동종 조혈모세포이식(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation, AHSCT) 환자들의 이식 후 사람거대세포바이러스(human cytomegalovirus, HCMV)의 재활성화 및 감염예방을 위한 HCMV-특이 세포독성 T 세포(HCMV-specific cytotoxic T lymphocyte)의 입양세포면역치료(adoptive cellular immunotherapy)는 세포면역성을 회복하는데 매우 효과적이다. 현재까지 세포독성 T 림프구(cytotoxic T ...
동종 조혈모세포이식(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation, AHSCT) 환자들의 이식 후 사람거대세포바이러스(human cytomegalovirus, HCMV)의 재활성화 및 감염예방을 위한 HCMV-특이 세포독성 T 세포(HCMV-specific cytotoxic T lymphocyte)의 입양세포면역치료(adoptive cellular immunotherapy)는 세포면역성을 회복하는데 매우 효과적이다. 현재까지 세포독성 T 림프구(cytotoxic T lymphocyte, CTL) 유도 및 증식방법에는 엡스테인 바 바이러스(Epstein-barr virus, EBV)에 의해 형질전환 된 B 세포나 수지상세포(dendritic cell)와 같은 항원제시세포의 제조, 항원 특이성을 부여하기 위한 재조합 바이러스의 사용 등을 필요로 하고, 사람조직적합항원(Human Leukocyte Antigen, HLA) 형태에 제한적이며, 고비용, 장기간의 배양이 소요되는 등의 문제점들이 있었다. 본 연구에서는 면역세포에 대한 면역원성 항원결정부위(immunodominant epitope) 탐색을 위해 주로 사용되던 overlapping peptide를 항원으로 사용하여 이를 해결하고자 하였다. HCMV-특이 CTL의 체외배양 및 증식(in vitro expansion)을 위해 HLA-A*02:01 양성 공여자의 말초혈액(peripheral blood)으로부터 말초혈액 단핵세포(peripheral blood mononuclear cell, PBMC)를 분리하고 HCMV pp65 항원에 대한 overlapping peptide를 사용하여 HCMV-특이 CTL을 유도하였다. HCMV pp65-특이 T 세포가 양성인 PBMC로부터 유도 및 증식된 CTL은 epitope peptide를 사용한 경우와 비교하여 동등 이상의 CTL 증식률을 보였다. 또한 HCMV 항원이 감작된 표적세포에 대해서 특이적인 세포독성을 나타내었고, 비표적세포에 대해서는 반응성을 보이지 않았다. 그리고 PBMC 중 0.4% 수준이던 HCMV-특이 CTL이 33.7%까지 증식 유도됨을 확인하여 입양세포면역치료를 위한 임상적용 가능한 체외배양 및 증식방법임을 보여주었다.
동종 조혈모세포이식(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation, AHSCT) 환자들의 이식 후 사람거대세포바이러스(human cytomegalovirus, HCMV)의 재활성화 및 감염예방을 위한 HCMV-특이 세포독성 T 세포(HCMV-specific cytotoxic T lymphocyte)의 입양세포면역치료(adoptive cellular immunotherapy)는 세포면역성을 회복하는데 매우 효과적이다. 현재까지 세포독성 T 림프구(cytotoxic T lymphocyte, CTL) 유도 및 증식방법에는 엡스테인 바 바이러스(Epstein-barr virus, EBV)에 의해 형질전환 된 B 세포나 수지상세포(dendritic cell)와 같은 항원제시세포의 제조, 항원 특이성을 부여하기 위한 재조합 바이러스의 사용 등을 필요로 하고, 사람조직적합항원(Human Leukocyte Antigen, HLA) 형태에 제한적이며, 고비용, 장기간의 배양이 소요되는 등의 문제점들이 있었다. 본 연구에서는 면역세포에 대한 면역원성 항원결정부위(immunodominant epitope) 탐색을 위해 주로 사용되던 overlapping peptide를 항원으로 사용하여 이를 해결하고자 하였다. HCMV-특이 CTL의 체외배양 및 증식(in vitro expansion)을 위해 HLA-A*02:01 양성 공여자의 말초혈액(peripheral blood)으로부터 말초혈액 단핵세포(peripheral blood mononuclear cell, PBMC)를 분리하고 HCMV pp65 항원에 대한 overlapping peptide를 사용하여 HCMV-특이 CTL을 유도하였다. HCMV pp65-특이 T 세포가 양성인 PBMC로부터 유도 및 증식된 CTL은 epitope peptide를 사용한 경우와 비교하여 동등 이상의 CTL 증식률을 보였다. 또한 HCMV 항원이 감작된 표적세포에 대해서 특이적인 세포독성을 나타내었고, 비표적세포에 대해서는 반응성을 보이지 않았다. 그리고 PBMC 중 0.4% 수준이던 HCMV-특이 CTL이 33.7%까지 증식 유도됨을 확인하여 입양세포면역치료를 위한 임상적용 가능한 체외배양 및 증식방법임을 보여주었다.
Adoptive cellular immunotherapy of human cytomegalovirus specific cytotoxic T lymphocyte (CTL) is highly efficient in recovery of cellular immunity from reactivation and infection of human cytomegalovirus (HCMV) after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (AHSCT). Till now, CTLs have be...
Adoptive cellular immunotherapy of human cytomegalovirus specific cytotoxic T lymphocyte (CTL) is highly efficient in recovery of cellular immunity from reactivation and infection of human cytomegalovirus (HCMV) after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (AHSCT). Till now, CTLs have been mainly induced using antigen presenting cells (dendritic cells) or Epstein-barr virus-transformed B cells. However, these expansion tools have several limitations (complicated culture process, high cost, and long culture period). In order to overcome these problems, we used the overlapping peptide, which is overlapped by entire protein sequence, for the expansion of virus-specific CTLs and the induction of further specific immune responses. To induce HCMV-specific CTLs, peripheral blood mononuclear cells from HLA-A*02:01-positive donors were isolated and thereafter cultured with HCMV pp65 overlapping peptide. In conclusion, the HCMV overlapping peptide priming induced marked expansion of CTLs and further specific CTL immune responses compared to the HCMV immunodominant peptide priming. These results strongly suggest that HCMV overlapping peptide-primed CTLs may be applicable to the clinical trial regardless of HLA types of patients in the future.
Adoptive cellular immunotherapy of human cytomegalovirus specific cytotoxic T lymphocyte (CTL) is highly efficient in recovery of cellular immunity from reactivation and infection of human cytomegalovirus (HCMV) after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (AHSCT). Till now, CTLs have been mainly induced using antigen presenting cells (dendritic cells) or Epstein-barr virus-transformed B cells. However, these expansion tools have several limitations (complicated culture process, high cost, and long culture period). In order to overcome these problems, we used the overlapping peptide, which is overlapped by entire protein sequence, for the expansion of virus-specific CTLs and the induction of further specific immune responses. To induce HCMV-specific CTLs, peripheral blood mononuclear cells from HLA-A*02:01-positive donors were isolated and thereafter cultured with HCMV pp65 overlapping peptide. In conclusion, the HCMV overlapping peptide priming induced marked expansion of CTLs and further specific CTL immune responses compared to the HCMV immunodominant peptide priming. These results strongly suggest that HCMV overlapping peptide-primed CTLs may be applicable to the clinical trial regardless of HLA types of patients in the future.
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