헨니파 슈도바이러스를 이용한 안전하고 간편한 중화 항체 시험법 개발 및 니파 바이러스 G 단백질 특이 단클론 항체 제작 Development of safe and simple neutralization test using pseudotyped Henipavirus and production of Nipah virus G protein-specific monoclonal antibody원문보기
헨드라 바이러스와 니파 바이러스는 최근에 출현한 인수공통감염 파라믹소 바이러스로, 새로운 헨니파 바이러스 속으로 분류된다. 이 바이러스들은 말레이시아, 방글라데시, 인도를 포함한 일부 아시아 국가에서 감염이 확인되었다. 두 바이러스 모두 광범위한 종류의 숙주를 감염시킬 수 있으며, 심각한 호흡 곤란 증후군을 일으키고 감염 시 사망률이 높다. 또한 높은 병원성을 가지고 있기 때문에 이들 바이러스를 이용한 중화 분석에는 생물안전도-4의 시설을 필요로 한다. 현재 니파 바이러스에 대한 혈청 중화 항체를 검출하는 진단 테스트는 생 바이러스를 사용하기 때문에, 보다 안전하고 견고한 대체 방법의 확립이 필요하다. 이 문제를 해결하기 위해 우리는 융합 (F) 및 부착 (G) ...
헨드라 바이러스와 니파 바이러스는 최근에 출현한 인수공통감염 파라믹소 바이러스로, 새로운 헨니파 바이러스 속으로 분류된다. 이 바이러스들은 말레이시아, 방글라데시, 인도를 포함한 일부 아시아 국가에서 감염이 확인되었다. 두 바이러스 모두 광범위한 종류의 숙주를 감염시킬 수 있으며, 심각한 호흡 곤란 증후군을 일으키고 감염 시 사망률이 높다. 또한 높은 병원성을 가지고 있기 때문에 이들 바이러스를 이용한 중화 분석에는 생물안전도-4의 시설을 필요로 한다. 현재 니파 바이러스에 대한 혈청 중화 항체를 검출하는 진단 테스트는 생 바이러스를 사용하기 때문에, 보다 안전하고 견고한 대체 방법의 확립이 필요하다. 이 문제를 해결하기 위해 우리는 융합 (F) 및 부착 (G) 당단백질을 사용하여 헨드라 및 니파 슈도바이러스를 구축하여 이를, X-gal 분석을 이용하는 Moloney murine leukemia virus pseudotyped 시스템에 적용하였다. 슈도바이러스는 생물안전도-2에서 테스트할 수 있는 생물학적 위험성이 낮을 뿐만 아니라 신속하게 수행할 수 있다는 장점을 가지고 있다. 또한 이 실험에서는 헨드라 및 니파 바이러스 G에 대한 다클론 항체를 생성하고 이들을 슈도 바이러스 기반 중화 항체 시험법에 활용하였고 혈청 진단 검사에 적용하였다. 중화 항체의 특이성을 더욱 높이고 혈청학적 검사의 민감도를 높이기 위해 니파 바이러스 G에 대한 단클론 항체도 추가적으로 제작하였다. 6개의 단클론 항체 클론 중 4개가 니파 바이러스 G와 높은 반응성을 나타냈고, 특히 7G9 클론이 가장 높은 민감도를 보였다. 선별된 단클론 항체들은 헨드라 바이러스 G에 대한 어떠한 교차 반응성도 나타내지 않았으며, 니파 슈도 바이러스에 효율적인 중화 활성을 나타냈다. 우리의 연구 결과는 헨드라 및 니파 바이러스에 대한 중화항체 시험의 안전성과 특이성을 보장하고 관련 백신이나 진단 연구를 설계하는데 있어서 유용할 것이다.
헨드라 바이러스와 니파 바이러스는 최근에 출현한 인수공통감염 파라믹소 바이러스로, 새로운 헨니파 바이러스 속으로 분류된다. 이 바이러스들은 말레이시아, 방글라데시, 인도를 포함한 일부 아시아 국가에서 감염이 확인되었다. 두 바이러스 모두 광범위한 종류의 숙주를 감염시킬 수 있으며, 심각한 호흡 곤란 증후군을 일으키고 감염 시 사망률이 높다. 또한 높은 병원성을 가지고 있기 때문에 이들 바이러스를 이용한 중화 분석에는 생물안전도-4의 시설을 필요로 한다. 현재 니파 바이러스에 대한 혈청 중화 항체를 검출하는 진단 테스트는 생 바이러스를 사용하기 때문에, 보다 안전하고 견고한 대체 방법의 확립이 필요하다. 이 문제를 해결하기 위해 우리는 융합 (F) 및 부착 (G) 당단백질을 사용하여 헨드라 및 니파 슈도바이러스를 구축하여 이를, X-gal 분석을 이용하는 Moloney murine leukemia virus pseudotyped 시스템에 적용하였다. 슈도바이러스는 생물안전도-2에서 테스트할 수 있는 생물학적 위험성이 낮을 뿐만 아니라 신속하게 수행할 수 있다는 장점을 가지고 있다. 또한 이 실험에서는 헨드라 및 니파 바이러스 G에 대한 다클론 항체를 생성하고 이들을 슈도 바이러스 기반 중화 항체 시험법에 활용하였고 혈청 진단 검사에 적용하였다. 중화 항체의 특이성을 더욱 높이고 혈청학적 검사의 민감도를 높이기 위해 니파 바이러스 G에 대한 단클론 항체도 추가적으로 제작하였다. 6개의 단클론 항체 클론 중 4개가 니파 바이러스 G와 높은 반응성을 나타냈고, 특히 7G9 클론이 가장 높은 민감도를 보였다. 선별된 단클론 항체들은 헨드라 바이러스 G에 대한 어떠한 교차 반응성도 나타내지 않았으며, 니파 슈도 바이러스에 효율적인 중화 활성을 나타냈다. 우리의 연구 결과는 헨드라 및 니파 바이러스에 대한 중화항체 시험의 안전성과 특이성을 보장하고 관련 백신이나 진단 연구를 설계하는데 있어서 유용할 것이다.
Hendra virus (HeV) and Nipah virus (NiV) are recently emerged zoonotic paramyxoviruses and classified within the new Henipavirus genus. They discovered during outbreaks in some Asian countries including Malaysia, Bangladesh, and India. Both viruses can infect a broad range of hosts causing severe re...
Hendra virus (HeV) and Nipah virus (NiV) are recently emerged zoonotic paramyxoviruses and classified within the new Henipavirus genus. They discovered during outbreaks in some Asian countries including Malaysia, Bangladesh, and India. Both viruses can infect a broad range of hosts causing severe respiratory distress syndrome with high mortality. Because of their highly pathogenic nature, a neutralizing assay with these viruses requires a biosafety level-4 (BSL-4) containment. Since current diagnostic tests detecting serum neutralizing antibodies against HeV and NiV mainly employ live viruses, the establishment of a more safe and robust alternative method is essential. To solve this problem, we constructed HeV and NiV pseudotyped viruses using fusion (F) and attachment (G) glycoproteins. Then applied them to a Moloney murine leukemia virus (MuLV) pseudotyped system, which is using 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopyranoside (X-gal) assay. The pseudotyped virus has advantages not only non-biohazard to test at BSL-2 but also rapid test. In addition, we generated polyclonal antibodies against HeV and NiV G and assessed their neutralizing activities to utilize them for pseudovirus-based neutralization assay and further apply to the serum diagnostic test. To further enhance the specificity of neutralizing antibody and to increase the sensitivity of serological diagnostic test, we produced monoclonal antibodies (mAbs) against NiV G. Four out of six mAb clones showed prominent reactivities to NiV G. Specifically, 7G9 clone revealed the highest sensitivity. These selected mAb clones did not show any cross-reactivity against HeV G and revealed efficient neutralizing activities against pseudotyped NiV. Our findings will ensure the safety and specificity of neutralization assays against HeV and NiV and will provide a useful tool to design relevant vaccines or diagnostic studies.
Hendra virus (HeV) and Nipah virus (NiV) are recently emerged zoonotic paramyxoviruses and classified within the new Henipavirus genus. They discovered during outbreaks in some Asian countries including Malaysia, Bangladesh, and India. Both viruses can infect a broad range of hosts causing severe respiratory distress syndrome with high mortality. Because of their highly pathogenic nature, a neutralizing assay with these viruses requires a biosafety level-4 (BSL-4) containment. Since current diagnostic tests detecting serum neutralizing antibodies against HeV and NiV mainly employ live viruses, the establishment of a more safe and robust alternative method is essential. To solve this problem, we constructed HeV and NiV pseudotyped viruses using fusion (F) and attachment (G) glycoproteins. Then applied them to a Moloney murine leukemia virus (MuLV) pseudotyped system, which is using 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopyranoside (X-gal) assay. The pseudotyped virus has advantages not only non-biohazard to test at BSL-2 but also rapid test. In addition, we generated polyclonal antibodies against HeV and NiV G and assessed their neutralizing activities to utilize them for pseudovirus-based neutralization assay and further apply to the serum diagnostic test. To further enhance the specificity of neutralizing antibody and to increase the sensitivity of serological diagnostic test, we produced monoclonal antibodies (mAbs) against NiV G. Four out of six mAb clones showed prominent reactivities to NiV G. Specifically, 7G9 clone revealed the highest sensitivity. These selected mAb clones did not show any cross-reactivity against HeV G and revealed efficient neutralizing activities against pseudotyped NiV. Our findings will ensure the safety and specificity of neutralization assays against HeV and NiV and will provide a useful tool to design relevant vaccines or diagnostic studies.
주제어
#Henipavirus Hendravirus Nipahvirus G glycoprotein pseudovirus neutralizing assay
학위논문 정보
저자
배성은
학위수여기관
건국대학교 대학원
학위구분
국내석사
학과
바이오산업공학과
지도교수
김영봉
발행연도
2019
총페이지
57
키워드
Henipavirus Hendravirus Nipahvirus G glycoprotein pseudovirus neutralizing assay
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