Probiotics를 개발하기 위하여 저온성 및 내염성의 특성을 갖는 균주를 김치로부터 분리하였다. 분리한 3종의 균주를 동정한 결과 MGl9는 Lactobacillus brevis, MG89는 Enterococcus faecium, MG208은 Lactobacillus plantarum으로 확인되었다. 분리된 3종의 균주에 대한 동결건조 보호제 시험을 한 결과 MGl9는 10% skim milk + l% soluble starch에서 71.4%로 생존율이 가장 높았고 lactose와 mellezitose 에서도 60% 이상의 생존율을 나타냈다. MG89는 solbitol에서 76.2%로 생존율이 가장 높았고 sucrose, xylitol, mannitol 등에서도 66% 이상의 생존율을 나타내었다. MG208은 fructose에서 64.7%의 생존율을 보였다 인공위액에서의 균 생존율을 시험한 결과 lactose, mellezitose, hlycogen, mannose, xylose 등에서70% 정도의 우수한 생존율을 보였다. 이러한 결과로부터 본시험에 사용된 동결건조 보호제 가운데 몇몇은 유산균의 종류에 따라 다르지만 동결건조제품의 제조나 사료첨가제로 제조시 산업적인 이용이 가능할 것으로 사료된다.
Probiotics를 개발하기 위하여 저온성 및 내염성의 특성을 갖는 균주를 김치로부터 분리하였다. 분리한 3종의 균주를 동정한 결과 MGl9는 Lactobacillus brevis, MG89는 Enterococcus faecium, MG208은 Lactobacillus plantarum으로 확인되었다. 분리된 3종의 균주에 대한 동결건조 보호제 시험을 한 결과 MGl9는 10% skim milk + l% soluble starch에서 71.4%로 생존율이 가장 높았고 lactose와 mellezitose 에서도 60% 이상의 생존율을 나타냈다. MG89는 solbitol에서 76.2%로 생존율이 가장 높았고 sucrose, xylitol, mannitol 등에서도 66% 이상의 생존율을 나타내었다. MG208은 fructose에서 64.7%의 생존율을 보였다 인공위액에서의 균 생존율을 시험한 결과 lactose, mellezitose, hlycogen, mannose, xylose 등에서70% 정도의 우수한 생존율을 보였다. 이러한 결과로부터 본시험에 사용된 동결건조 보호제 가운데 몇몇은 유산균의 종류에 따라 다르지만 동결건조제품의 제조나 사료첨가제로 제조시 산업적인 이용이 가능할 것으로 사료된다.
For the developement of probiotics, three strains haying psychorophilic and salt tolerant characteristics were isolated from Kimchi. Among the isolated strains, MGl9, MG89 and MG208 were identified as Lactobacillus brevis, Enterococcus faecium and Lactobacillus plantarum, respectively. The relations...
For the developement of probiotics, three strains haying psychorophilic and salt tolerant characteristics were isolated from Kimchi. Among the isolated strains, MGl9, MG89 and MG208 were identified as Lactobacillus brevis, Enterococcus faecium and Lactobacillus plantarum, respectively. The relationship between cryoprotectant and the viability of freeze dried strains has been studied. The most effective cryoprotectant for MGl9 was found to be 10% skim milk contained 1% soluble starch haying the survival rate of 71.4%. In MG89, 10% skim milk contained 1% sucrose and 10% skim milk contained l% fructose in MG208 were showed effective cryoprotectant having the survival rate 68.9% and 64.7%. respectively These results suggest that these isolated strains can play an important role as probiotics in aquaculture.
For the developement of probiotics, three strains haying psychorophilic and salt tolerant characteristics were isolated from Kimchi. Among the isolated strains, MGl9, MG89 and MG208 were identified as Lactobacillus brevis, Enterococcus faecium and Lactobacillus plantarum, respectively. The relationship between cryoprotectant and the viability of freeze dried strains has been studied. The most effective cryoprotectant for MGl9 was found to be 10% skim milk contained 1% soluble starch haying the survival rate of 71.4%. In MG89, 10% skim milk contained 1% sucrose and 10% skim milk contained l% fructose in MG208 were showed effective cryoprotectant having the survival rate 68.9% and 64.7%. respectively These results suggest that these isolated strains can play an important role as probiotics in aquaculture.
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문제 정의
본 시험에서는 유산균의 동결건조시당 및 당알콜류와 기타 이미 알려진 동결건조 보호제를 첨가했을 때 건조 후 생균수의 변화에 미치는 영향을 관찰하였다 당. 당알콜 등을 제외한 성분들에 대해서 유산균의 생존율을 시험한 결과 skim milk를 10% 첨가했을 때 MG19는 58.
본 연구에서는 생균제로서 이용 가능한 유산균을 김치로부터 분리하고 동정하였으며 특히 해수양식 어 사료 첨가제로 이용 가능한 균주를 선발하기 위해 저온성, 내염성 특성을 갖는 균주를 분리하였다. 또한 유산균을 생균제로서 이용할 수 있는 한 가지 방법으로서 동결건조 중 균의 생존율을 최대한 높일 수 있는 동결건조 보호제의 종류에 대해 시험하였다.
제안 방법
온도별 균의 배양시험은 BCP 배지를 사용한 평판 배양법으로 10°C, 20°C, 25°C, 30°C. 37°C, 40'C에서 24시간 배양 후 집락의 생성유무를 측정하여 생육온도 범위를 확인하였다 pH에 따른 배양시험은 pH를 각 각 pH 3.0, pH 4.0. pH 5.
3%, 5%. 6%, 7% 첨가한 BCP 배지를 사용하여 생육유무를 확인하였다.
Probiotics를 개발하기 위하여저온성 및 내염성의 특성을 갖는 균주를 김치로부터 분리하였다. 분리한 3종의 균주를 동정한 결과 MG19는 Lactobacillus brevis, MG89는 Enterococcus faecium.
0. pH 5.0, pH 6.8, pH 7.5로 보정한 BCP 배지를 사용한 평판 배양법으로 30°C에서 24시간 배양하여 집락 생성 유무를 확인하였다.내염성 시험은 NaCl을 각각 1%.
각 동결건조 보호제에 따른 유산균의 내산성을 시험하기 위해 인공위액 (Kobayashi®의 방법에 따라 HC1 을 사용하여 pH를 3.0으로 조정한 MRS broth에 pepsin 1.0% 첨가)을 37°C로 맞추어 30분 동안 방치한 후 멸균 생리식염수에 단계 희석하여 BCP 배지에도 말한 후 25°C 에서 48시간 배양한 다음 생균수를 측정하여 동결건조 후의 생존율을 측정하였다.
)에서 건조하였다. 건조된 균체는 분쇄하여 분말화시킨 다음 멸균 생리 식염수에 단계 희석하여 BCP 배지에도말한 후 2 5°C 에서 48시간 배양한 다음 생균수를 측정하여 동결건조 후의 생존율을 측정하였다.
본 연구에서는 생균제로서 이용 가능한 유산균을 김치로부터 분리하고 동정하였으며 특히 해수양식 어 사료 첨가제로 이용 가능한 균주를 선발하기 위해 저온성, 내염성 특성을 갖는 균주를 분리하였다. 또한 유산균을 생균제로서 이용할 수 있는 한 가지 방법으로서 동결건조 중 균의 생존율을 최대한 높일 수 있는 동결건조 보호제의 종류에 대해 시험하였다. .
분리균주를 6L 발효조(NBS Bioflo 2000)에서 최적생산배지 (whey 1.0%, peptone 1.0%, glucose 2.0%, yeast extract 0.5%, CaCO3 0.5%, K2HPO4 0.2%)를 사용하여 배양한 후 원심분리(CR-2, Hitachi, l, 0000x g) 를 10분간 하여 균체를 회수하였다. 회수된 균체는 동결건조 보호제와 혼합하여 균질화한 후-40 °C로 동결시킨 다음 동결건조기(Il Shin Lab.
생리 형태학적 특성 시험을 위해서는 Bergey's Ma nual of Systematic Bacteriology ⑶와 Mannual of Methods for General Bacteriology141 등의 세균 분류 동 정 지침서의 시험 항목을 기준으로 해서 각종 분류동정 시험방법에 따라 catalase;⑸ oxidase, 1G) gram171 염색의 유무, 당 이용성 시험을 하여 동정하였다..
서울, 경기지역에서. 수집한 5종의 숙성된 김치를 균질화하여 착즙한 다음 멸균된 생리식염수(0.9% NaCl)로 단계 희석하고 BCP plate count agar(pep- tone 0.5%, yeast extract 0.25%, glucose 0.1%, poly- sorbate80 0.1%, L-cystine 0.01%, bromocresol pur ple 0.005%, agar 1.5%. 이후 BCP 배지로 명명)에도 말하여 20°C에서 2일 간 배양 후 균체 주변을 노란색으로 변색시킨 균주 200여주를 1차 분리하였다. 분리된 균주를 5% NaCl 이 함유된 MRS (proteose peptone 1%, beef extract 1%, yeast extract 0.
온도별 균의 배양시험은 BCP 배지를 사용한 평판 배양법으로 10°C, 20°C, 25°C, 30°C. 37°C, 40'C에서 24시간 배양 후 집락의 생성유무를 측정하여 생육온도 범위를 확인하였다 pH에 따른 배양시험은 pH를 각 각 pH 3.
저온 숙성김치를 분리원으로 하여 BCP 배지에서 노란색 환을 형성하는 200여개의 단일colony를 1차 분리하였으며 1차 분리된 균주를 NaCl이 5.0% 함유된 MRS 배지를 사용하여 15°C에서 3일간 배양하여 생육한 균주를 2차 선별하여 최종적으로 MG19, MG89, MG208 등 3종의 균주를 최종 선발하였다.
대상 데이터
이후 BCP 배지로 명명)에도 말하여 20°C에서 2일 간 배양 후 균체 주변을 노란색으로 변색시킨 균주 200여주를 1차 분리하였다. 분리된 균주를 5% NaCl 이 함유된 MRS (proteose peptone 1%, beef extract 1%, yeast extract 0.5%, dextrose 2%, polysorbate80 0.1%, ammonium citrate 0.2%, sodium acetate 0.5%, MgSO4 0.01%, MnSOi 0.005%, K2HPO4 0.2%) 배지에 접종하여 15°C에서 3일 배양 후 생육한 균주를 최종 선별하여본시험의 공시 균주로 사용하였다.
성능/효과
MG19 분 리 균주의 특성을 조사한 결과 Gram 양성의 간균으로서 운동성이 없었으며 catalase와 oxidase 가 음성이었고 glucose로부터 gas를 생성하였으며 arginine으로부터 NH3를 생성하였다. 또한 15°C 및 5% NaCl 존재 하에서 생육하였으나 45°C에서는 생육하지 못하였다.
4%로 생존율이 가장 높았고 lactose와 mellezitoserk 1% 첨가된 시료에서도 60% 이상의 생존율을 나타내었다. MG208 은 fructoserk 1% 첨가된 시료가 74.7%로 가장 높았고 dextrose, cellebiose, galactose, glycerol, soluble starch, xylitol 등이 1% 첨가된 시료에서도 40% 이상의 우수한 생존율을 나타내었다. MG89의 경우는 mellezitose, glycogen, xylose, sorbose 외에는 시험 항 목 모두 40% 이상의 세포 생존율을 보였다.
일반적인 동결건조 보호제로 알려진 sodium gluta mate, polyethylene glycol, sodium ascorbate, peptone에 대해 유산균의 생존율을 시험한 결과 대체적으로 고른 생존율을 보였으며, 그 수치 또한 대체적으로 높게 나타났다. Polyethylene glycol 600은 세 가지 균에서 모두 60% 이상의 생존율을 보였으며, MG19에서 peptone을 제외하고는 모두 50% 이상의 생존율을 보였다. MG208은 40% 전후의 생존율로 다소 낮았으나 일반적인 당 및 당 알콜류와 비교했을 때 낮지 않은 생존율을 보였음을 알 수 있다.
본 시험에서는 유산균의 동결건조시당 및 당알콜류와 기타 이미 알려진 동결건조 보호제를 첨가했을 때 건조 후 생균수의 변화에 미치는 영향을 관찰하였다 당. 당알콜 등을 제외한 성분들에 대해서 유산균의 생존율을 시험한 결과 skim milk를 10% 첨가했을 때 MG19는 58.15%, MG208은 32.54%, MG89는 54.87% 의 생존율을 보였고, whole milk, casein은 보다 낮은 생존율을 보였다.
동결건조 보호제별로 건조된 시험균 분말로 인공위액에서의 생존율을 시험한 결과 MG19는 최고 79.26%에서 최저 23.73%까지의 생존율을 보였으며 MG208 은 최고 69.29%에서 최저 36.14%의 결과를 나타내었다. MG89는 skim milklO% 와s, kim milklO% 에 mellezitose 1%를 섞은 것에서 각각 73.
MG208은 Lactobacillus plantarum으로 확인되었다. 분리된 3종의 균주에 대한 동결건조 보호제 시험을 한 결과 MG19는 10% skim milk + 1% soluble starch에서 71.4%로 생존율이 가장 높았고 lactose와 mellezitose 에서도 60% 이상의 생존율을 나타냈다. MG89는 sol- bitol에서 76.
Probiotics를 개발하기 위하여저온성 및 내염성의 특성을 갖는 균주를 김치로부터 분리하였다. 분리한 3종의 균주를 동정한 결과 MG19는 Lactobacillus brevis, MG89는 Enterococcus faecium. MG208은 Lactobacillus plantarum으로 확인되었다.
MG89의 경우는 mellezitose, glycogen, xylose, sorbose 외에는 시험 항 목 모두 40% 이상의 세포 생존율을 보였다. 이상 세 가지 시험 유산균에서 당, 당알콜류가 동결건조 보호제로서의 역할을 하는데 눈에 띄는 유의성을 보이지는 않았으나, 균종에 따라서는 50% 이상 생존율에 차이를 나타내었다.
MG89, MG208 균주의 특성 및 탄소원 이용성에 대한 결과는 Table 1, 2에 나타내었다. 이상의 형태 및 생리화학적 특성을 토대로 하여 Bergeys Ma- nnual of Systematic Bacteriology의 분류기준 색인에 따라 고찰한 결과 MG19 균주는 Lactobacillus brevis 또는 그 유연균으로 동정되어 Lactobacillus brevis MG19로 명명 하였고, MG89는 Enterococcus faecium 또는 그 유연균으로 동정되어 Enterococcus faecium MG89로 명명하였다. 또한 MG208은 Lactobacillus plantarum 또는 그 유연균으로 동정되어 Lacto bacillus plantarum MG208로 명명하였다.
7%의 생존율을 보였다. 인공위액에서의 균생존율을 시험한 결과 lac tose, mellezitose, glycogen, mannose, xylose 등에서 70% 정도의 우수한 생존율을 보였다. 이러한 결과로부터 본 시험에 사용된 동결건조 보호제 가운데 몇몇은 유산균의 종류에 따라 다르지만 동결건조제품의 제조나 사료 첨가제로 제조시 산업적인 이용이 가능할 것으로 사료된다.
일반적인 동결건조 보호제로 알려진 sodium gluta mate, polyethylene glycol, sodium ascorbate, peptone에 대해 유산균의 생존율을 시험한 결과 대체적으로 고른 생존율을 보였으며, 그 수치 또한 대체적으로 높게 나타났다. Polyethylene glycol 600은 세 가지 균에서 모두 60% 이상의 생존율을 보였으며, MG19에서 peptone을 제외하고는 모두 50% 이상의 생존율을 보였다.
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