Based on DPPH radical scavenging activity and lipid peroxidation inhibitory activity, the MeOH extracts of 139 crude drugs were screened in order to search for antioxidants. Among tested samples, the extracts from the seed of Nelumbo nucifera, the fruit of Terminalia chebula var. gangetia, the root ...
Based on DPPH radical scavenging activity and lipid peroxidation inhibitory activity, the MeOH extracts of 139 crude drugs were screened in order to search for antioxidants. Among tested samples, the extracts from the seed of Nelumbo nucifera, the fruit of Terminalia chebula var. gangetia, the root of Salvia miltiorhiza, the fruit of Ziziphus jujuba var. innermis, the root bark of Paeonia moutan, the fruit of Rubus coreanus, the fruit of Zanthoxylum schinifolium, the lignum of Caesalpinia sappan, the leaf of Pinus densiflora, the rhizome of Alpinia officinarum, the fruit of Syzygium aromaticum, the ramulus and uncus of Uncaria rhynchophylla, the root bark of Lycium chinense, and the fruit of Alpinia katsumadai showed a relatively strong antioxidative activity. Furthermore, the BuOH fraction from the extract of N. nucifera showed a potent activity in each assay. The isolation of bioactive compounds has been carried out and will be reported in the next paper.
Based on DPPH radical scavenging activity and lipid peroxidation inhibitory activity, the MeOH extracts of 139 crude drugs were screened in order to search for antioxidants. Among tested samples, the extracts from the seed of Nelumbo nucifera, the fruit of Terminalia chebula var. gangetia, the root of Salvia miltiorhiza, the fruit of Ziziphus jujuba var. innermis, the root bark of Paeonia moutan, the fruit of Rubus coreanus, the fruit of Zanthoxylum schinifolium, the lignum of Caesalpinia sappan, the leaf of Pinus densiflora, the rhizome of Alpinia officinarum, the fruit of Syzygium aromaticum, the ramulus and uncus of Uncaria rhynchophylla, the root bark of Lycium chinense, and the fruit of Alpinia katsumadai showed a relatively strong antioxidative activity. Furthermore, the BuOH fraction from the extract of N. nucifera showed a potent activity in each assay. The isolation of bioactive compounds has been carried out and will be reported in the next paper.
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문제 정의
것으로 예상된다. 따라서 activity-guided fractio- nation을 통한 항산화활성 물질분리 등 BuOH 분획물로 활성물질을 분리하고 있으며 이에 관한 연구는 추후에 보고하고자 한다.
의한 것으로 밝혀져 있다. 항산화물질을 생약으로부터 분리하기 위하여 139종의 MeOH 추출물에 대한 활성을 조사하여 다음과 같은 결과를 얻었다.
가설 설정
2. 지질과산화 억제활성 검색에서 반응계의 농도를 100 (ig/mZS. 했을 때 가자, 단삼, 지골피, 초두구 등 4종의 메탄올 추출물이 대조군에 비해 80% 이상 강한 지질과산화 억제활성을 나타내었고 목단피, 복분자, 비파엽, 산초, 소목, 송엽, 양강, 정향, 조구등 등 10종의 메탄올 추출물은 대조군에 비해 60% 이상 억제 활성을 나타내었다.
a) Each MeOH extract of herbal medicine was treated at 100 as the final concentration. b) B: bulbous, C: cauline, Fl: flower, Fr: fruit, L: leaf, Li: ligneous, P: pollen, R: root, Ra: ramulus, Rh: rhizome, Sb: stem bark, Sc: scalerutium, Se: seeds, St: stem, T: tuber, Wp: whole plant.
했을 때 가자, 단삼, 지골피, 초두구 등 4종의 메탄올 추출물이 대조군에 비해 80% 이상 강한 지질과산화 억제활성을 나타내었고 목단피, 복분자, 비파엽, 산초, 소목, 송엽, 양강, 정향, 조구등 등 10종의 메탄올 추출물은 대조군에 비해 60% 이상 억제 활성을 나타내었다. 가자, 단삼, 지골피, 초두구 등은 positive controls. 사용한 a-tocopherol과 비교해비슷하거나 다소 높은 억제활성을 나타냈는데, 이는 실험실적으로 지질원을 산화시키기 위해 가한 Fe2+ ion을 이들 주출물이 chelation하여 지질원의 산화를 방해하기 때문에 나타나는 결과로 생각된다.
제안 방법
67% TBA 용액 250卩/를 가하고 100℃에서 10분간 끓인 후 532nm에서 그 흡광도를 측정하였다. 각 시료 의지 질과 산화 억제활성은 대조구에 대한 MDA의 생성감소 정도로써 산출하였으며, 지질과산화 반응을 50% 억제시키는 농도를 IC"로 하였다. Positive contro로는 BHA 및 a-tocopherol을 사용하였다.
대조구로는 시료 대신 DMSO를가해 시료의 흡광도 감소 정도를 조사하였으며 , DPPH radical을 50% 소거시키는 시료의 농도를 IC50로 하였다. Positive control로는 BHA 및 a-tocopherol을 사용하여 항산화효과를 비교하였다.
0Xl()TM, Ethanol) 190 B를 가한 후 실온에서 30분간 반응시켜 각 반응액의 흡광도를 520 nm에서 측정하였다. 대조구로는 시료 대신 DMSO를가해 시료의 흡광도 감소 정도를 조사하였으며 , DPPH radical을 50% 소거시키는 시료의 농도를 IC50로 하였다. Positive control로는 BHA 및 a-tocopherol을 사용하여 항산화효과를 비교하였다.
연자의 MeOH ex.를 물로 현탁시킨 후 hexane, EtOAc 및 BuOH로 순차적으로 용매분획하였고, 완전히 농축하여 DMSO에 녹이고 단계별로 희석하여 DPPH radical 소거활성 및 지질 과산화 억제활성을 측정하였다(Table n). 그 결과 MeOH 추출물이 DPPH radical 50% 소거활성 및 지질 과산화 억제활성에서 각각 52.
비교적 강력한 DPPH radical 소거활성 및 지질 과산화 억제활성을 나타내었던 생약으로부터 항산화 물질을 분리하기 위하여 용매분획을 하였다. 연자는 수련과(Nymphaeaceae)에 속하는 연 (Nelumbo nucifera) 의 종자로 타원형이며 길이가 1.
여과한 후 주출액 일부를 microcentrifuge tube에 넣고 완전히 농축하여 추출물의 무게를 측정하였다. 건조된 주줄 물에 DMSO를 넣어 최종농도가 100 |jg/mZ가 되도록 하였다.
한방에서는 익심(益心), 익신(益腎), 보비(補脾), 삽장 (圭腸)의 효능이 있어 다몽(多夢), 유정(有精), 임탁(淋濁), 구리(久痢) 등의 치료에 사용되어 왔다14,15) 성분으로는 nuciferine, nomuciferine, liriodenine, norar- mepavine, oxo- ushinsunine 등의 alkaloid가* 보고되어 있으나, 생리활성에 대한 연구는 미흡하다. 연자의 항산화활성 성분을 분리하고자 우선 용매분획물에 대한 항산화활성을 검색하였다. 연자의 MeOH ex.
29 g을 얻었다. 이들 용매 분획물에 대한 DPPH radical 소거활성 및 지질과산화억제 활성을 평가하기 위해 각각의 용매 분획물을 DMSO에 녹이고 단계별로 희석하여 최종농도가 6.25, 12.5, 25.0, 50.0, 100.0 ㎕/ml가 되도록 하였다.
따라서 식물로부터 노화억제를 위한 항산화제 탐색은 의미가 있을 것으로 사료된다. 이에 대한 기초 자료로서 본 실험에서는 국내에서 유통되는 140여 종의 생약 MeOH 추출물에 대하여 DPPH radical 소거활성및 지질과산화 억제활성을 조사하였으며, 그 중에서비교적 항산화활성이 강하고 연구가 미흡한 연자(Nelumbo nucifera, Nymphaeaceae) 추출물에 대해 순차적으로 용매분획한 후 각 분획물의 DPPH radi cal 소거활성 및 지질과산화 억제활성을 측정하였다.
대상 데이터
재료 - 본 실험에 사용한 생약은 (주)한국신약에서구입하여 감정한 것을 사용하였으며, 확증표본은 (주) 한국신약 자광연구소 생약실험실에 보관되어 있다.
성능/효과
1. DPPH radical 소거활성 검색에서 반응계의 농도를 100|Hg/mZ로 했을 때, 가자(訶子), 단삼, 마황, 목단피, 복분자, 빈랑자, 산초, 소목, 양강(良姜), 작약, 정향, 지골피, 초두구, 후박 등 14종의 메탄올 추출물이 대조군에 비하여 80% 이상 강한 DPPH radical 소거활성을 나타내었고, 그 다음으로 계피, 송엽(松葉), 연자, 오약, 인진호, 조구등, 홍화자 등 7종의 추출물이 60% 이상 소거활성을 나타내었다.
3. 용매분획물의 DPPH radical 소거활성 측정 결과, BuOH 분획물은 IC50값이 WOpig/mZ로 positive control인 (x-tocopherol(IC50 21.0 ㎕/ml) 보다 강력한활성을 나타내었다. EtOAc 분획물은 40.
4. 용매분획물의 지질과산화 억제활성 측정 결과, BuOH 분획물은 IC50 값이 5.9 ㎕/ml 분획물들 중가장 강력한 활성을 보여주었으며, 이는 positive control^ 사용했던 a-tocopherol(IC50 5.5 ㎕/ml과 비교해서도 비슷한 정도의 활성이었다. 그 다음으로 EtOAc 분획 물은 residue는 28.
를 물로 현탁시킨 후 hexane, EtOAc 및 BuOH로 순차적으로 용매분획하였고, 완전히 농축하여 DMSO에 녹이고 단계별로 희석하여 DPPH radical 소거활성 및 지질 과산화 억제활성을 측정하였다(Table n). 그 결과 MeOH 추출물이 DPPH radical 50% 소거활성 및 지질 과산화 억제활성에서 각각 52.9, 85.2 ㎕/ml의 농도에서 활성을 나타내었다. BuOH 분획물은 16.
반응계의 MeOH 추출물의 농도를 100ug/mZ로 처리했을경우 가자, 단삼, 마황, 목단피, 복분자, 빈랑자, 산초열매, 소목, 양강, 작약, 정향, 지골피, 초두구, 후박등 14종의 추출물이 대조군에 비해 80% 이상 강한 DPPH radical 소거활성을 나타내었고, 그 다음으로계피, 솔싹, 연자, 오약, 인진호, 조구등, 홍화씨 등 7 종의 추출물이 대조군에 비해 60% 이상 소거활성을나타내었다. 강한 DPPH radical 소거활성을 나타낸생약 추출물들이 대부분 지질과산화 억제활성도 나타내었다.
강한 DPPH radical 소거활성을 나타낸생약 추출물들이 대부분 지질과산화 억제활성도 나타내었다. 반응계의 최종농도를 lOONg/mZ로 하였을 때가자, 단삼, 지골피, 초두구 등 4종의 주줄물이 대조군에 비해 80% 이상 강한 지질과산화 억제활성을 나타내었고 목단피, 복분자, 비파엽, 산초, 소목, 솔잎, 양강, 연자, 정향, 조구등 등 10종의 추출물이 대조군에 비해 60% 이상 억제활성을 나타내었다. 가자, 단삼, 지골피, 초두구 등은 positive control로 사용한 a-tocopherol과 비교해 비슷하거나 다소 높은 억제활성을 나타내었는데, 이들 추출물을 넣고 반응계에 2mM FeSO4 .
이러한 노화의 활성산소 설은 1956년 Harman에 의해 처음 제안되었고, ')이후 여러 실험 결과들이 이를 뒷받침 해주고 있다. 실험조건을 달리 해 식이를 제한하거나 운동량을 감소시키는 등 기초대사율 즉, 산소소비량을 감소시키면 수명이 연장되는 것을 관찰하였다. 한편, 생체는 산화적 손상으로부터 방어하기 위한 항산화물질들과 superoxide dismutase(SOD), catalase, peroxidase 같은 항산화효소들이 있는데, 나이가 들어 늙어감에 따라 활성산소에 대한 방어능력이 감소한다는 사실이 보고되었다.
이상의 결과에서 연자의 BuOH 분획물에는 ot-toco- pherol 보다도 훨씬 강력한 항산화물질이 함유되어 있을 것으로 예상된다. 따라서 activity-guided fractio- nation을 통한 항산화활성 물질분리 등 BuOH 분획물로 활성물질을 분리하고 있으며 이에 관한 연구는 추후에 보고하고자 한다.
1 서 활성을 나타냈지만 hexane 분획물은 활성을 나타내지 못했다. 지질과산화 억제 활성검색에서는 MeOH 추출물이 85.2 ug/mZ의 농도에서 50% 억제활성을 나타내었고, EtOAc 분획물이 21.5 residue가 28.6 pig/mZ, H2O 분획물은 28.6에서 억제 활성을 나타내었으나, hexane 분획물은 활성이 없었다. DPPH radical 소거활성 및 지질과산화 억제활성 실험에서 hexane 분획물이 활성을나타내지 못한 것으로 보아 비극성 물질군에는 효능이 없는 것으로 판단된다.
지질과산화 억제활성 검색에서 반응계의 농도를 100 (ig/mZS. 했을 때 가자, 단삼, 지골피, 초두구 등 4종의 메탄올 추출물이 대조군에 비해 80% 이상 강한 지질과산화 억제활성을 나타내었고 목단피, 복분자, 비파엽, 산초, 소목, 송엽, 양강, 정향, 조구등 등 10종의 메탄올 추출물은 대조군에 비해 60% 이상 억제 활성을 나타내었다. 가자, 단삼, 지골피, 초두구 등은 positive controls.
후속연구
많이 생성되기 때문에, 이런 산화적 손상으로부터 보호할 수 있는 많은 효소들과 선택적으로 발달한 이차대사산물 등의 방어체계가 잘 발달되어 있을것으로 기대된다. 그러므로 식물은 그 자체가 항산화물질을 함유하고 있는 중요한 자원이 될 수 있다.
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