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문제 정의
- 이에 본 연구는 소아에서 치과 시술시 항균제 투여가 필요한 경우 그 선택시 기준이 되기 위하여, 일차적인 항균제 감수성검사를 위한 구강내 채취부위를 달리하여, 즉 타액, 치은연상치태, 치은연하치태에서 채취된 세균에 대한 항균제 감수성검사를 실시하여 채취부위에 따른 검사의 유의성을 보고자 시행하였다.
제안 방법
- FDA와 NCCLS의 권고안대로 연쇄상구균의 항균제 감수성 검사를 위해서는 5% 면양혈액이 첨가된 Mueller-Hinton agar를 이용 하였고, 그 외의 균종은 Mueller-Hinton agar를 이용하였다. 4~5개의 잘 분리된 균 집락을 백금니로 채취하여 4~5㎖의 Trypticase soy broth (TSB) 에 첨가하여 McFarland 0.5 탁도에 맞춘 후 이 용액을 멸균 면봉을 이용하여 평판배지에 골고루 발랐다. 이후 BBL® Sensi-Disc® (Becton Dickinson Microbiology Systems, Cockeysville, MD, U.
- BAP에서 자란 균 집락을 관찰한 다음 독립된 균 집락을 계대배양하여 세균동정에 이용하였다. 세균 동정은 그람염색, 전통적인 생화학시험 또는 미량 액체배지 희석법의 원리를 이용해 상품화된 VITEK® GPI card (bioM rieux Vitek, Inc.
- FDA와 NCCLS의 권고안대로 연쇄상구균의 항균제 감수성 검사를 위해서는 5% 면양혈액이 첨가된 Mueller-Hinton agar를 이용 하였고, 그 외의 균종은 Mueller-Hinton agar를 이용하였다. 4~5개의 잘 분리된 균 집락을 백금니로 채취하여 4~5㎖의 Trypticase soy broth (TSB) 에 첨가하여 McFarland 0.
- 본 실험에서는 총 16명 소아의 구강내 각 세 부위에서 채취한 검체를 각 10가지의 항균제에 대하여 감수성검사를 실시하였다. 모든 소아환자의 구강내 세 부위 모두에서 다양한 종류의 Streptococcus viridans가 배양되었으며, Neisseriaceae는 전체적으로 85.
- 본 실험은 콜로니 직접 도말법으로 35℃, 5% CO2 조건하에서 20~24시간동안 배양하여 각 항균제의 억제대를 판독하여 감수성, 중간, 내성으로 판독하였다. 대조 표본 미생물로는 American Type Culture Collection (ATCC)의 균주들로 Staphylcoccus aureus ATCC 25923와 E.
- 5 탁도에 맞춘 후 이 용액을 멸균 면봉을 이용하여 평판배지에 골고루 발랐다. 이후 BBL® Sensi-Disc® (Becton Dickinson Microbiology Systems, Cockeysville, MD, U.S.A.)의 항균제 종이디스크 중 Penicillin (10U), Ampicillin(10㎍), Oxacillin(1㎍), Cephalothin (30㎍), Imipenem(10㎍), Gentamicin(10㎍), Erythromycin(15㎍), Vancomycin(30㎍), Ciprofloxacin(5㎍), Clindamycin(2㎍)의 총 10가지를 선택하여 이배지에 접종하였다.
- )를 이용하였다. 즉, 균집락을 0.45% NaCl 1.8㏄ medium에 McFarland 0.5로 맞추어 GPI card에 접종하여 30℃에서 24시간 배양한 후 VITEK®사의 자동판독 장치로 판독하였으며, 필요하면 48시간까지 연장 하여 배양한 후 판독하였다. VITEK® GPI card는 제조회사의 사용 설명서에 따라 사용하였다.
- 타액은 멸균된 면봉을 이용하여 구강저의 설하선 및 악하선의 개구부 주위와 협측구에서 채취하였으며, 치은연상치태는 상하악 제1, 2유구치 주변의 협측 치은과 치아부위의 치태를 채취하였는데, 최소한 4부위의 검체가 채취될 수 있도록 면봉을 이용하여 면봉의 1/4부위당 1/4악의 채취부위에 사용될 수 있도록 하였다. 치은연하치태는 상악 제1, 2유구치의 인접면이나 하악전치부 설면에서 채취하였으며 먼저 치은과 치아를 멸균된 거즈로 닦아 건조시킨 후 멸균된 paper point를 치은열구내 삽입하여 채 취하였다.
- 타액은 멸균된 면봉을 이용하여 구강저의 설하선 및 악하선의 개구부 주위와 협측구에서 채취하였으며, 치은연상치태는 상하악 제1, 2유구치 주변의 협측 치은과 치아부위의 치태를 채취하였는데, 최소한 4부위의 검체가 채취될 수 있도록 면봉을 이용하여 면봉의 1/4부위당 1/4악의 채취부위에 사용될 수 있도록 하였다. 치은연하치태는 상악 제1, 2유구치의 인접면이나 하악전치부 설면에서 채취하였으며 먼저 치은과 치아를 멸균된 거즈로 닦아 건조시킨 후 멸균된 paper point를 치은열구내 삽입하여 채 취하였다.
대상 데이터
- 1997년 7월에서 1998년 9월 사이에 동아대학교병원 치과 및 소아과 외래를 방문한 소아를 대상으로 하였으며, 특이한 전신질환이 없고 본 연구에 참여하는데 보호자가 동의한 어린이를 대상으로 무작위 16명을 선택하였다. 성별 분포는 남아 8명, 여아 8명이고 연령분포는 최저 2세에서 최고 8세였고 평균 연령은 3.
- 조건하에서 20~24시간동안 배양하여 각 항균제의 억제대를 판독하여 감수성, 중간, 내성으로 판독하였다. 대조 표본 미생물로는 American Type Culture Collection (ATCC)의 균주들로 Staphylcoccus aureus ATCC 25923와 E. coli ATCC 25922, Pseudomonas ATCC 27853이 사용되었다.
이론/모형
- 본 실험에 사용한 디스크 확산법은 미국식품의약품국(Food and Drug Administration ; FDA)과 National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS, 1998)13)에 의해 권장하는 Kirby-Bauer 법을 변경한 방법을 이용하였다. 항균제가 들어있는 종이 디스크를 세균이 접종된 배지의 표면에 놓으면, 건조된 디스크가 물을 흡수하고 항균제가 녹아서 배지 중으로 퍼지게 되어 디스크에서 멀어질수록 항균제 농도가 낮아지는 농도 구배가 이루어지게 된다.
- 본 실험에서 적용한 판독기준은 Penicillin, Ampicillin, Vancomycin, Erythromycin, Ciprofloxacin, Clindamycin은 NCCLS(1998, M100- S8)의 기준에 따랐고, NCCLS의 판독기준이 알려져 있지 않은 Cephalothin, Gentamicin Imipenem은 BBL® Sensi-disc® manual의‘for other organisms’항목을 준용하였다. 그리고, Oxacillin은 Sudha와 Arthur8) 의 연구 결과에서 권유한 직경에 의해 판독하였는데 이들은 Penicillin에 감수성이 낮아진 S.
- 의 디스크 확산법시 기준을 제시한 NCCLS(1998, M100-S8)13)의 기준에 따랐다. 상기 권고안에 판독기준이 없는 Cephalothin, Gentamicin Imipenem의 판독은 BBL® Sensi-disc® manual의‘for other organisms’항목을 준용하였고, Oxacillin은 Sudha와 Arthur8) 의 연구 결과에서 권유한 직경에 의해 판독하였다.
- BAP에서 자란 균 집락을 관찰한 다음 독립된 균 집락을 계대배양하여 세균동정에 이용하였다. 세균 동정은 그람염색, 전통적인 생화학시험 또는 미량 액체배지 희석법의 원리를 이용해 상품화된 VITEK® GPI card (bioM rieux Vitek, Inc. U.S.A.)를 이용하였다. 즉, 균집락을 0.
- pneumoniae가 아닌 다른 Streptococcus spp.의 디스크 확산법시 기준을 제시한 NCCLS(1998, M100-S8)13)의 기준에 따랐다. 상기 권고안에 판독기준이 없는 Cephalothin, Gentamicin Imipenem의 판독은 BBL® Sensi-disc® manual의‘for other organisms’항목을 준용하였고, Oxacillin은 Sudha와 Arthur8) 의 연구 결과에서 권유한 직경에 의해 판독하였다.
성능/효과
- 7%)으로 높은 항균제 감수성을 보였다. Oxacillin은 세 군 모두에서 (각 100%, 92.3%, 92.8%) 로 가장 높은 항균제 저항성을 보였다. Vancomycin은 Streptococcus에서와 달리 상당히 낮은 항균제 감수성을 보였다.
- 4%의 발현율을 보였다. Streptococcus viridans와 Neisseriaceae의 항균제 감수성 결과 구강내 채취부위에 따른 큰 차이는 보이지 않았으며, 항균제 감수성의 양상도 유사하게 나타났다. 만일 세 부위에서의 결과가 유의한 차이를 보인다면 한 부위에서만 검체를 체취하여 항균제 감수성검사를 하는 것은 부적절할 것이다.
- 혈액한천배지상에서 관찰된 다양한 균주들을 계대배양하여 모두 동정하였다. VITEK® GPI card를 사용하여 그람양성균을 동정한 결과 세 군 모두에서 Streptococcus viridans로 알려진 S. mitis, S. oralis, S. sanguis, S. salivarius, S. intermedius, S. acidominimus가 분리동정되었으며, Neiserriaceae 역시 대부분의 경우에 동정되었다. 동정된 세균의 유의한 부위별 차이는 보이지 않았다.
- 부가적으로 미국심장학회에서는 일차적인 예방적 항균제로서 Amoxicillin이나 Ampicillin을 권장하고 Penicillin계에 allergy가 있을 경우는 Clindamycin을 대체약물로 권하고있다. 그러나, 본 연구에서는 Ampicillin의 경우 Streptococcus viridans에 대하여 타액과 치은연상치태는 각 56.25%, 치은연하치태에 대해서는 81.25%의 항균제 감수성을 보였고, Clindamycin의 경우는 타액과 치은연상치태는 각 75%, 치은연하치태는 68.75%의 항균제 감수성을 보였다. 즉, 세 부위 모두에서 AHA에서 권하는 Ampicillin이나 Clindamycin이 예방적 항균제로 부적절할 수 있음을 상기시켜준다.
- manual의‘for other organisms’항목을 준용하였다. 그리고, Oxacillin은 Sudha와 Arthur8) 의 연구 결과에서 권유한 직경에 의해 판독하였는데 이들은 Penicillin에 감수성이 낮아진 S. viridans의 감별을 위해서는 Oxacillin 1㎍ disc를 사용하는 방법이 더 효과적이라고 하였으며, Penicillin의 경우 10U disc는 직경 27mm 이상을 기준으로 하였을 때 57%의 감수성을, 35mm이상을 기준으로 하였을 경우 100%의 감수성을 보였고, Oxacillin은 직경 17mm이상을 기준으로 하였을 때 100%의 감수성이 관찰되었다고 한다. 그리고, 본 연구에서는 Penicillin을 NCCLS13)의 권고안에 따라 판독하였지만 S.
- 부위별 항균제 감수성의 유의한 차이는 보이지 않았다. 단, Ampicillin에 대한 감수성은 치은연하치태의 경우 다른 군에 비해 비교적 높게(각 56.25%, 56.25%, 81.25%) 나타났다.
- 본 실험에서는 총 16명 소아의 구강내 각 세 부위에서 채취한 검체를 각 10가지의 항균제에 대하여 감수성검사를 실시하였다. 모든 소아환자의 구강내 세 부위 모두에서 다양한 종류의 Streptococcus viridans가 배양되었으며, Neisseriaceae는 전체적으로 85.4%의 발현율을 보였다. Streptococcus viridans와 Neisseriaceae의 항균제 감수성 결과 구강내 채취부위에 따른 큰 차이는 보이지 않았으며, 항균제 감수성의 양상도 유사하게 나타났다.
- 25%로 각각 나타났다. 세 군 모두에서 Vancomycin과 Imipenem은 100%의 항균제 감수성을 보였고, Cephalothin이 다음으로 높은 감수성(각 93.75%, 93.75%, 100%)을 보였다. 부위별 항균제 감수성의 유의한 차이는 보이지 않았다.
- 세 부분 모두에서 Imipenem(100%)과 Ciprofloxacin(각 85.7%, 100%, 92.8%)이 가장 높은 항균제 감수성을 보였으며, 다음으로 Gentamicin(각 78.6%, 100%, 92.9%), Cephalothin(각 85.7%, 76.9%, 85.7%)으로 높은 항균제 감수성을 보였다. Oxacillin은 세 군 모두에서 (각 100%, 92.
- 세 부분 모두에서 Oxacillin이 가장 감수성이 낮게 나타났으며, 타액 12.5%, 치은연상치태 18.75%, 치은연하치태 6.25%로 각각 나타났다. 세 군 모두에서 Vancomycin과 Imipenem은 100%의 항균제 감수성을 보였고, Cephalothin이 다음으로 높은 감수성(각 93.
- 소아에서 정상 세균총에 대한 채취부위별 항균제 감수성 검사 차이를 알아보고자 정상 세균총에 대하여 타액, 치은연상치태, 치은연하치태에서 실시한 항균제 감수성검사 결과 유의성 있는 차이를 보이지 않았다. 이러한 결과는 소아에서는 구강내 어느 부위에서 검체를 채취하더라도 그 결과가 동일하게 적용될 수있다는 것을 의미하며 따라서 소아에서 항균제 감수성 검사시는 타액검체만으로도 충분하리라 사료된다.
후속연구
- viridans의 경우에는 디스크확산법보다는 MIC방법으로 감수성을 판단하도록 추천하고 있다. 항균제 감수성율은 어떤 기준을 적용시키느냐에 따라 차이가 존재하며, S. viridans에 의한 증가되는 감염증에 대해 보다 적합한 항균제의 선택을 위해서는 차후 S. viridans균주에 대한 항균제 감수성검사의 판독기준이 보다 연구되어 제시되어야 할 것이다.
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