쑥 추출물의 사람 Low Density Lipoprotein에 대한 항산화능 Antioxidative Activity of Mugwort extracts(Artemisia Princeps Var. Orientalis) on Human Low Density Lipoprotein원문보기
The antioxidative effect of mugwort extracts was measured by DPPH and LDL with four different solutions (70% acetone, ethanol, hot water, cold water). Mugwort extracts contained 3.2% of polyphenol, 380 RE/l00 g of vitamin A, 16.2 mg/100 g of vitamin C, and 5.1 ${\alpha}$-TE/100 g of vitam...
The antioxidative effect of mugwort extracts was measured by DPPH and LDL with four different solutions (70% acetone, ethanol, hot water, cold water). Mugwort extracts contained 3.2% of polyphenol, 380 RE/l00 g of vitamin A, 16.2 mg/100 g of vitamin C, and 5.1 ${\alpha}$-TE/100 g of vitamin E. DPPH revealed the effect in the order of 70% acetone, hot water, ethanol, and cold water. In particular, 70% acetone showed outstandingly stronger activity than the control group. Also, when 10 ${\mu}\ell$ was added, the effect was well noticed. But the antioxidative activity was hardly seen at 15 ${\mu}\ell$. LDL exhibited the same order of strength in proportion to mugwort's concentration. Against the control group, the activity of 70% acetone was 7 times, hot water and ethanol 6 times, and cold water 2 times. This result is attributable to the antioxidative increase of polyphenol and antioxidative vitamins.
The antioxidative effect of mugwort extracts was measured by DPPH and LDL with four different solutions (70% acetone, ethanol, hot water, cold water). Mugwort extracts contained 3.2% of polyphenol, 380 RE/l00 g of vitamin A, 16.2 mg/100 g of vitamin C, and 5.1 ${\alpha}$-TE/100 g of vitamin E. DPPH revealed the effect in the order of 70% acetone, hot water, ethanol, and cold water. In particular, 70% acetone showed outstandingly stronger activity than the control group. Also, when 10 ${\mu}\ell$ was added, the effect was well noticed. But the antioxidative activity was hardly seen at 15 ${\mu}\ell$. LDL exhibited the same order of strength in proportion to mugwort's concentration. Against the control group, the activity of 70% acetone was 7 times, hot water and ethanol 6 times, and cold water 2 times. This result is attributable to the antioxidative increase of polyphenol and antioxidative vitamins.
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문제 정의
본 연구는 이러한 생리적, 약리적 효능을 지닌 쑥의 항산화 능을 검토하고자 쑥 추출물들의 DPPH(l, l-diphenyl -2-picrylhydrazyl)에 의한 환원활성과 LDL에 대한 항산화 능을 측정하였다.
제안 방법
0.1 mM의 DPPH용액(99.9% ethanol에 용해) 2mZ에네 종류의 쑥 추출물을 각각 5, 10, 15, 20|H씩 37℃ 에서 20분간 incubation시킨 후 516nm에서 흡광도를 측정하였다.
PBS에서 조제된 LDL용액에 쑥분말 추출액을 첨가하고 아조화합물(V-70, 2, 2-Azobis(4-methoxy-2, 4-dimethyl- Valeronitrile)의 농도를 400|im이 되도록 주입한 후, 37℃로 incubation하고 234 nm에서 흡광도를 측정하였으며, 공액 이중결합이 생성될 때까지의 시간을 lag time 으로 하여 각 추출물의 사람 LDL에 대한 항산화 능을 측정하였다.
4)를 첨가하고 밀봉(heat sealer)하여 초고속 원심분리기(100, 000rpm, 40min, 4℃로 LDL을 분획, 채취하였다. 분취된 LDL에서 micro BCA(Bicincho:ninic acid)로 단백질의 양을 측정 (COBAS MIRA, Roche Co, France)하여 LDL 분획중의 단백질의 양이 70 mg/m/l] 되도록 PBS(Phosphate Buifered Salt)에서 조제하였다.
쑥을 네 가지의 각기 다른 용매(70% acetone, ethanol, 열수, 냉수)로 추출하여 DPPH 환원 활성에 의한 항산화능 및 LDL에 대한 항산화능을 측정하였다.
000rpm에서 분리하였다. 여기에 KBr을 plasma 1 m/ 당 0.325 g을 가한 후 buffer(0.15M NaCl, 0.1% ED1A, pH 7.4)를 첨가하고 밀봉(heat sealer)하여 초고속 원심분리기(100, 000rpm, 40min, 4℃로 LDL을 분획, 채취하였다. 분취된 LDL에서 micro BCA(Bicincho:ninic acid)로 단백질의 양을 측정 (COBAS MIRA, Roche Co, France)하여 LDL 분획중의 단백질의 양이 70 mg/m/l] 되도록 PBS(Phosphate Buifered Salt)에서 조제하였다.
2와 Table 3에 각각 나타내었다. 열수, 70% acetone, ethanol, 냉수 추출액을 LDL 분획에 첨가하여 각각의 항산화 능을 측정하였다.
대상 데이터
각기 다른 네가지 종류의 용매(70% acetone, 99.9% ethanol, 열수, 냉수) 2mZ에 쑥분말 0.1 g을 첨가하여 3, 000 rpm으로 20분간 원심분리한 후 그 상등액을 채취하여 시료로 사용하였다.
본 실험에 사용한 쑥(Artemisia Princeps Var. Orientalis)은 부산의 건재방에서 구입하여 3회 세척하고 이물질을 제거한 후 약 3일간 음건한 후 분쇄기에서 40mesh로 분쇄하여 솜조직을 제외한 분말 성분만을 분리하여 시료용으로 사용하였다.
이론/모형
비타민 A의 함량은 Nills의 방법46)으로 분석하였다. 비타민 C는 일본 약학회편의 방법47)으로 520nm에서 흡광도를 측정하였다.
분석하였다. 비타민 C는 일본 약학회편의 방법47)으로 520nm에서 흡광도를 측정하였다. 비타민 E는 AOAC의 방법48)으로 HLPC를 이용하여 분석하였으며 그 결과는 a-tocopherol 당량(a-TE)으로 환산하였다.
비타민 C는 일본 약학회편의 방법47)으로 520nm에서 흡광도를 측정하였다. 비타민 E는 AOAC의 방법48)으로 HLPC를 이용하여 분석하였으며 그 결과는 a-tocopherol 당량(a-TE)으로 환산하였다.
성능/효과
1과 같다. 5^1/ 첨가시에 항산화능이 나타나기 시작하여 10 ㎕을 첨가했을 때는 모든 추출물에서 항산화능이 강하게 나타났으며 냉수를 제외한 모든 추출물에서 대조군보다 50% 이상 상승된 강한 항산화능을 볼 수 있었으며, 특히 70% acetone 추출물에서는 다른 어떤 추출액에서보다 가장 강한 항산화능을 나타내었다. 항산화능이 강한 정도는 70%-acetone 추출액>열수 추출액>ethanol 추출액>냉수 추출액의 순이었다.
1 a-TE/100g이었다. DPPH에 의한 항산화 능은 70% acetone 추출액>열수 추출액 > ethanol 추출액>냉수 추출액의 순으로 나타났다. 특히 70% acetone 추출액은 대조군보다 현저히 강한 항산화능이 있었다.
DPPH에 의한 항산화능은 각 추출액의 경우 10 ㎕을 첨가했을 때에 그 효력이 현저하게 향상되며, 15 이상을 첨가하게 되면 그 정도가 더 이상 진행되지 않음을 보여주고 있어서 10㎕의 양이 비교적 적합한 범위인 것으로 판단되었다.
LDL에 대한 항산화능은 70% acetone 추출액에서 대조군의 약 7배, 열수 및 ethanol 추출액은 약 6배, 냉수 추출액도 대조군의 약 2배의 강도를 가진 것으로 나타냈다.
대조군의 lag time 32분에 비하여 70% acetone 추출액의 lag time은 219.7분, 열수 추출액의 lag time 186.2분, 냉수 추출액은 65.1 분, ethanol 추출액은 180.8 분으로 네 종류의 추출액에서 lag time이 모두 연장되어 LDL에 대한 항산화능을 인정할 수 있었다. 특히 70% acetone 추출액의 경우 Vitamin C의 lag time 224.
또한 10M을 첨가하였을 때에 그 효력이 현저하며, 15 |1/ 이상일 때는 항산화능의 정도가 미미하여 10 B의 양이 적합한 범위인 것으로 판단되었다.
DPPH에 의한 항산화 능은 70% acetone 추출액>열수 추출액 > ethanol 추출액>냉수 추출액의 순으로 나타났다. 특히 70% acetone 추출액은 대조군보다 현저히 강한 항산화능이 있었다.
8 분으로 네 종류의 추출액에서 lag time이 모두 연장되어 LDL에 대한 항산화능을 인정할 수 있었다. 특히 70% acetone 추출액의 경우 Vitamin C의 lag time 224.3분에 거의 가까워서 대조군의 약 7배에 달하는 가장 강한 항산화 능을 보였으며 열수 및 ethanol 추출액은 약 6배, 가장 약한 것으로 나타난 냉수 추출액은 대조군의 약 2 배에 달하는 항산화능을 가진 것으로 나타났다. 그 강한 순서는 DPPH에서와 같았다.
후속연구
따라서 생체내 활성 라디칼 반응을 억제시키는 항산화 물질은 동맥경화를 비롯한 순환기계 질환과 노화를 예방 및 지연시킬 것으로 기대된다.
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