감수분열 과정에서 계획되어 있는 순서로 이중 가닥 나선 절단이 발생하게 되며, 이를 수선하기 위해 유전자 재조합 과정을 거치게 된다. 유전자 재조합을 통해 딸세포를 만드는 과정에서 유전적 다양성을 가지게 된다. 본 연구에서는 유전자 재조합 과정 중에서 DNA 수선과 세포 주기의 검문 기작에 관여를 하는 Tel1 단백질과 Mec1 단백질에 대해 연구를 DNA 분석을 통해 유전자 재조합 과정 중 어떤 단계에 영향을 미치는지 연구를 진행하였다. 실험은 재조합 과정에서 발생하는 ...
감수분열 과정에서 계획되어 있는 순서로 이중 가닥 나선 절단이 발생하게 되며, 이를 수선하기 위해 유전자 재조합 과정을 거치게 된다. 유전자 재조합을 통해 딸세포를 만드는 과정에서 유전적 다양성을 가지게 된다. 본 연구에서는 유전자 재조합 과정 중에서 DNA 수선과 세포 주기의 검문 기작에 관여를 하는 Tel1 단백질과 Mec1 단백질에 대해 연구를 DNA 분석을 통해 유전자 재조합 과정 중 어떤 단계에 영향을 미치는지 연구를 진행하였다. 실험은 재조합 과정에서 발생하는 중간 생성물을 분석 하기 위해 효모를 감수분열을 유도하였으며, 각 시간의 세포를 얻고 DNA를 추출하였다. 각 유전자 재조합 생성물들을 크기로 분류하여 확인할 수 있는 HIS4LEU2 hot spot 지역을 제한효소를 처리를 한 뒤, DNA southern blot을 통해 분석을 하였다. Tel1을 제거 하였을 때 이중 가닥 절단이 증가하였으며, 이후에 발생하는 유전자 재조합 산물은 이중 가닥 절단에 비례하여 전반적으로 증가하였다. Mec1은 초기 이중 가닥 절단과 단일 가닥 침투 형성에 적은 비율로 감소시킨다. 하지만, 이후에 발생하는 이중 홀리데이 접합에서 IS의 비율이 증가한다. 또한 최종적으로 교차성 산물에 특이적으로 영향을 미친다는 것을 관찰하였다. 교차성 산물에 특이적으로 영향을 미치는 Rec8과 연관성이 있는지 관찰을 해본 결과, Rec8과 Mec1은 서로 다른 경로에서 교차성 산물의 형성에 영향을 미친다는 것을 알 수 있었다. 마지막으로 Tel1과 Mec1을 동시에 제거 하였을 때 유전자 재조합과정에서 어떤 영향을 미치는지 실험을 하였으며, 이중 가닥 절단 산물 이후에 산물들이 만들어 지지 않는 것을 관찰을 하였다. 이는 Tel1과 Mec1 단백질이 단일 가닥 침투로 넘어가는 경로에 관여를 한다는 것을 알 수 있었다.
감수분열 과정에서 계획되어 있는 순서로 이중 가닥 나선 절단이 발생하게 되며, 이를 수선하기 위해 유전자 재조합 과정을 거치게 된다. 유전자 재조합을 통해 딸세포를 만드는 과정에서 유전적 다양성을 가지게 된다. 본 연구에서는 유전자 재조합 과정 중에서 DNA 수선과 세포 주기의 검문 기작에 관여를 하는 Tel1 단백질과 Mec1 단백질에 대해 연구를 DNA 분석을 통해 유전자 재조합 과정 중 어떤 단계에 영향을 미치는지 연구를 진행하였다. 실험은 재조합 과정에서 발생하는 중간 생성물을 분석 하기 위해 효모를 감수분열을 유도하였으며, 각 시간의 세포를 얻고 DNA를 추출하였다. 각 유전자 재조합 생성물들을 크기로 분류하여 확인할 수 있는 HIS4LEU2 hot spot 지역을 제한효소를 처리를 한 뒤, DNA southern blot을 통해 분석을 하였다. Tel1을 제거 하였을 때 이중 가닥 절단이 증가하였으며, 이후에 발생하는 유전자 재조합 산물은 이중 가닥 절단에 비례하여 전반적으로 증가하였다. Mec1은 초기 이중 가닥 절단과 단일 가닥 침투 형성에 적은 비율로 감소시킨다. 하지만, 이후에 발생하는 이중 홀리데이 접합에서 IS의 비율이 증가한다. 또한 최종적으로 교차성 산물에 특이적으로 영향을 미친다는 것을 관찰하였다. 교차성 산물에 특이적으로 영향을 미치는 Rec8과 연관성이 있는지 관찰을 해본 결과, Rec8과 Mec1은 서로 다른 경로에서 교차성 산물의 형성에 영향을 미친다는 것을 알 수 있었다. 마지막으로 Tel1과 Mec1을 동시에 제거 하였을 때 유전자 재조합과정에서 어떤 영향을 미치는지 실험을 하였으며, 이중 가닥 절단 산물 이후에 산물들이 만들어 지지 않는 것을 관찰을 하였다. 이는 Tel1과 Mec1 단백질이 단일 가닥 침투로 넘어가는 경로에 관여를 한다는 것을 알 수 있었다.
Budding yeast Tel1ATM and Mec1ATR regulate DNA double-strand break (DSB) repair and mediate meiotic recombinational progression. Previously, it has been reported that Tel1 is activated by DSBs and Mec1 involves in DSB regulation including DSB resection and DSB-to-SEI transition. In addition, both Te...
Budding yeast Tel1ATM and Mec1ATR regulate DNA double-strand break (DSB) repair and mediate meiotic recombinational progression. Previously, it has been reported that Tel1 is activated by DSBs and Mec1 involves in DSB regulation including DSB resection and DSB-to-SEI transition. In addition, both Tel1 and Mec1 regulate interhomolog recombination in early time of meiotic prophase I that requires phosphorylation of Hop1, a chromosome axis component. Here I show that Tel1 and Mec1 function in early steps of DSB formation and DSB resectional processes. In the absent of Tel1, DSBs are increased compare to WT. However, absence of Mec1 exhibits increased numbers of intersister joint molecules (JMs) from the early phase of JM formation in which established in recombination partner choice. Also, Mec1 specifically regulates crossover-designated DSB repair pathway, but these phenomena might be separated with its function of homolog bias maintenance of JM. Therefore, I could conclude that Tel1 and Mec1 essentially involve in DSB repair via activating end resection, promoting further progresses of CO recombination and homolog bias establishment.
Budding yeast Tel1ATM and Mec1ATR regulate DNA double-strand break (DSB) repair and mediate meiotic recombinational progression. Previously, it has been reported that Tel1 is activated by DSBs and Mec1 involves in DSB regulation including DSB resection and DSB-to-SEI transition. In addition, both Tel1 and Mec1 regulate interhomolog recombination in early time of meiotic prophase I that requires phosphorylation of Hop1, a chromosome axis component. Here I show that Tel1 and Mec1 function in early steps of DSB formation and DSB resectional processes. In the absent of Tel1, DSBs are increased compare to WT. However, absence of Mec1 exhibits increased numbers of intersister joint molecules (JMs) from the early phase of JM formation in which established in recombination partner choice. Also, Mec1 specifically regulates crossover-designated DSB repair pathway, but these phenomena might be separated with its function of homolog bias maintenance of JM. Therefore, I could conclude that Tel1 and Mec1 essentially involve in DSB repair via activating end resection, promoting further progresses of CO recombination and homolog bias establishment.
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