최근 건강과 삶의 질에 대한 중요성이 주목받음에 따라 현대인들이 대부분의 생활시간을 보내는 실내 공기질에 대한 관심이 증가하고 있다. 따라서 실내 공기질과 관련된 여러 오염원의 규제가 마련되고 있다. 관련 연구들이 진행되면서 미세먼지, 휘발성 유기화합물 등과 같은 화학물질들과 바이러스, 세균과 같은 미생물 기준까지 그 규제대상은 다양해지고 있다. 곰팡이 또한 그중 하나다. 곰팡이의 유해성에 대한 연구결과들이 보고됨에 따라 관리규제 중요성이 두드러지고 있다. 그리고 2017 년부터, 국내 다중이용 민감 시설에 대한 실내공기 곰팡이의 총 농도 권고기준이 마련되었다. 하지만, 유해성이 밝혀진 병원성 곰팡이에 대한 세부항목별 권고기준은 아직 마련되지 못한 실정이다. 병원성 곰팡이는 ...
최근 건강과 삶의 질에 대한 중요성이 주목받음에 따라 현대인들이 대부분의 생활시간을 보내는 실내 공기질에 대한 관심이 증가하고 있다. 따라서 실내 공기질과 관련된 여러 오염원의 규제가 마련되고 있다. 관련 연구들이 진행되면서 미세먼지, 휘발성 유기화합물 등과 같은 화학물질들과 바이러스, 세균과 같은 미생물 기준까지 그 규제대상은 다양해지고 있다. 곰팡이 또한 그중 하나다. 곰팡이의 유해성에 대한 연구결과들이 보고됨에 따라 관리규제 중요성이 두드러지고 있다. 그리고 2017 년부터, 국내 다중이용 민감 시설에 대한 실내공기 곰팡이의 총 농도 권고기준이 마련되었다. 하지만, 유해성이 밝혀진 병원성 곰팡이에 대한 세부항목별 권고기준은 아직 마련되지 못한 실정이다. 병원성 곰팡이는 포자 자체로 호흡기와 피부에 직접적인 질병을 초래할 수 있으며, 대사산물인 다양한 독소는 인체의 기능에 부정적인 영향을 주는 물질로 알려져 있다. 병원성 곰팡이의 규제와 관리를 위해서는 동정을 통한 유해종의 확인과 농도의 정량분석이 필요하다. 하지만, 곰팡이에 대한 공정시험법은 마련되지 않은 실정이며, 분석은 세균의 공정시험법을 참고하여 진행되고 있다. 이에, 본 연구에서는 병원성 곰팡이의 분석법과 정량분석법을 개발하고자 하였다. 첫 번째로, 특정 염기서열의 길이 차이를 이용한 동정 분석을 수행하였다. 특정 염기서열은 곰팡이의 동정 분석에 사용되는 염기서열 중 ITS (Internal Transcribed Spacer) 를 conventional PCR (Polymerase Chain Reaction) 로 증폭하여 활용하였다. 일반적인 평판형 전기영동법 보다 우수한 분리능과 재현성을 가지는 마이크로 칩 기반의 모세관 젤 전기영동법을 사용하여 증폭된 ITS 부분의 길이를 분석하였다. 이를 통해 속(genus) 수준의 동정이 가능하게 하는 PCR 증폭산물의 길이 차이를 확인할 수 있었다. 두 번째, 정성∙정량분석은 BLI (BioLayer Interferometry)로 곰팡이 특이항체와 포자의 항원-항체반응을 측정하여 수행하였으며, Aspergillus niger를 분석대상 곰팡이로 사용하였다. 정성분석 측면에서 종 특이성의 확인을 위해, 연구에 사용된 단클론 항체와 대상 항원이 아닌 다섯 종의 병원성 곰팡이와 교차반응성을 측정하였다. 이 방법으로 8.4 x 103 spores/mL의 검출한계를 얻을 수 있었다. 추가로 alkaline phosphatase를 결합한 항체를 도입하여 신호 증폭을 함으로써, 3.3 x 103 spores/mL 수준의 검출한계를 얻을 수 있었다. 본 연구결과로부터, 염기배열 정보 분석 없이 ITS 길이 정보를 통해, 병원성 곰팡이의 속(genus) 수준의 동정 가능성을 확인하였으며, 항체와 BLI를 통해 배양과정 없는 고감도의 곰팡이 포자 정량법을 확립하였다. 이 연구 결과가 앞으로 공기 중 곰팡이 공정시험법 개발과 곰팡이 실시간 고감도 정량기술 발전에 기여할 수 있으리라 기대한다.
최근 건강과 삶의 질에 대한 중요성이 주목받음에 따라 현대인들이 대부분의 생활시간을 보내는 실내 공기질에 대한 관심이 증가하고 있다. 따라서 실내 공기질과 관련된 여러 오염원의 규제가 마련되고 있다. 관련 연구들이 진행되면서 미세먼지, 휘발성 유기화합물 등과 같은 화학물질들과 바이러스, 세균과 같은 미생물 기준까지 그 규제대상은 다양해지고 있다. 곰팡이 또한 그중 하나다. 곰팡이의 유해성에 대한 연구결과들이 보고됨에 따라 관리규제 중요성이 두드러지고 있다. 그리고 2017 년부터, 국내 다중이용 민감 시설에 대한 실내공기 곰팡이의 총 농도 권고기준이 마련되었다. 하지만, 유해성이 밝혀진 병원성 곰팡이에 대한 세부항목별 권고기준은 아직 마련되지 못한 실정이다. 병원성 곰팡이는 포자 자체로 호흡기와 피부에 직접적인 질병을 초래할 수 있으며, 대사산물인 다양한 독소는 인체의 기능에 부정적인 영향을 주는 물질로 알려져 있다. 병원성 곰팡이의 규제와 관리를 위해서는 동정을 통한 유해종의 확인과 농도의 정량분석이 필요하다. 하지만, 곰팡이에 대한 공정시험법은 마련되지 않은 실정이며, 분석은 세균의 공정시험법을 참고하여 진행되고 있다. 이에, 본 연구에서는 병원성 곰팡이의 분석법과 정량분석법을 개발하고자 하였다. 첫 번째로, 특정 염기서열의 길이 차이를 이용한 동정 분석을 수행하였다. 특정 염기서열은 곰팡이의 동정 분석에 사용되는 염기서열 중 ITS (Internal Transcribed Spacer) 를 conventional PCR (Polymerase Chain Reaction) 로 증폭하여 활용하였다. 일반적인 평판형 전기영동법 보다 우수한 분리능과 재현성을 가지는 마이크로 칩 기반의 모세관 젤 전기영동법을 사용하여 증폭된 ITS 부분의 길이를 분석하였다. 이를 통해 속(genus) 수준의 동정이 가능하게 하는 PCR 증폭산물의 길이 차이를 확인할 수 있었다. 두 번째, 정성∙정량분석은 BLI (BioLayer Interferometry)로 곰팡이 특이항체와 포자의 항원-항체반응을 측정하여 수행하였으며, Aspergillus niger를 분석대상 곰팡이로 사용하였다. 정성분석 측면에서 종 특이성의 확인을 위해, 연구에 사용된 단클론 항체와 대상 항원이 아닌 다섯 종의 병원성 곰팡이와 교차반응성을 측정하였다. 이 방법으로 8.4 x 103 spores/mL의 검출한계를 얻을 수 있었다. 추가로 alkaline phosphatase를 결합한 항체를 도입하여 신호 증폭을 함으로써, 3.3 x 103 spores/mL 수준의 검출한계를 얻을 수 있었다. 본 연구결과로부터, 염기배열 정보 분석 없이 ITS 길이 정보를 통해, 병원성 곰팡이의 속(genus) 수준의 동정 가능성을 확인하였으며, 항체와 BLI를 통해 배양과정 없는 고감도의 곰팡이 포자 정량법을 확립하였다. 이 연구 결과가 앞으로 공기 중 곰팡이 공정시험법 개발과 곰팡이 실시간 고감도 정량기술 발전에 기여할 수 있으리라 기대한다.
Recently, with the emphasis on the importance of health and quality of life, as people spend most of their life indoors, there is an increased interest in indoor air quality. Therefore, there are regulations for various pollutants related to indoor air quality. As research on this progresses, the re...
Recently, with the emphasis on the importance of health and quality of life, as people spend most of their life indoors, there is an increased interest in indoor air quality. Therefore, there are regulations for various pollutants related to indoor air quality. As research on this progresses, the regulations are being diversified from chemical substances such as fine dust and volatile organic compounds to microorganisms such as viruses, bacteria, and molds. As studies have reported on the dangers of mold, the importance of mold management has been emphasized. Since 2017, the recommanded concentration level for total indoor air fungi for domestic multi-use sensitive facilities has been established. However, the recommendation criteria for harmful pathogens has not yet been established. Pathogenic fungal spores can cause respiratory and skin-related diseases, and various toxins and metabolites are known to negatively influence human function. For the regulation and management of pathogenic fungi, identification of harmful species through identification and quantitative analysis of concentration is necessary. However, no standard operation procedure (SOP) for molds has been created yet, and hence, so it is proceeding with reference of bacteria SOP. Therefore, in this study, we tried to develop the analysis and quantification technique for harmful fungal species. First, identification analysis was performed using differences in the length of specific nucleotide sequences. The internal transcribed spacer (ITS) region was amplified by conventional polymerase chain reaction (PCR) and used for identification of the specific nucleotide sequence. We analyzed the length of the amplified ITS using a microchip-based capillary gel electrophoresis method, which has better resolution and reproducibility than the conventional flat electrophoresis method. This confirmed the differences at the genus level and helped in identification. Secondly, identification / quantitative analysis was performed by measuring the antigen-antibody reaction between spores and fungus-specific antibodies using biolayer interferometry (BLI). The cross-reactivity of the antibodies and the selected six harmful species were confirmed. A detection limit of 8.4 x 103 spores/mL was obtained via this method. In addition, signal amplification was performed by introducing an antibody conjugated with alkaline phosphatase, and a detection limit of 3.3 x 103 spores/mL was obtained.
Recently, with the emphasis on the importance of health and quality of life, as people spend most of their life indoors, there is an increased interest in indoor air quality. Therefore, there are regulations for various pollutants related to indoor air quality. As research on this progresses, the regulations are being diversified from chemical substances such as fine dust and volatile organic compounds to microorganisms such as viruses, bacteria, and molds. As studies have reported on the dangers of mold, the importance of mold management has been emphasized. Since 2017, the recommanded concentration level for total indoor air fungi for domestic multi-use sensitive facilities has been established. However, the recommendation criteria for harmful pathogens has not yet been established. Pathogenic fungal spores can cause respiratory and skin-related diseases, and various toxins and metabolites are known to negatively influence human function. For the regulation and management of pathogenic fungi, identification of harmful species through identification and quantitative analysis of concentration is necessary. However, no standard operation procedure (SOP) for molds has been created yet, and hence, so it is proceeding with reference of bacteria SOP. Therefore, in this study, we tried to develop the analysis and quantification technique for harmful fungal species. First, identification analysis was performed using differences in the length of specific nucleotide sequences. The internal transcribed spacer (ITS) region was amplified by conventional polymerase chain reaction (PCR) and used for identification of the specific nucleotide sequence. We analyzed the length of the amplified ITS using a microchip-based capillary gel electrophoresis method, which has better resolution and reproducibility than the conventional flat electrophoresis method. This confirmed the differences at the genus level and helped in identification. Secondly, identification / quantitative analysis was performed by measuring the antigen-antibody reaction between spores and fungus-specific antibodies using biolayer interferometry (BLI). The cross-reactivity of the antibodies and the selected six harmful species were confirmed. A detection limit of 8.4 x 103 spores/mL was obtained via this method. In addition, signal amplification was performed by introducing an antibody conjugated with alkaline phosphatase, and a detection limit of 3.3 x 103 spores/mL was obtained.
AI-Helper
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.