본 연구는 돼지 태반 탈세포화 조건을 확립하기 위하여 여러 가지 탈세포화 기술의 시도를 통하여 탈세포화 기술을 보다 단순하고 DNA 함량을 최소화하며 collagen과 glyco samino glycans(GAGs)와 같은 단백질과 당류를 높일 수 있는 탈세포화 방법을 찾아 최적의 탈세포 장기 지지체를 얻을 수 있는 조건을 찾고자 실시하였다. 그 결과를 요약하면 다음과 같다.
1. 탈세포화 시간변화에 따른 돼지 태반의 외형 변화, DNA 총량변화 및 DNA 염색.
1) DNA 함량은 sodium dodecyl sulfate(...
본 연구는 돼지 태반 탈세포화 조건을 확립하기 위하여 여러 가지 탈세포화 기술의 시도를 통하여 탈세포화 기술을 보다 단순하고 DNA 함량을 최소화하며 collagen과 glyco samino glycans(GAGs)와 같은 단백질과 당류를 높일 수 있는 탈세포화 방법을 찾아 최적의 탈세포 장기 지지체를 얻을 수 있는 조건을 찾고자 실시하였다. 그 결과를 요약하면 다음과 같다.
1. 탈세포화 시간변화에 따른 돼지 태반의 외형 변화, DNA 총량변화 및 DNA 염색.
1) DNA 함량은 sodium dodecyl sulfate(SDS)를 이용하여 12시간(10.24 ng/μg)또는 24시간(9.36 ng/μg) 동안 탈세포화한 태반이 Triton X-100(30.65와 30.10 ng/μg)과 SDS+Triton X-100(14.18과 16.02 ng/μg) 보다 유의적으로 낮은 DNA 함량을 나타내었다(p˂0.05). 2) 다른 시간(0, 48 및 72시간)에서는 SDS와 SDS+Trtion X-100 사이의 유의적인 차이는 없었으나, Triton X-100이 다른 세정제보다 유의적으로 높은 DNA 함량을 나타내었다(p˂0.05).
2. 탈세포화 세정제에 따른 돼지 태반의 GAGs 함량 및 collagen의 함량. 1) GAGs의 함량은 12, 24, 48 및 72시간 동안 Trtion X-100(0.50, 0.51, 0.52 및 0.53 μg/mg)으로 탈세포화한 태반이 SDS(0.29, 0.25, 0.24 및 0.20 μg/mg)와 SDS+Triton X-100(0.35, 0.31, 0.35 및 0.32 μg/mg) 보다 유의적으로 높은 함량을 나타내었으며(p˂0.05), SDS 처리군에서 유의적으로 가장 낮은 함량을 나타내었다(p˂0.05). 2) Collagen의 함량은 SDS, Triton X-100 및 SDS+Triton X-100 처리군에서 서로 다른군 사이의 큰 차이는 나타나지 않지만 0시간에서는 SDS(1.03 μg/mg)군의 collagen 함량이 다른군 보다 유의하게 높은 함량을 나타내었다(p˂0.05). 하지만 이후 12, 24, 48 및 72시간에서는 SDS+Triton X-100(1.18, 1.18, 1.29, 1.04 μg/mg)에서 유의적으로 차이가 없거나 더 높은 collagen 함량을 나타내었다(p˂0.05).
3. 1.0% Triton X-100에 SDS를 각각의 농도별로 혼합하여 탈세포화한 돼지 태반의 DNA 함량 및 GAGs 함량.
1) 서로 다른 농도(0.2, 0.5, 0.7 및 1.0%)의 SDS를 1.0% Triton X-100에 혼합하여 탈세포화한 태반의 DNA 함량은 SDS 농도가 0.2%일 때 12, 48 및 72시간에서 각각 9.86, 12.70, 14.57 ng/μg으로 유의적으로 높은 함량을 나타내었으며(p˂0.05), 다른 농도에서는 유의적인 차이를 볼 수 없었지만, 24시간에서 SDS 농도별로 유의한 차이를 볼 수 있었다(p˂0.05). 0.5%의 SDS에서는 DNA 함량이 대부분 낮게 나타났다.
2) GAGs의 함량은 SDS 0.2%에서 유의적으로 높은 함량(42.90, 33.93, 37.23 μg/mg)이 나타내었고(p˂0.05), 그 다음으로 SDS 0.5%(16.13, 20.87, 14.10 μg/mg)에서 높은 GAGs의 함량을 나타내었다(p˂0.05). SDS 0.7%에서 24시간 처리하였을 때, 탈세포화를 거친 태반의 GAGs의 함량은 0.2%의 함량과 유의한 차이가 없었다.
본 연구는 돼지 태반 탈세포화 조건을 확립하기 위하여 여러 가지 탈세포화 기술의 시도를 통하여 탈세포화 기술을 보다 단순하고 DNA 함량을 최소화하며 collagen과 glyco samino glycans(GAGs)와 같은 단백질과 당류를 높일 수 있는 탈세포화 방법을 찾아 최적의 탈세포 장기 지지체를 얻을 수 있는 조건을 찾고자 실시하였다. 그 결과를 요약하면 다음과 같다.
1. 탈세포화 시간변화에 따른 돼지 태반의 외형 변화, DNA 총량변화 및 DNA 염색.
1) DNA 함량은 sodium dodecyl sulfate(SDS)를 이용하여 12시간(10.24 ng/μg)또는 24시간(9.36 ng/μg) 동안 탈세포화한 태반이 Triton X-100(30.65와 30.10 ng/μg)과 SDS+Triton X-100(14.18과 16.02 ng/μg) 보다 유의적으로 낮은 DNA 함량을 나타내었다(p˂0.05). 2) 다른 시간(0, 48 및 72시간)에서는 SDS와 SDS+Trtion X-100 사이의 유의적인 차이는 없었으나, Triton X-100이 다른 세정제보다 유의적으로 높은 DNA 함량을 나타내었다(p˂0.05).
2. 탈세포화 세정제에 따른 돼지 태반의 GAGs 함량 및 collagen의 함량. 1) GAGs의 함량은 12, 24, 48 및 72시간 동안 Trtion X-100(0.50, 0.51, 0.52 및 0.53 μg/mg)으로 탈세포화한 태반이 SDS(0.29, 0.25, 0.24 및 0.20 μg/mg)와 SDS+Triton X-100(0.35, 0.31, 0.35 및 0.32 μg/mg) 보다 유의적으로 높은 함량을 나타내었으며(p˂0.05), SDS 처리군에서 유의적으로 가장 낮은 함량을 나타내었다(p˂0.05). 2) Collagen의 함량은 SDS, Triton X-100 및 SDS+Triton X-100 처리군에서 서로 다른군 사이의 큰 차이는 나타나지 않지만 0시간에서는 SDS(1.03 μg/mg)군의 collagen 함량이 다른군 보다 유의하게 높은 함량을 나타내었다(p˂0.05). 하지만 이후 12, 24, 48 및 72시간에서는 SDS+Triton X-100(1.18, 1.18, 1.29, 1.04 μg/mg)에서 유의적으로 차이가 없거나 더 높은 collagen 함량을 나타내었다(p˂0.05).
3. 1.0% Triton X-100에 SDS를 각각의 농도별로 혼합하여 탈세포화한 돼지 태반의 DNA 함량 및 GAGs 함량.
1) 서로 다른 농도(0.2, 0.5, 0.7 및 1.0%)의 SDS를 1.0% Triton X-100에 혼합하여 탈세포화한 태반의 DNA 함량은 SDS 농도가 0.2%일 때 12, 48 및 72시간에서 각각 9.86, 12.70, 14.57 ng/μg으로 유의적으로 높은 함량을 나타내었으며(p˂0.05), 다른 농도에서는 유의적인 차이를 볼 수 없었지만, 24시간에서 SDS 농도별로 유의한 차이를 볼 수 있었다(p˂0.05). 0.5%의 SDS에서는 DNA 함량이 대부분 낮게 나타났다.
2) GAGs의 함량은 SDS 0.2%에서 유의적으로 높은 함량(42.90, 33.93, 37.23 μg/mg)이 나타내었고(p˂0.05), 그 다음으로 SDS 0.5%(16.13, 20.87, 14.10 μg/mg)에서 높은 GAGs의 함량을 나타내었다(p˂0.05). SDS 0.7%에서 24시간 처리하였을 때, 탈세포화를 거친 태반의 GAGs의 함량은 0.2%의 함량과 유의한 차이가 없었다.
The purpose of this study is supposed to find the factors to get the optimal decelluralized organ supporter, finding on the method of decelluralization that can increase the content of the protein such as collagen, glyco samino glycans (GAGs), making the decelluralization techinique simpler and the ...
The purpose of this study is supposed to find the factors to get the optimal decelluralized organ supporter, finding on the method of decelluralization that can increase the content of the protein such as collagen, glyco samino glycans (GAGs), making the decelluralization techinique simpler and the content of DNA minimized by reconstructing the factors of non-established decelluralization of porcine placentas using the various decelluralization conditions. The results of this experiment are as follows.
1. Changes in appearance, DNA total amount and DNA staining of porcine placenta with time of decellularization
1) The content of DNA is measured in decelluralizaed placenta by using sodium dodecyl sulfate (SDS) after 12 hours (10.24 ng/μg) and 24 hours (9.36 ng/μg), which shows the lower content in the significant way rather than Triton X-100 (30.65 and 30.10 ng/μg) and SDS+Triton X-100 (14.18 and 16.02 ng/μg) (p˂0.05). 2) The outcome by measured according to 0, 48, and 72 hours does not have notable difference between SDS and SDS+Triton X-100, but Triton X-100 contains higher content of DNA significantly than other detergents (p˂0.05).
2. GAGs and collagen contents of porcine placenta according to decellularization by the kind of each detergent.
1) The content of GAGs shows higher contents significantly in Triton X-100 group than other groups after 12, 24, 48 and 72 hours (0.50, 0.51, 0.52 and 0.53 μg/mg) (p˂0.05), and the content of GAGs shows the lowest content in the significant way at the group of SDS (0.29, 0.25, 0.24 and 0.20 μg/mg) (p˂0.05). 2) The content of collagen does not have any significant difference between each group, but the collagen content in SDS group (1.03 μg/mg) has notably high than other groups (p˂0.05). However, the content of collagen after 12, 24 and 72 hours does show difference or high collagen content depending on SDS+Triton X-100 (1.18, 1.18, 1.29, 1.04 μg/mg, respectively) (p˂0.05).
3. DNA content and GAGs content of porcine placenta decellularized by mixing SDS with each concentration in 1.0% Triton X-100
1) The content of DNA of decelluralized placenta with 1.0% Triton X-100 mixed each concentration of SDS (0.2, 0.5, 0.7 and 1.0%, respectively) is high in the significantly at 0.2% concentration of SDS (p˂0.05), and it does not show any difference at other concentrations, only representing each significant difference at each concentration of SDS after 24 hours (p˂0.05). At 0.5 concentration of SDS, the content of DNA is found to be low in general.
2) The content of GAGs indicates the meaningfully high content (42.90, 33.93 and 37.23 μg/mg, respectively) at 0.2% concentration of SDS, followed by the concentration of 0.5% (16.13, 20.87 and 14.10 μg/mg, respectively) with high content of GAGs (p˂0.05). The content of GAGs of decelluralized placenta for 24 hours at the SDS concentration of 0.7% shows similar outcome with the GAGs concentration of 0.2%.
These results suggest that SDS and Triton X-100 may be used in combination to make an optimal decellularized organ support. In addition, as a result of experiments by SDS concentration, decellularization was performed for 24 hours at 0.5% SDS concentration, and the DNA content was low and the GAGs and collagen content were high. Therefore, it is thought that optimal decellularized organ support can be obtained by decellularization of 1.0% Triton X-100 in 0.5% SDS for 24 hours.
The purpose of this study is supposed to find the factors to get the optimal decelluralized organ supporter, finding on the method of decelluralization that can increase the content of the protein such as collagen, glyco samino glycans (GAGs), making the decelluralization techinique simpler and the content of DNA minimized by reconstructing the factors of non-established decelluralization of porcine placentas using the various decelluralization conditions. The results of this experiment are as follows.
1. Changes in appearance, DNA total amount and DNA staining of porcine placenta with time of decellularization
1) The content of DNA is measured in decelluralizaed placenta by using sodium dodecyl sulfate (SDS) after 12 hours (10.24 ng/μg) and 24 hours (9.36 ng/μg), which shows the lower content in the significant way rather than Triton X-100 (30.65 and 30.10 ng/μg) and SDS+Triton X-100 (14.18 and 16.02 ng/μg) (p˂0.05). 2) The outcome by measured according to 0, 48, and 72 hours does not have notable difference between SDS and SDS+Triton X-100, but Triton X-100 contains higher content of DNA significantly than other detergents (p˂0.05).
2. GAGs and collagen contents of porcine placenta according to decellularization by the kind of each detergent.
1) The content of GAGs shows higher contents significantly in Triton X-100 group than other groups after 12, 24, 48 and 72 hours (0.50, 0.51, 0.52 and 0.53 μg/mg) (p˂0.05), and the content of GAGs shows the lowest content in the significant way at the group of SDS (0.29, 0.25, 0.24 and 0.20 μg/mg) (p˂0.05). 2) The content of collagen does not have any significant difference between each group, but the collagen content in SDS group (1.03 μg/mg) has notably high than other groups (p˂0.05). However, the content of collagen after 12, 24 and 72 hours does show difference or high collagen content depending on SDS+Triton X-100 (1.18, 1.18, 1.29, 1.04 μg/mg, respectively) (p˂0.05).
3. DNA content and GAGs content of porcine placenta decellularized by mixing SDS with each concentration in 1.0% Triton X-100
1) The content of DNA of decelluralized placenta with 1.0% Triton X-100 mixed each concentration of SDS (0.2, 0.5, 0.7 and 1.0%, respectively) is high in the significantly at 0.2% concentration of SDS (p˂0.05), and it does not show any difference at other concentrations, only representing each significant difference at each concentration of SDS after 24 hours (p˂0.05). At 0.5 concentration of SDS, the content of DNA is found to be low in general.
2) The content of GAGs indicates the meaningfully high content (42.90, 33.93 and 37.23 μg/mg, respectively) at 0.2% concentration of SDS, followed by the concentration of 0.5% (16.13, 20.87 and 14.10 μg/mg, respectively) with high content of GAGs (p˂0.05). The content of GAGs of decelluralized placenta for 24 hours at the SDS concentration of 0.7% shows similar outcome with the GAGs concentration of 0.2%.
These results suggest that SDS and Triton X-100 may be used in combination to make an optimal decellularized organ support. In addition, as a result of experiments by SDS concentration, decellularization was performed for 24 hours at 0.5% SDS concentration, and the DNA content was low and the GAGs and collagen content were high. Therefore, it is thought that optimal decellularized organ support can be obtained by decellularization of 1.0% Triton X-100 in 0.5% SDS for 24 hours.
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