악성 흑색종 (Malignant melanoma)은 치료가 어려운 피부암이며, 암의 증식과 전이와 관련된 요인에 대해 많은 연구가 진행 중이다. Rac1은 small guanosine triphosphates (GTPases)의 Rho family에 속하고, Actin 세포골격의 중요한 조절자이며, 세포의 이동과 전이를 조절하는 신호를 매개하는 역할을 한다. Dedicator of cytokinesis I은 Dock180으로도 알려져 있으며 Rho GTPases의 Guanine nucleotide exchange factors (GEFs)이며, GDP/GTP 교환을 매개한다. Rac1의 활성을 일으키기 위하여 Dock180은 Engulfment and cell motility 1 (Elmo1)과의 결합을 필요로 하며, Elmo1은 Dock180의 ...
악성 흑색종 (Malignant melanoma)은 치료가 어려운 피부암이며, 암의 증식과 전이와 관련된 요인에 대해 많은 연구가 진행 중이다. Rac1은 small guanosine triphosphates (GTPases)의 Rho family에 속하고, Actin 세포골격의 중요한 조절자이며, 세포의 이동과 전이를 조절하는 신호를 매개하는 역할을 한다. Dedicator of cytokinesis I은 Dock180으로도 알려져 있으며 Rho GTPases의 Guanine nucleotide exchange factors (GEFs)이며, GDP/GTP 교환을 매개한다. Rac1의 활성을 일으키기 위하여 Dock180은 Engulfment and cell motility 1 (Elmo1)과의 결합을 필요로 하며, Elmo1은 Dock180의 유비퀴틴화를 억제하는 것으로 알려져 있다. 따라서 본 연구에서는 Dock180과 Elmo1이 피부암 세포 (Human malignant melanoma cell line G361)의 세포 증식 과정과 세포 이동을 변화시킴으로서 암의 진행에 관여한다는 가설을 설정하였다. 이를 확인하기 위해, 흑색종 세포인 G361 세포를 이용하여 Western blot 분석, 세포자멸사 분석, 세포 증식 분석, Wound healing assay를 통한 Dock180과 Elmo1의 기능에 대해 분석하였다. G361 세포에 Dock180-siRNA를 처리하였을 때, Elmo1의 발현은 감소하였으나, Rac1의 발현은 변하지 않았다. G361 세포에 Elmo1-siRNA를 처리하였을 때, Rac1의 발현은 감소하였지만, Dock180의 발현은 변하지 않았다. G361 세포에서 Dock180과 Elmo1-siRNA를 처리하였을 때, 세포자멸사가 증가하였다. Dock180 과 Elmo1을 억제하였을 때, G361 세포의 이동이 현저히 감소하였으며, pERK1/2 와 pAKT 의 발현도 감소하였다. 이를 통해 보았을 때, Dock180과 Elmo1이 암세포의 증식과 이동을 조절하는 것과 관련이 있음을 확인 할 수 있었으며, Dock180과 Elmo1이 피부암의 치료와 예방에 있어 잠재적인 표적이 될 수 있음을 제안하는 바이다.
악성 흑색종 (Malignant melanoma)은 치료가 어려운 피부암이며, 암의 증식과 전이와 관련된 요인에 대해 많은 연구가 진행 중이다. Rac1은 small guanosine triphosphates (GTPases)의 Rho family에 속하고, Actin 세포골격의 중요한 조절자이며, 세포의 이동과 전이를 조절하는 신호를 매개하는 역할을 한다. Dedicator of cytokinesis I은 Dock180으로도 알려져 있으며 Rho GTPases의 Guanine nucleotide exchange factors (GEFs)이며, GDP/GTP 교환을 매개한다. Rac1의 활성을 일으키기 위하여 Dock180은 Engulfment and cell motility 1 (Elmo1)과의 결합을 필요로 하며, Elmo1은 Dock180의 유비퀴틴화를 억제하는 것으로 알려져 있다. 따라서 본 연구에서는 Dock180과 Elmo1이 피부암 세포 (Human malignant melanoma cell line G361)의 세포 증식 과정과 세포 이동을 변화시킴으로서 암의 진행에 관여한다는 가설을 설정하였다. 이를 확인하기 위해, 흑색종 세포인 G361 세포를 이용하여 Western blot 분석, 세포자멸사 분석, 세포 증식 분석, Wound healing assay를 통한 Dock180과 Elmo1의 기능에 대해 분석하였다. G361 세포에 Dock180-siRNA를 처리하였을 때, Elmo1의 발현은 감소하였으나, Rac1의 발현은 변하지 않았다. G361 세포에 Elmo1-siRNA를 처리하였을 때, Rac1의 발현은 감소하였지만, Dock180의 발현은 변하지 않았다. G361 세포에서 Dock180과 Elmo1-siRNA를 처리하였을 때, 세포자멸사가 증가하였다. Dock180 과 Elmo1을 억제하였을 때, G361 세포의 이동이 현저히 감소하였으며, pERK1/2 와 pAKT 의 발현도 감소하였다. 이를 통해 보았을 때, Dock180과 Elmo1이 암세포의 증식과 이동을 조절하는 것과 관련이 있음을 확인 할 수 있었으며, Dock180과 Elmo1이 피부암의 치료와 예방에 있어 잠재적인 표적이 될 수 있음을 제안하는 바이다.
Background Melanoma is resistant to all available therapies and has been challenging the scientific community for decades. The Rho family of small guanosine triphosphates (GTPases), including Rac1, is a key regulator of actin cytoskeletal dynamics and plays a role in relaying signals to downstr...
Background Melanoma is resistant to all available therapies and has been challenging the scientific community for decades. The Rho family of small guanosine triphosphates (GTPases), including Rac1, is a key regulator of actin cytoskeletal dynamics and plays a role in relaying signals to downstream effectors that regulate cell migration and invasion. The dedicator of cytokinesis I, also known as Dock180, superfamily of proteins was identified as novel, unconventional guanine nucleotide exchange factors (GEF) for Rho GTPases. In particular, Dock180 requires binding to engulfment and cell motility 1 (ELMO1) to achieve nucleotide exchange on Rac. Therefore I hypothesized that Dock180 and Elmo1 may be involved in cancer progression by alterating the apoptosis and cell migration of melanoma cells. Objective To assess the role of Dock180 and Elmo1 in malignant melanoma cell line G361.
Methods The human malignant melanoma cell line G361 was obtained from the American Type Culture Collection (CRL 1424; Virginia, MD, USA). I assessed the role of Dock180 and Elmo1 in G361 cells with siRNA through western blot analysis, apoptosis assay, cell proliferation assay and wound healing assay.
Results G361 cells transfected with a siRNA containing target specific sequences for Dock180 downregulated Dock180 expression and significantly attenuated Elmo1 protein levels while having no effect on Rac1 protein levels. However, siRNA for Elmo1 inhibited Elmo1 expression and downregulated Rac1 protein expression without alteration of Dock180 protein expression. Increased rate of apoptosis was found in G361 cells after transfection with Dock180- and Elmo1-specific siRNA. Silencing of both Dock180 and Elmo1 significantly decreased cell migration of G361 cells and the levels of pERK1/2 and pAKT.
Conclusion These results showed that Dock180 and Elmo1 stimulate cancer cell proliferation and migration by regulating Rac1. I present that Dock180 and Elmo1 are functionally related to pathophysiology of cancer and suggest that Dock180 and Elmo1 can be potential targets for treatment and/or prevention of the skin cancers.
Background Melanoma is resistant to all available therapies and has been challenging the scientific community for decades. The Rho family of small guanosine triphosphates (GTPases), including Rac1, is a key regulator of actin cytoskeletal dynamics and plays a role in relaying signals to downstream effectors that regulate cell migration and invasion. The dedicator of cytokinesis I, also known as Dock180, superfamily of proteins was identified as novel, unconventional guanine nucleotide exchange factors (GEF) for Rho GTPases. In particular, Dock180 requires binding to engulfment and cell motility 1 (ELMO1) to achieve nucleotide exchange on Rac. Therefore I hypothesized that Dock180 and Elmo1 may be involved in cancer progression by alterating the apoptosis and cell migration of melanoma cells. Objective To assess the role of Dock180 and Elmo1 in malignant melanoma cell line G361.
Methods The human malignant melanoma cell line G361 was obtained from the American Type Culture Collection (CRL 1424; Virginia, MD, USA). I assessed the role of Dock180 and Elmo1 in G361 cells with siRNA through western blot analysis, apoptosis assay, cell proliferation assay and wound healing assay.
Results G361 cells transfected with a siRNA containing target specific sequences for Dock180 downregulated Dock180 expression and significantly attenuated Elmo1 protein levels while having no effect on Rac1 protein levels. However, siRNA for Elmo1 inhibited Elmo1 expression and downregulated Rac1 protein expression without alteration of Dock180 protein expression. Increased rate of apoptosis was found in G361 cells after transfection with Dock180- and Elmo1-specific siRNA. Silencing of both Dock180 and Elmo1 significantly decreased cell migration of G361 cells and the levels of pERK1/2 and pAKT.
Conclusion These results showed that Dock180 and Elmo1 stimulate cancer cell proliferation and migration by regulating Rac1. I present that Dock180 and Elmo1 are functionally related to pathophysiology of cancer and suggest that Dock180 and Elmo1 can be potential targets for treatment and/or prevention of the skin cancers.
주제어
#Dock180(Dedicator of cytokinesis I) Elmo1(engulfment and cell motility 1) Malignant melanoma
학위논문 정보
저자
배진호
학위수여기관
순천향대학교 대학원
학위구분
국내석사
학과
의학과
지도교수
조문균
발행연도
2017
총페이지
ii, 22 p.
키워드
Dock180(Dedicator of cytokinesis I) Elmo1(engulfment and cell motility 1) Malignant melanoma
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