HIV(Human Immunodeficiency Virus)의 capsid protein p24 및 envelop glycoproteins GP36, GP41, GP41(O)은 대부분의 진단 키트의 검출 표적이 된다. HIV 감염에 대한 4 세대 진단법은 p24 항원 검출을 기반으로 확립되어 있으며, 초기 단계에서 HIV감염을 진단할 수 있다. 따라서 천연 항원 활성을 가진 재조합 p24와 GP36, GP41, 그리고 GP41(O)는 진단 시약에 유용하게 이용되는 소재가 된다. 본 연구에서는 재조합p24 단백질의 발현, 정제 및 검출 능력의 ...
HIV(Human Immunodeficiency Virus)의 capsid protein p24 및 envelop glycoproteins GP36, GP41, GP41(O)은 대부분의 진단 키트의 검출 표적이 된다. HIV 감염에 대한 4 세대 진단법은 p24 항원 검출을 기반으로 확립되어 있으며, 초기 단계에서 HIV감염을 진단할 수 있다. 따라서 천연 항원 활성을 가진 재조합 p24와 GP36, GP41, 그리고 GP41(O)는 진단 시약에 유용하게 이용되는 소재가 된다. 본 연구에서는 재조합p24 단백질의 발현, 정제 및 검출 능력의 최적화를 진행하였다. p24(Wild type) 유전자의 서열에 따라 동의 코돈 사용 편향을 조정하여 가장 높은 발현률을 지니도록 설계하였고, mRNA의 이차구조 생성를 피할 수 있게 역반복 된 영역을 조절하였다. 또한 번역 효율을 높이고 mRNA의 반감기를 연장하기 위한 목적의 염기서열 조정도 시도하였다. 합성된 p24 유전자의 Western Blot 또는 ELISA와 같은 면역탐침 능력을 향상시키기 위해, p24의 C-terminal 부위에 오량체화를 위한 COMP(Cartilage oligomeric matrix protein)의 융합도 시도하였다. 최적화 된 단백질은 Escherichia coliBL21(DE3) 균주에서 발현되었으며, FPLC를 이용한His-trap FF Crude 컬럼을 사용하여 정제되었다. 정제된 p24 (~320 g/ml) 및 p24-COMP(~158 g/ml) 단백질의 기능분석과 정량은 Western Blot 및 ELISA에 의해 수행되었다. 다량체가 유도된 COMP융합 p24 는 오량체로 확인되었으며, p24 항체와 양성의 우수한 반응성을 보였다. 따라서 재조합p24-COMP 단백질은 면역 진단 분석을 위한 대체항원으로 사용될 수 있을 것으로 기대되어진다.
HIV(Human Immunodeficiency Virus)의 capsid protein p24 및 envelop glycoproteins GP36, GP41, GP41(O)은 대부분의 진단 키트의 검출 표적이 된다. HIV 감염에 대한 4 세대 진단법은 p24 항원 검출을 기반으로 확립되어 있으며, 초기 단계에서 HIV감염을 진단할 수 있다. 따라서 천연 항원 활성을 가진 재조합 p24와 GP36, GP41, 그리고 GP41(O)는 진단 시약에 유용하게 이용되는 소재가 된다. 본 연구에서는 재조합p24 단백질의 발현, 정제 및 검출 능력의 최적화를 진행하였다. p24(Wild type) 유전자의 서열에 따라 동의 코돈 사용 편향을 조정하여 가장 높은 발현률을 지니도록 설계하였고, mRNA의 이차구조 생성를 피할 수 있게 역반복 된 영역을 조절하였다. 또한 번역 효율을 높이고 mRNA의 반감기를 연장하기 위한 목적의 염기서열 조정도 시도하였다. 합성된 p24 유전자의 Western Blot 또는 ELISA와 같은 면역탐침 능력을 향상시키기 위해, p24의 C-terminal 부위에 오량체화를 위한 COMP(Cartilage oligomeric matrix protein)의 융합도 시도하였다. 최적화 된 단백질은 Escherichia coli BL21(DE3) 균주에서 발현되었으며, FPLC를 이용한His-trap FF Crude 컬럼을 사용하여 정제되었다. 정제된 p24 (~320 g/ml) 및 p24-COMP(~158 g/ml) 단백질의 기능분석과 정량은 Western Blot 및 ELISA에 의해 수행되었다. 다량체가 유도된 COMP융합 p24 는 오량체로 확인되었으며, p24 항체와 양성의 우수한 반응성을 보였다. 따라서 재조합p24-COMP 단백질은 면역 진단 분석을 위한 대체항원으로 사용될 수 있을 것으로 기대되어진다.
The capsid p24 and envelop glycoprotein GP36, GP41, GP41(O) are the detecting targets of most diagnostic kits. The 4th generation test assays for HIV (Human Immunodeficiency Virus) infection is established on the basis of the p24 antigen detection and is able to find the HIV infected at an early sta...
The capsid p24 and envelop glycoprotein GP36, GP41, GP41(O) are the detecting targets of most diagnostic kits. The 4th generation test assays for HIV (Human Immunodeficiency Virus) infection is established on the basis of the p24 antigen detection and is able to find the HIV infected at an early stage. The recombinant p24 capsid protein with natural antigenic activity would be useful for diagnostic reagents. In this study, we optimized the expression, purification and enhance the detecting capability of the recombinant p24 protein. According to the sequence of the p24 gene, we adjusted codon usage bias to fit the highest expression and unfavorable peaks, repeated area in the original sequences were removed to avoid stem-loop structures in mRNA and facilitate the synthesis process. Whole sequence was fine-tuned to increase the translation efficiency and prolong the half-life of mRNA. To enhance the capability for the immunoassays such as Western blot or ELISA of the recombinant p24 gene, we selected COMP (Cartilage Oligomeric Matrix Protein) to fusion at the N-terminus of p24 to make a novel strategy. The optimized p24 proteins were over-expressed in Escherichia coli strain BL21(DE3) cells to levels of (approximately ≥320 g/mL for p24; approximately ≥158 g/mL for p24-COMP) in the soluble fraction. Expression and purification of the recombinant p24 and p24-COMP protein have been performed by SDS-PAGE and confirmed by Western blot and ELISA. Both of the recombinant p24 and pentameric form of it with COMP had been optimized well and reactive with the antibody of p24 positive. The recombinant HIV-1 p24 capsid protein has been expressed and purified successfully, indicating this soluble recombinant p24 protein could be a promising reagent for HIV rapid test kit.
The capsid p24 and envelop glycoprotein GP36, GP41, GP41(O) are the detecting targets of most diagnostic kits. The 4th generation test assays for HIV (Human Immunodeficiency Virus) infection is established on the basis of the p24 antigen detection and is able to find the HIV infected at an early stage. The recombinant p24 capsid protein with natural antigenic activity would be useful for diagnostic reagents. In this study, we optimized the expression, purification and enhance the detecting capability of the recombinant p24 protein. According to the sequence of the p24 gene, we adjusted codon usage bias to fit the highest expression and unfavorable peaks, repeated area in the original sequences were removed to avoid stem-loop structures in mRNA and facilitate the synthesis process. Whole sequence was fine-tuned to increase the translation efficiency and prolong the half-life of mRNA. To enhance the capability for the immunoassays such as Western blot or ELISA of the recombinant p24 gene, we selected COMP (Cartilage Oligomeric Matrix Protein) to fusion at the N-terminus of p24 to make a novel strategy. The optimized p24 proteins were over-expressed in Escherichia coli strain BL21(DE3) cells to levels of (approximately ≥320 g/mL for p24; approximately ≥158 g/mL for p24-COMP) in the soluble fraction. Expression and purification of the recombinant p24 and p24-COMP protein have been performed by SDS-PAGE and confirmed by Western blot and ELISA. Both of the recombinant p24 and pentameric form of it with COMP had been optimized well and reactive with the antibody of p24 positive. The recombinant HIV-1 p24 capsid protein has been expressed and purified successfully, indicating this soluble recombinant p24 protein could be a promising reagent for HIV rapid test kit.
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