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제안 방법
- Aureobasidium pullulans SM-2001의 배양액에서 분리 , 정제한 6-1, 3/1, 6-글루칸의 분자량은 Gel permeation chromatog-raphy(Viscotek, USA)를 사용하여 측정하였으며 컬럼은 측정할 수 있는 분자량의 허용범위가 5X10"인 TSK PWXL6000 (Viscotek, USA)을 사용하였다. 시료를 100 ppm의 NaNeSigma Co.
- A. pullulans SM-2001 배양액에서 분리·정제한 고분자 중합체의 화학구조를 확인하기 위하여 8-1, 3- 결합의 커드란, B-1, 6- 결합의 푸슈투란을 표준 물질로 사용하여 핵자기공명분석기로 화학 구조를 분석하고 비교하였다(18-20).
- Aureobasidium pullulans SM-2001의 건조 균체량은 배양액을 원심분리한 후, 상등액을 제거하여 얻은 균체를 동일한 양의 증류수로 세척한 후, 8(rc에서 일정한 무게를 얻을 때까지 건조하여 균체량을 측정하였다.
- 본 연구는 a-1,4-1,6-글루칸인 풀루란을 생산하는 A. pullulans ATCC 42023(15)에 자외선을 처리하여 변이주를 얻은 후, 이변이 주들을 배양하여 배양액 중에 생산한 고분자 중합체를 분리하였다. 분리한 고분자 중합체를 화학적 처리 방법으로 정량분석을 하였고, 핵자기공명(NMR) 분석기를 사용하여 화학구조를 확인하였으며 , 크로마토그라피 (Gel permeation chromatography)를 사용하여 분자량을 측정하였다.
- pullulans ATCC 42023(15)에 자외선을 처리하여 변이주를 얻은 후, 이변이 주들을 배양하여 배양액 중에 생산한 고분자 중합체를 분리하였다. 분리한 고분자 중합체를 화학적 처리 방법으로 정량분석을 하였고, 핵자기공명(NMR) 분석기를 사용하여 화학구조를 확인하였으며 , 크로마토그라피 (Gel permeation chromatography)를 사용하여 분자량을 측정하였다. 핵자기공명 분석 스펙트럼을 비교하여 생산되는 고분자중합체가 6-1, 3/1, 6-글루칸임을 확인하였으며, 位1, 3/1, 6-글루칸의 생산에 영향을 주는 탄소원의 종류 및 농도 등과 같은 기초적인 연구를 수행하고, 미생물을 이용하여 저렴한 생산비로 8-1, 3/1, 6-글루칸을 대량 생산할 수 있는 방법을 개발하였다.
- (17). 분석은 시료 1.0 inL 어) 80%(w/v) 페놀용액 0.2 mL을 첨가한 후, 황산 5.0 m을 넣고 혼합한 다음 분광광도계(Helios B, ThermoSpectronic, England)이용하여 490 nm 의 파장에서 시료의 흡광도를 읽어 측정하였으며, 표준시료는 0.01-0.05 mg/mL 농도의 포도당으로 표준곡선을 작성하여 비교하였다.
- Refractive index detectorfViscotek, USA)를사용하였으며. 분자량이 5.80X103에서 1.06 X106 사이의 각기 다른 분자량을 갖는 6개의 풀루란(pulhilan, Sigma Co., USA) 을 사용하여 분자량의 표준곡선을 작성하였다.
- 이 용액을 8000xg의 범위에서 20분간 원심분리하고 상등액을 제거한 후, 침전물을 95% 에탄올로 2회 세척하였다. 세척한 침전물을 적당한 양의 증류수에 용해시킨 다음, 2일 동안에 5회 증류수를 바꾸어 주면서 투석하여 염성분을 포함한 저분자 물질을 제거하였다. 투석 믹"(Dialysis membrane, Spectrum Lab.
- USA)을 사용하였다. 시료를 100 ppm의 NaNeSigma Co., USA) 수용액에 0.1% 내외의 농도로 녹여 0.45 呻 membrain filter로 여과한 후, 100 *L를 inject하여 분석하였다. 이동상은 HPLC용 증류수를 사용하였으며, 유속은 0.
- 분리한 고분자 중합체를 화학적 처리 방법으로 정량분석을 하였고, 핵자기공명(NMR) 분석기를 사용하여 화학구조를 확인하였으며 , 크로마토그라피 (Gel permeation chromatography)를 사용하여 분자량을 측정하였다. 핵자기공명 분석 스펙트럼을 비교하여 생산되는 고분자중합체가 6-1, 3/1, 6-글루칸임을 확인하였으며, 位1, 3/1, 6-글루칸의 생산에 영향을 주는 탄소원의 종류 및 농도 등과 같은 기초적인 연구를 수행하고, 미생물을 이용하여 저렴한 생산비로 8-1, 3/1, 6-글루칸을 대량 생산할 수 있는 방법을 개발하였다.
- 침전된 각 시료를 건조시켜 5 mg 취하여 위와 동일한 방법으로 용해시켜 핵자기공명 분석기의 시료로 사용하였다. 핵자기공명 분석은 70笆에서 500MHz Varian Unity Plus Spectrometer(Varian Co., USA)를 통해 분석하였고, Trimethylsilane(TMS, Pierce Biotech., USA)를 표준물질로 사용하였다.
대상 데이터
- A. pullulans SM-2001에 의한 伊1, 3/1, 6-글루칸의 생산에 미치는 탄소원의 영향을 Table 1에 나타냈다 본 실험에 사용된 탄소 원은 포도당, 젖당, 만노오스(mannose), 설탕, 맥아당, 텍스트린(dextrin) 및 수용성 전분이었다. 포도당, 젖당 및 만노오스와 같은 단당류와 설탕 및 수용성 전분의 농도를 0.
- 명명하였다{12, 16). A. pullulans SM-200l의 배지는 5.0g/L의 K2HPO4, 1.0g/L의 NaCl, 0.2g/L의 MgSO4·7H2O, 0.6g/L의 (NH4)2SO4(Sigma Co., USA) 및 2.5g/L의 효모 추출물(yeast extract, Difco Lab., USA) 이 포함된 것을 사용하였으며, 탄소 원으로는 설탕을 20%(w/v) 농도로 증류수에 녹여 멸균한 후, 멸균된 배지에 무균적으로 0.5~2.0%(w/v)으로 혼합하여 사용하였다 07).
- Aureobasidum pullulans ATCC 42023에 자외선을 조사하여 얻은 변이주들 중에서 8-1, 3/1, 6-글루칸을 생산하여 체외로 분비하는 변이주를 획득하고, Aureobasidum pullulans SM-2001 로 명명하였다{12, 16). A.
- 본 연구는 2002년 부산. 울산지방중소기업청 산·학·연 공동기술개발 컨소시엄 사업의 지원으로 수행되었으며, 이에 감사드립니다
- 사용한 표준시료는 커드란(curdlan, Sigma Co., USA), 푸 슈트란 (pustulan, Calbiochem. Co., Germany)이며, 각각 8-1, 3-및 /3-1, 6- 결합의 포도당으로 구성된 다당류이다. 각 시료 및 A.
- , USA) 에 섞어서 하루 동안 70 ℃ 에 방치하여 용해시켰으며, 용해된 M 글루칸에 에탄올을 1 inL을 첨가하여 하루간 4C에서 방치한 후 원심분리를 하였다. 침전된 각 시료를 건조시켜 5 mg 취하여 위와 동일한 방법으로 용해시켜 핵자기공명 분석기의 시료로 사용하였다. 핵자기공명 분석은 70笆에서 500MHz Varian Unity Plus Spectrometer(Varian Co.
이론/모형
- Aureobasidium pullulans SM-2001의 배양에 의한 -1, 3/1, 6-글루칸의 생산성은 phenol-sulfuric acid method을 이용하여 분석하였다 (17). 분석은 시료 1.
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