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제안 방법
- 1. 지리바꽃 c脇isattettse)의 건조근을 초오, 염부자, 습열부자, 석회부자로 가공(수치)하여 알칼로이드를 methanol, chloroform 또는 ether로 추출하지 않고 아코니틴과 관련 알칼로이드는 흡광도측정법으로, 아코니틴은 HPLC 법으로 정량하는 간편하고 재현성 있는 방법을 설정하였다.
- HPLC 법 -4회 조작으로 15분 이후에서 얻은 크로마토그램의 면적의 평균값은 127262, 234367, 445759이고 SR %은 0.34, 0.18, 0.07로 1, 2-dichloro- ethane 중 아코니틴의 농도가 크로마토그람의 면적에 비례하였다. 회귀식은 Y=552059X+8626(r2=0.
- 아코니틴과 관련 알칼로이드의 处nax을 측정하기 위하여 250~700 nm의 파장변화에 의한 흡광도를 측정하니 Fig. 1과 같이 276, 283, 320, 625 nm에서 Xmax가 있어 625 nm를 흡광도측정법의 측정 파장으로 선택하였다. 초오의 극대파장은 276, 283, 320, 625 nm로 아코니틴용액과 염부자의 극대파장과 같았다.
- 아코니틴표준액 ] m/에 Tetrathiocyanatocobalt[H] 시액 3 m/ potassium hydrogen phthalate 시액 5 m2 및 1, 2-dichloroethane 10 ml를 넣고 흔들어 방치한 다음 분리된 1, 2-dichloroethane을 취하여 무수황산나트륨 0.5g을 넣고 흔든 후 2분간 원심분리하여 250-700 nm의 파장변화에 따른 흡광의 Amax을 측정하였다. 또한 정량법의 시료량을 취하여 0.
- 아코니틴표준액과 시료의 Amax을 측정한 1, 2- dichloroet仕ane을 실온에서 24, 48, 72 시간동안 방치하면서 Amax와 크로마토그램 면적의 변화를 검토하였다.
- 정량법과 같은 양의 시료를 4회 칭량하여 아코니틴 용액 2 成씩을 넣고 흡광도측정법과 HPLC 법으로 아코니틴과 관련 알칼로이드 및 아코니틴을 정량하여 공존물질의 방해로 인한 회수율을 검토하였다.
- 정량법과 같은 양의 시료를 4회 칭량하여 흡광도측정법과 HPLC 법으로 아코니틴과 관련 알칼로이드 및 아코니틴의 함량을 측정하여 정량법의 정확도와 정밀도를 확인하였다.
- 측정된 흡광도로 아코니틴과 관련 알칼로이드를 아코니틴으로 정량하고 크로마토 그램의 면적으로 아코니틴을 정량하였다.
- 크로마토그램의 양호한 분리를 위하여 300 mmX4 mm i.d.(TSK GEL LS 410 ODS SIL 5 呻)의 columjn(Ibyo Soda) 과 tetrahydrofuran(THF)-0.05M phosphate buffer(85:15), l2) (89:11)")을, 300 mmX 15 mm i.d.(LC . ODS-30K)의 column(Wakogel) 및 250 mm><4 mm i.d.(packed with Nucleosil 5 C18의 column(Nagel Co.) 과 water-acetonitrile-methanol- acetic acid-triethylamine(40:20:5:0.5:1.2), water-THF- acetonitrile-citric acid(80:15:5:l)”)을 Radial PAK- CN column(Waters Co.) 과 acetonitrile-phosphate (80:20), 14)(70:30), (55:45)i5)의 혼합용매로 분리한 결과 Radial PAK-CN column 과 acetonitrile-phosphate (70:30席 사용이 양호하였다(Fig. 2).
대상 데이터
- Buza)는 초오를 120。(:에서 40분간 습열처리7) 한 건조근을, 석회부자(Limed Buza)는 초오를 포화석회수에 6일간 침적한')건조근을 미세말로 만들어 &산화2인의 제습기에 보관하면서 실험에 사용하였다(이상의 초오와 가공부자를 시료로 칭함).
- Co.(일본) 제품을, 기타의 시약과 시액은 특급을 사용하였다. 아코니틴 표준액은 acontine 52.
- HPLC 법의 파장선택에서 320과 624 nm는 크로마토그램의 감응이 없었고 276과 283 nm는 감도가 적어 254 nm를 HPLC의 측정파장으로 선택하였다.
- Spectronic 20+(Milton Roy Co.), Spectrophoto- meter(Shimadzu UV-1601), HPLC(Shimadzu Class LC 10), Ultra Sonic Clearers(Bransonic 2210), Cen- trifuge(Hanil science industrial MF 80), pH meter (Orion Reserch EA 920)를 사용하였다.
데이터처리
- 5g을 넣고 흔든 후 2분간 원심분리 하여 10 山를 주입하였다. 같은 방법으로 4회 조작하여 얻은 크로마토그램에서 면적의 평균값으로 검량선의 회귀 식을 작성하고 SR%를 구하였다.
- 5g을 넣고 흔든 후 2분간 원심분리하여 入max 625 nm에서 흡광도를 측정하였다. 같은 방법으로 4회 조작하여 흡광도의 평균값으로 검량선의 회귀 식을 작성하고 상대표준편차(이하 SR%로 칭함)를 구하였다.
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