백질의 활성이다. Gα 단백질의 활성은 GTP의 가수분해를 통해 이루어지며 G 단백질 신호전달 조절 자, RGS에 의해 조절된다. 병원성 균류인 A. fumigatus의 RGS 단백질인 RgsD 유전적 특성을 알아보기 위해 유전자 결실 돌연변이를 통해 기능을 파악하였다. 결과에 따르면 RgsD 는 외부 자극에 의한 스트레스 내성을 조절하며 숙주세포의 면역작용을 이겨내기 위한 멜라닌 생합성 능력과 질병을 야기하는 독성물질인 ...
G 단백질 신호 전달은 모든 진핵 생물에서 보존되며 세포의 생장과 분화, 발달 등 세포 생장에 매우 중요한 역할을 하는 신호전달 체계이다. 이 신호 전달 체계의 핵심은 G 단백질 소단위체인Gα 단백질의 활성이다. Gα 단백질의 활성은 GTP의 가수분해를 통해 이루어지며 G 단백질 신호전달 조절 자, RGS에 의해 조절된다. 병원성 균류인 A. fumigatus의 RGS 단백질인 RgsD 유전적 특성을 알아보기 위해 유전자 결실 돌연변이를 통해 기능을 파악하였다. 결과에 따르면 RgsD 는 외부 자극에 의한 스트레스 내성을 조절하며 숙주세포의 면역작용을 이겨내기 위한 멜라닌 생합성 능력과 질병을 야기하는 독성물질인 gliotoxin 생산능력을 억제 조절하는 것을 분자생물학적 실험기법과 G. mellonella를 통해 생체 내 실험기법을 통해 증명했다. 또한RgsD 는 포자의 균사 발아능력과 포자생성능력을 조절하는 것을 실험을 통해 밝혔다. 그리고 RGS 단백질과 Gα 단백질의 연관관계를 찾기 위해 결실 돌연변이 균 주의 총 RNA에서 후보Gα 단백질들의 m RNA 발현 양을 조사하였다. 그 결과 Gα 단백질 후보 중 GpaB의 발현 양이 가장 높았고 RgsD가 조절하는 Gα 단백질은 GpaB로 사료되었다. 추가적으로 RgsD와 GpaB 둘 다 결실 돌연변이를 일으켜 발달 양상을 관찰한 결과 야생형 균주와 비슷한 발달 양상을 보이는 것으로 보아 GpaB 결실 돌연변이 균주가 RgsD 결실 돌연변이의 표현형을 억제 조절한다는 것을 확인하였다. 또한 과발현 RgsD돌연변이 균의 m RNA 발현양 변화를 확인 한 결과 RgsD 유전자가 GpaB를 조절하는 것을 확인 할 수 있었다. 결론적으로 이 연구를 통해 RgsD가 다양한 외부신호에 대해 반응하는 균류 신호전달 체계의 상위 조절자인 것을 증명하였다.
G 단백질 신호 전달은 모든 진핵 생물에서 보존되며 세포의 생장과 분화, 발달 등 세포 생장에 매우 중요한 역할을 하는 신호전달 체계이다. 이 신호 전달 체계의 핵심은 G 단백질 소단위체인Gα 단백질의 활성이다. Gα 단백질의 활성은 GTP의 가수분해를 통해 이루어지며 G 단백질 신호전달 조절 자, RGS에 의해 조절된다. 병원성 균류인 A. fumigatus의 RGS 단백질인 RgsD 유전적 특성을 알아보기 위해 유전자 결실 돌연변이를 통해 기능을 파악하였다. 결과에 따르면 RgsD 는 외부 자극에 의한 스트레스 내성을 조절하며 숙주세포의 면역작용을 이겨내기 위한 멜라닌 생합성 능력과 질병을 야기하는 독성물질인 gliotoxin 생산능력을 억제 조절하는 것을 분자생물학적 실험기법과 G. mellonella를 통해 생체 내 실험기법을 통해 증명했다. 또한RgsD 는 포자의 균사 발아능력과 포자생성능력을 조절하는 것을 실험을 통해 밝혔다. 그리고 RGS 단백질과 Gα 단백질의 연관관계를 찾기 위해 결실 돌연변이 균 주의 총 RNA에서 후보Gα 단백질들의 m RNA 발현 양을 조사하였다. 그 결과 Gα 단백질 후보 중 GpaB의 발현 양이 가장 높았고 RgsD가 조절하는 Gα 단백질은 GpaB로 사료되었다. 추가적으로 RgsD와 GpaB 둘 다 결실 돌연변이를 일으켜 발달 양상을 관찰한 결과 야생형 균주와 비슷한 발달 양상을 보이는 것으로 보아 GpaB 결실 돌연변이 균주가 RgsD 결실 돌연변이의 표현형을 억제 조절한다는 것을 확인하였다. 또한 과발현 RgsD돌연변이 균의 m RNA 발현양 변화를 확인 한 결과 RgsD 유전자가 GpaB를 조절하는 것을 확인 할 수 있었다. 결론적으로 이 연구를 통해 RgsD가 다양한 외부신호에 대해 반응하는 균류 신호전달 체계의 상위 조절자인 것을 증명하였다.
Regulator of G protein signaling perform a central role in controlling the hydrolysis level of hetrotrimeric G protein signal transduction. Because of previous studied RgsA in A. nidulans, homologue of RgsA is identified with RgsD (AFUA_5g00900) in A. fumigatus. Characterization and identification o...
Regulator of G protein signaling perform a central role in controlling the hydrolysis level of hetrotrimeric G protein signal transduction. Because of previous studied RgsA in A. nidulans, homologue of RgsA is identified with RgsD (AFUA_5g00900) in A. fumigatus. Characterization and identification of the RgsD gene exhibited that RgsD controls stress tolerance, melanin pigments biosynthesis and gliotoxin production for defense mechanism against host immune system. We examined to confirm virulence for pathogenicity in vivo experiment using G.mellonella wax-moth model, in vivo result also reveal that deletion of RgsD mutant strain was more higher morality and fast color change that mean infection rate. Moreover, RgsD gene downregulates germination rate, conidiation and external stress tolerance. And then, activator of G protein signaling, Gα protein candidate, GpaB is more expressed transcription level in deletion of RgsD, suggesting that these result is possibility of RgsD-GpaB pair. To confirm that GpaB is the primary target of RgsD control, we generated ∆rgsD;∆gpaB double mutants, The colony phenotype of the ∆rgsD;∆gpaB double knock out mutant was similar to wild type, suggesting that ∆gpaB inhibited ∆rgsD. These results indicate that RgsD negatively regulates GpaB-mediated signaling, which might be involved with control of melanin biosynthesis. Additionally, we generated over-expression RgsD strain. There is high expression of GpaB in OErgsD RNA compared to WT. Our study describe a characterization of RgsD function which affect upstream regulator of A. fumigatus G protein signal transduction to environmental change and control virulence for pathogenicity against host immune system.
Regulator of G protein signaling perform a central role in controlling the hydrolysis level of hetrotrimeric G protein signal transduction. Because of previous studied RgsA in A. nidulans, homologue of RgsA is identified with RgsD (AFUA_5g00900) in A. fumigatus. Characterization and identification of the RgsD gene exhibited that RgsD controls stress tolerance, melanin pigments biosynthesis and gliotoxin production for defense mechanism against host immune system. We examined to confirm virulence for pathogenicity in vivo experiment using G.mellonella wax-moth model, in vivo result also reveal that deletion of RgsD mutant strain was more higher morality and fast color change that mean infection rate. Moreover, RgsD gene downregulates germination rate, conidiation and external stress tolerance. And then, activator of G protein signaling, Gα protein candidate, GpaB is more expressed transcription level in deletion of RgsD, suggesting that these result is possibility of RgsD-GpaB pair. To confirm that GpaB is the primary target of RgsD control, we generated ∆rgsD;∆gpaB double mutants, The colony phenotype of the ∆rgsD;∆gpaB double knock out mutant was similar to wild type, suggesting that ∆gpaB inhibited ∆rgsD. These results indicate that RgsD negatively regulates GpaB-mediated signaling, which might be involved with control of melanin biosynthesis. Additionally, we generated over-expression RgsD strain. There is high expression of GpaB in OErgsD RNA compared to WT. Our study describe a characterization of RgsD function which affect upstream regulator of A. fumigatus G protein signal transduction to environmental change and control virulence for pathogenicity against host immune system.
주제어
#G protein
#RGS
#virulence
#asexual development
#Aspergillosis
학위논문 정보
저자
김용
학위수여기관
대전대학교 대학원
학위구분
국내석사
학과
미생물학과 균학전공
지도교수
신광수
발행연도
2016
총페이지
66
키워드
G protein,
RGS,
virulence,
asexual development,
Aspergillosis
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