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문제 정의
- 따라서, 본 실험은 P-치약과, 그 중 주요 성분을 제외한 대조물질 및 죽염치약과 증류수를 시품의약품안전청 고시제 99-61호, 의약품 등의 독성시험 기준, (1999. 12. 22) 및 OECD 독성시험 가이드라인에 따라 Syrian Golden Hamster의 협낭에 1 ml을 넣고 봉합한 후 14일간 적용하였을 때 관찰되는 구강점막 자극 유무를 비교평가해 보고자 하였다.
제안 방법
- 22) 및 OECD 독성 시험 가이드라인에 따라 실시하였다.간략히 기술하면 Syrian golden hamster (수컷, 80시 20 g)를 음성대조군, 비교치약군(죽염치약), 본처 방 군(p-치약) 그리고 대조물질군으로 각각 10마리씩 4개 군으로 나누고, 체중kg당 60 mg의 케타민 (Ketamine HC1, 유한양행)를 근육 주사하여 전신마취를 실시하였다. 그 후 우측 협낭 (cheek pouch)을 조심스럽게 끌어딩-겨 생리식염수로 3회 잘 세정한 뒤, 주사기에 넣은 시료 1 ml이 sonde 를 통하여 들어갈 수 있도록 협낭의 맨 밑바닥에 주머니를 만들어 주입한 다음 Fehland intestinal forceps으로 고정시켜 멸균된 견재봉 합사(SilkNo.
- 본 실험에서는 p-치약, p-치약중 주요 성분을 첨가하지 않은 대조물질과 현재 시판되고 있는 죽염치약을 식품의약품안전청 고시제 99-61호, 의약품 등의 독성시험 기준, (1999. 12. 22) 및 OECD 독성시험가이드라인에 따라 햄스터의 우측 협낭에 적용한 후 봉합하여 14일간 지속시키는 구강 점막 자극시험을 1회 실시하여 구강점막 자극의 유무를 관찰하여 비교 평가해 보았다. P-치약의 불소농도는 1000 ppm으로 일반적으로 알려진 불소의 치사량인 0.
- 체중측정은 시험에 사용된 모든 햄스터에 대해 시험물질 투여 직전에 1회, 투여 개시 후에는 매주 2회씩 체중을 측정하였고, 부검 당일에도 체중을 측정하였다. 사료 및 음수 섭취량도 체중측정과 동일한 시기에 측정하였다.
- 본 시험은 온도 22 ± 3℃, 상대 습도 55 ± 5%, 환기횟수 10~12회 /hr, 조명 시간 12시간 및 조도150~200 Lux로 설정된 서울대학교 수의과대학 동물실험실(5호실)에서 실시하였으며 시험기간 중에 햄스터는 polycarbonate cage (26 x 42 x 18 cm, 명진기계)에 cage당 5마리씩 사육하였다 . 사료는 햄스터용 고형사료 ((주)퓨리나사료)를 섭취시켰으며, 투여 2시간 전에 급여를 중단하고, 투여 2시간 후에 다시 자유 섭취시켰다. 음수는 투여 2시간 후에 상수도 수를 자유 섭취시켰다.
- 순화 기간, 시험물질 투여전 및 최종 15일째까지 일반증상의 변화 및 사망 여부를 관찰하였다. 체중측정은 시험에 사용된 모든 햄스터에 대해 시험물질 투여 직전에 1회, 투여 개시 후에는 매주 2회씩 체중을 측정하였고, 부검 당일에도 체중을 측정하였다.
- 시험물질 적용 전, 후 또는 최종 15일째 동물을 부검하기 전에 우측 구강협부에 발생된 발적, 부종 등을 관찰하였으며, 이상이 인정되면 광학현미경상에서 조직병리소견을 검사하였다.
- 시험물질을 햄스터의 구강 협낭 점막에 투여한 후, 육안적으로 발적 및 부종형성을 관찰한 결과. 최종 부검일 15일째 모두 투여 부위에 육안적으로 부종형성은 관찰되지 않았고, 대조물질군 2마리와, 비교치약군 3마리에서 각각 발적이 관찰되었다 (Table 6).
- 1)로 simple continuous suture로 일단 봉합하고 그 후 다시 continuous everting mattress sutureS. 이 중봉합 (double suture)하여 14일간 유지하였다.
- 변화 및 사망 여부를 관찰하였다. 체중측정은 시험에 사용된 모든 햄스터에 대해 시험물질 투여 직전에 1회, 투여 개시 후에는 매주 2회씩 체중을 측정하였고, 부검 당일에도 체중을 측정하였다. 사료 및 음수 섭취량도 체중측정과 동일한 시기에 측정하였다.
- 최종 15일째에 모든 시험군을 ether로 안락사시켜, 우측 구강 협부의 협낭을 절제하여 자극 정도, 발적, 부종, 조직손상 등을 관찰한 후 포르말린에 고정시킨 다음 일반적인 조직처리 과정을 거쳐 파라핀에 포매하여 4em 절편을 잘라 Hematoxylin & Eosin으로 염색하여 관찰하였다.
대상 데이터
- 8~9 주령 된 80~ 120 g의 수컷 햄스터((주) 한림 실험동물) 를 동 물실에서 1주일간 순화시키고, 순화 기간 중 일반 상태를 관찰하여 건강한 동물만을 시험에 사용하였다.본 시험은 온도 22 ± 3℃, 상대 습도 55 ± 5%, 환기횟수 10~12회 /hr, 조명 시간 12시간 및 조도150~200 Lux로 설정된 서울대학교 수의과대학 동물실험실(5호실)에서 실시하였으며 시험기간 중에 햄스터는 polycarbonate cage (26 x 42 x 18 cm, 명진기계)에 cage당 5마리씩 사육하였다 .
- 관찰하여 건강한 동물만을 시험에 사용하였다.본 시험은 온도 22 ± 3℃, 상대 습도 55 ± 5%, 환기횟수 10~12회 /hr, 조명 시간 12시간 및 조도150~200 Lux로 설정된 서울대학교 수의과대학 동물실험실(5호실)에서 실시하였으며 시험기간 중에 햄스터는 polycarbonate cage (26 x 42 x 18 cm, 명진기계)에 cage당 5마리씩 사육하였다 . 사료는 햄스터용 고형사료 ((주)퓨리나사료)를 섭취시켰으며, 투여 2시간 전에 급여를 중단하고, 투여 2시간 후에 다시 자유 섭취시켰다.
- 본 실험에서 사용한 시험물질은 주요 성분인 NaF (1000 ppm), Tranexamic Acid (0.05%), 가공소금(1.5%), 솔잎 추출물 (0.15%)과 치약의 필수 성분인 이산화규소(연마제) (12.3 %), 파스타제의 제형을 유지하기 위해 첨가호}는 기타성분으로 점도 조절제, pH 조절제, 습=윤제, 기포저], 증류수 및 향 등을 포함하는 본처 방제와, 주요 성분을 제외한 필수성분과 기타성분이 동량 포함된 대조물질을 사용하였으며 (Table 1), 비교치 약군으로는 죽염치약을, 음성대조군으로는 증류수를 사용하였다.
데이터처리
- 유의 한 F값이 관찰되는 항목에 대하여 음성대조군과 물질처치 군 사이에 유의 수준 p<0.05로 Dunnett's t-test를 이용하여 비교하였고, 비모수인 경우는 분산에 대하여 Kruskal-Wallis nonparametric analysis를 실시한 후 유의한경 우 Wilcoxon-Mann-Whitney rank-sum test, Nemenye-Kruscal-Wallis multiple comparisons을 실시하였다. 또한, 병리조직학적으로 관찰된 병변의 발생 빈도는 X2 (Chi-square) 검정을 하였다.
- 05로 Dunnett's t-test를 이용하여 비교하였고, 비모수인 경우는 분산에 대하여 Kruskal-Wallis nonparametric analysis를 실시한 후 유의한경 우 Wilcoxon-Mann-Whitney rank-sum test, Nemenye-Kruscal-Wallis multiple comparisons을 실시하였다. 또한, 병리조직학적으로 관찰된 병변의 발생 빈도는 X2 (Chi-square) 검정을 하였다.
이론/모형
- 식품의약품안전청 고시제 99-61호, 의약품 등의 독성시험기준'(1999. 12. 22) 및 OECD 독성 시험 가이드라인에 따라 실시하였다.간략히 기술하면 Syrian golden hamster (수컷, 80시 20 g)를 음성대조군, 비교치약군(죽염치약), 본처 방 군(p-치약) 그리고 대조물질군으로 각각 10마리씩 4개 군으로 나누고, 체중kg당 60 mg의 케타민 (Ketamine HC1, 유한양행)를 근육 주사하여 전신마취를 실시하였다.
성능/효과
- 치약은 실생활에서 사용 시구 강점 막에 흐) 루에 2분 정도 적용하고, 적용 후 14일간 유지하는 본 실험과는 달리 칫솔질 후 헹구어내는 것이 일반적이므로 최근 유해물질로 알려져 사회적 문제시되고 있는 불소에의 노출은 14일간 P-치약을 지속적으로 적용하는 본 실험 방법에 비하면 극히 적은 양이라 사료된다. 그리고 본 실험은 본 처방으로 사용된 치약 및 비교물질들을 위에 언급한 방법들을 사용하여, 치약 사용 시 발생할 수 있는 최대의 구강 점막 자극이 유도되도록 실시하였다는 것에 의의를 둘 수 있다.
- p data-page="1">의약품, 히장품 등의 동물을 이용한 구강점막자극시험법은 hamster를 사용하는 것이 일반적이고, 동물을 마취하여 시료를 구강 내에 적용하는 방법이 널리 사용되고 있다1-5). 또한, 햄스터 협낭은 chlorhexidme의 자극성 시험과6) 마우스워시를 반복 적용시켜 그 자극성을 평가하기 위해서도 이용되었는데 7-9) chlorhexidine gluconate를 적용시킨 결과, 간과 신장에 축적되는 것이 관찰되었으며,10,11) mm N-methyl-N-nitro-sourea (NMU)를 적용시킨 결과 점막내의 악성 변화가 여러 곳에서 관찰되었다 (2) 이러한 보고에서 햄스터 협낭의 상피세포를 통해 물질이 흡수될 수 있으며 다른 장기로의 이동도 가능하다는 사실을 알 수 있었다.13,14) 위와 같은 시험들은 햄스터 협낭에 시료를 단기간, 여러 번 접촉시키는 방법을 채택하였으나, 치약을 포함한 치과 재료를 사용한 구강 점막 자극 시험법은 비교적 장기간 시료를 적용하기 위하여 시험물질 삽입 후 봉합하는 방법이 이용되고 있다5,15).
- 병리조직검사 결과에서는 음성대조군을 제외한 다른 군의 몇몇 개체에서 mild inflammation과 fibrosis가 관찰되었으나, 본처 방군의 병 변 발생 정도가 비교치약군과 대조물질 군에 비하여 미약하였다.
- 실험 전 기간에 걸쳐 사망한 동물이나 특별한 임상 증상은 나타나지 않았으며, 체중, 사료 및 음수 섭취량에서도 음성대조군에 비해 유의적인 변화를 관찰할 수 없었다.
- 음성 대조군을 포함한 모든 시험군에서 시험기간동안 사망한 동물은 관찰되지 않았으며, 전동물에서 시험물질 투여로 인한 특이한 임상증상은 관찰되지 않았다.
- 발적 및 부종형성을 관찰한 결과. 최종 부검일 15일째 모두 투여 부위에 육안적으로 부종형성은 관찰되지 않았고, 대조물질군 2마리와, 비교치약군 3마리에서 각각 발적이 관찰되었다 (Table 6).
후속연구
- 이상의 결과들을 종합해 보았을 때, P-치약은 비교 물질로 사용한 다른 치약들에 비해 점막자극 정도가 미약한 것으로 사료되며, 더 나아가 실생활에 적용되더라도 그 자극성이 문제시되지 않으리라 사료된다.
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