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$Nokyangbotang^{TM}$ (NYBT) is a kind of powerful food for health and have been drunk at a oral dose of 80 ml (99.5 mg) three times per day: It has not been well studied about the anti-fatigue and hepatoprotective activity. In this experiments, we evaluated pathophysiologically the effect...

주제어

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제안 방법

  • 특히 Noda 등24)은 forced swimming test 를 개량하여 피로시험을 실시하여 변화되는 혈중의 superoxide 등을 정량하여 항피로작용을 시험하였다. 연구자들은 forced swimming test를 개량하여 동물 체중에 일정량의 하중을 주어 수영시간을 측정하는 소위 "4% weight-loaded forced swimming test"로 항피로작용을 측정하는 방법을 개발하여 측정하였다. 한편 녹양보탕의 건강보조효과를 측정하기 위하여 mouse에서 swimming time과 흰쥐에서 사염화탄소에 의한 지질과산화, 간기능 및 조직소견을 얻어 녹양 보 탕의 생리활성을 측정하였다.
  • LI%-녹양보탕을 60 kg당 20, 40, 80 160 및 320 ml를 각각 경구투여하여 급성독성시험을 실시한 결과 모든 실험동물이 14일간 생존하였다. 따라서 인체 투여량의 4배 투여(체중 60 kg에 액제로서 320 ml, 냉동건조품으로서 7.
  • 사용한 실험재료는 1999년 2월 28일에 제조한 Lot. No.99-2-28로서 액제를 사용하거나 냉동건조(80 成가 7.48 g)하여 증류수에 희석하여 경구 투여하였다.
  • Thiobarbiturate-reactive substances (TBARS) assay2^)—과산화지질형성은 TBARS를 정량하여 lipid peroxidation을 평가하였다. 즉 위에서 적출한 간 조직을 4배량의 Tns-HCl buffer(pH 7.
  • 간기능검사 - 위에서 채혈한 혈액을 원심분리(3, 000 rpm, 10분)하여 혈장을 얻어 GOT 및 GPT(이상 UV rate 법, 자동분석 장치, CH 16 : Texas International INC.)를 측정하고, 나머지 무처리 혈액을 원심분리 (3, 000 rpm, 10분同여 혈청을 얻고, AL-P(Bessey-Lowry법), total cholesterol(CEH-COD-POD법), total bilirubin(azobarbin 법), blood ureanitrogen(Urease-GLDH법) 및 총단백질 (Biuret법)(이상 UV rate법, 자동분석장치 (Monach : Instrumentation Laboratory)3. 측정하였다.
  • 간보호작용 - 흰쥐에 사염화탄소 2 m〃kg을 매일 1 회씩 1주일간 근육주사하여 사망율과 손상된 간기능29) 을 혈중 GOT GPT AL£ Cholesterol, total bilirubin (TB), BUN 등을 측정하여 간기능검사를 시행한 결과, 녹양보탕은 다음과 같은 간보호작용이 있었다.
  • 건강식품으로 시판중인 녹양보탕의 생리활성을 측정하기 위하여 mouse에서 수영시간과 흰쥐에서 사염화탄소에 의한 간손상에서 항산화작용, 간기능 및 간 조직검사를 실시한 결과 다음과 같은 항피로 및 항산화 작용이 있었다.
  • swimming time의 판정 기준은 유영을 처음 시작한 후 두 눈이 완전히 수면하로 5초이상 잠수될 때까지로 정하였다. 건강식품은 투여 기간에 따른 효과를 관찰하기 위하여 10마리를 1군으로 하여 실험전 1, 3, 5 및 7일간 투여한 실험군으로 분류하여 실험하였으며, 건강식품의 투여량에 따른 효능을 관찰하기 위하여 녹양용보탕을 60 kg당 20, 80 및 320 mZ을 경구투여 하였으며, 마지막 건강식품의 투여는 실험 30분전에 경구투여 하였다. 대조군에는 생리식염수를 경구투여 하였다.
  • 절취한 간 3 g을 정확히 달아 thiobarbituratereactive substarmces(TBARS)”)를 정량하는데 사용하였고, 나머지 간조직은 통상적인 조직표본을 제작하는데 사용하였다. 녹양보탕은 실험군에는 60 kg당 20, 80 및 320 m2을 경구투여하였고, 대조군에는 생리식 염액을 경구투여하였다.
  • 간독성을 유발시켰다. 녹양보탕을 60 kg당 20, 80 및 320 m/을 경구투여하였다. 실험군은 사염화탄소 투여 1시간 전에 미리 녹양보탕을 경구투여 시켰고, 모든 실험동물을 제8일째에 12시간 절식시킨 다음 에텔로 마취하여 개복하고 하대정맥에서 채혈하여간 기능검사에 사용하였고, 간문맥에 catheter를 삽입하고 Tns-HCl buffer로 관류시켜 간내 혈액을 제거한 후 간을 절취하였다.
  • 건강식품은 투여 기간에 따른 효과를 관찰하기 위하여 10마리를 1군으로 하여 실험전 1, 3, 5 및 7일간 투여한 실험군으로 분류하여 실험하였으며, 건강식품의 투여량에 따른 효능을 관찰하기 위하여 녹양용보탕을 60 kg당 20, 80 및 320 mZ을 경구투여 하였으며, 마지막 건강식품의 투여는 실험 30분전에 경구투여 하였다. 대조군에는 생리식염수를 경구투여 하였다.
  • 수영실험은 12시간 절식시킨 후 체중을 달고 체중에 2, 3, 4 및 5%의 납 줄을 달아 목에 걸고 수영을 시켰으며, 수영종료는 두 눈이 잠길 정도의 수영이 5초간 진행되어 가라앉게 될 때를 수영가능 시간으로 종료하였다. 동물의 수영기간 측정은 생리식염수를 투여한 대조군과 녹양보탕을 용량별로 투여한 실험군을 동시에 부유시켜 동일한 시간에 동일한 조건으로 즉정하였다. swimming time의 판정 기준은 유영을 처음 시작한 후 두 눈이 완전히 수면하로 5초이상 잠수될 때까지로 정하였다.
  • 직경 10 cm, 높이 20 cm의 투명한 원통 프라스틱 용기에 증류수를 15 cm 까지 채우고 25℃ 항온조에 넣어 일정한 온도를 유지하면서 동일한 시간에 10개의 수영조에서 10마리 mouse의 수영 시간을 동시에 측정하였다. 수영실험은 12시간 절식시킨 후 체중을 달고 체중에 2, 3, 4 및 5%의 납 줄을 달아 목에 걸고 수영을 시켰으며, 수영종료는 두 눈이 잠길 정도의 수영이 5초간 진행되어 가라앉게 될 때를 수영가능 시간으로 종료하였다. 동물의 수영기간 측정은 생리식염수를 투여한 대조군과 녹양보탕을 용량별로 투여한 실험군을 동시에 부유시켜 동일한 시간에 동일한 조건으로 즉정하였다.
  • 녹양보탕을 60 kg당 20, 80 및 320 m/을 경구투여하였다. 실험군은 사염화탄소 투여 1시간 전에 미리 녹양보탕을 경구투여 시켰고, 모든 실험동물을 제8일째에 12시간 절식시킨 다음 에텔로 마취하여 개복하고 하대정맥에서 채혈하여간 기능검사에 사용하였고, 간문맥에 catheter를 삽입하고 Tns-HCl buffer로 관류시켜 간내 혈액을 제거한 후 간을 절취하였다. 절취한 간 3 g을 정확히 달아 thiobarbituratereactive substarmces(TBARS)”)를 정량하는데 사용하였고, 나머지 간조직은 통상적인 조직표본을 제작하는데 사용하였다.
  • 가 반응성이 많은 활성물질로 변화되어 간지질의 구성 불포화 지방산을 radical화하고, peroxide radical 생성을 촉진하므로 지방 변성을 일으켜 지방간을 유발한다. 이러한 병리기전으로 간조직에 상해를 일으키는 지방의 산화 과정에서 지방대사산물인 malondialdehyde(MDAX thiobarbituric acid (TBA)와 발색반응시켜서 정량하여 녹양 보 탕의 간해독능을 측정하였다.
  • 실험군은 사염화탄소 투여 1시간 전에 미리 녹양보탕을 경구투여 시켰고, 모든 실험동물을 제8일째에 12시간 절식시킨 다음 에텔로 마취하여 개복하고 하대정맥에서 채혈하여간 기능검사에 사용하였고, 간문맥에 catheter를 삽입하고 Tns-HCl buffer로 관류시켜 간내 혈액을 제거한 후 간을 절취하였다. 절취한 간 3 g을 정확히 달아 thiobarbituratereactive substarmces(TBARS)”)를 정량하는데 사용하였고, 나머지 간조직은 통상적인 조직표본을 제작하는데 사용하였다. 녹양보탕은 실험군에는 60 kg당 20, 80 및 320 m2을 경구투여하였고, 대조군에는 생리식 염액을 경구투여하였다.
  • 등 2%의 weight-loaded forced swimming test를 개량하여 실시하였다. 직경 10 cm, 높이 20 cm의 투명한 원통 프라스틱 용기에 증류수를 15 cm 까지 채우고 25℃ 항온조에 넣어 일정한 온도를 유지하면서 동일한 시간에 10개의 수영조에서 10마리 mouse의 수영 시간을 동시에 측정하였다. 수영실험은 12시간 절식시킨 후 체중을 달고 체중에 2, 3, 4 및 5%의 납 줄을 달아 목에 걸고 수영을 시켰으며, 수영종료는 두 눈이 잠길 정도의 수영이 5초간 진행되어 가라앉게 될 때를 수영가능 시간으로 종료하였다.
  • 통상조직표본 제작 - 위에서 얻은 간조직을 10% formalin 액에 고정한 후 통상적인 조직표본을 제작하고 hematoxylline & eosin 중복염색하여 조직소견을 얻었다.
  • 4℃에서 3000Xg로 5분간 원심분리한 후 butanol phase 1 ml를 취하여 spectrophotometer로 532 run 에서 흡광도를 측정하였다. 표준물질은 1, 1, 3, 3-tetraethoxypropane으로 하여 정량하였다.
  • 본 연구자들은 forced swimming test를 개량하여 동물 체중에 일정량의 하중을 주어 수영시간을 측정하는 소위 "4% weight-loaded forced swimming test"로 항피로작용을 측정하는 방법을 개발하여 측정하였다. 한편 녹양보탕의 건강보조효과를 측정하기 위하여 mouse에서 swimming time과 흰쥐에서 사염화탄소에 의한 지질과산화, 간기능 및 조직소견을 얻어 녹양 보 탕의 생리활성을 측정하였다.
  • 흰쥐의 간상해 유발 - 흰쥐 10마리를 1군으로하여 1 주일간 매일 1회씩 CC14액(2 mZ/kg)을 흰쥐에게 피하주사하여 간독성을 유발시켰다. 녹양보탕을 60 kg당 20, 80 및 320 m/을 경구투여하였다.

대상 데이터

  • Inc.(U.S.A., Texas) 제품을 사용하였으며, thiobarbituric acid 및 1, 1, 3, 3-tetraethoxypropanee Sigma 사(U.S.A.)제품을 사용하였으며, 기타 시약은 1급시약을 사용하였다.
  • 82%가 함유되어 있고, 부원료로서 생강, 대추, 인삼, 당귀, 천궁, 숙지황, 작약, 감초, 백복령, 황기, 진피, 산사, 산약, 사인, 맥아, 두충, 오가피, 백출및 계피 등의 생약이 포함되어 있는 갈색의 액제이다. 사용한 실험재료는 1999년 2월 28일에 제조한 Lot. No.
  • 실험동물 사육조건 - 실험동물은 체중 18±5 g의 ICR계 mouse를 중앙대학교 약학대학 동물사육장의 SPF실(Rchniplast Co., Italy)에서 실온은 23±2℃, 상대습도 60+2%, 환기회수 13~15회/hr, 조명 12 hr/day(오전 7시~오후 7시)으로 설정하여 사육하였다. 동물은 흰쥐용 cage에 넣고 방사선멸균한 고형사료(한일사료 : 그린피아주식회사) 및 음료수(가열멸균한 수돗물)는 자유로이 섭취하도록 하였다.

데이터처리

  • 통계처리 - 본 실험의 모든 결과는 Student's t-test 를 이용하여 유의성을 검정하였다.

이론/모형

  • 32 g을투여한 것과 같다. 투여군과 대조군으로 나누어 10마리를 1군으로 하여 각각 경구투여하고 2주내에 사망한 동물수를 세어 Brehrens-Karber법28)에 의하여 LRo를 계산하였다.
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