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문제 정의
- 둥굴레의 BuOH 분획과 항산화제의 병용 투여에 인한 혈당 저하 및 지질과 산화 억제에 대한 효과가 보고13)되어 있으므로 본연구에서는 둥굴레의 생체막에 대한 지질과 산화 억제 효과 및 간 손상 시 억제 효과를 in 0汐0에서 비교평가하기 위해 각 분획에 대하여 정상적인 흰쥐와 CCI4를 투여하여 간 독성을 유발시킨 흰 쥐의 간균질액 S9 및 human erythrocyte ghost membrane을 이용한 thiobarbituric acid reactive substance (TBARS) 비색 정량법을 실시하였다.
제안 방법
- 5 m/와 50 mM BHT 10 B를 가해 95°C에서 15분간 가열하여 발색시킨 후, 4°C에서 원심분리(3500 rpm, 15 min)하여 상등액을 취하여 분광광도기(535nm)로 흡광도를 측정하였다. 1, 1, 3, 3- tetraethoxypropane를 MDA 표준시료로 하여 생성된 과산화지질 함량을 측정하였으며 지질과 산화 억제 효과를 비교검토하기위해서 t-butylhydroperoxide에 의해 유도되는 과산화지질의 생성을 50% 억제하는 데 필요한 시료의 농도(IC®)를 측정하였다.
- 0 n血와 50 mM BHT 30 山를 牛각 가하고 95°C에서 30분간 가열하여 발색시키고 원심분리⑶伽 rpm, 15 min)한 후 상둥액을 분광광도기(535 nm)로 흡광도를 측정하였다. 1, 1, 3, 3-tetraethoxypropane를 MDA 표준시료로 하여 생성된 과산화지질을 측정하였으며 각 시료의 지질과산화, I 대한 억제효과를 비교 검토하기 위해서 Fe+2/H2O2 system 에 의해 유도되는 과산화 지질의 생성을 50% 억제흐].는데 필요한, [료의 농도(ICQ를 측정하였다.
- 간장이 유독물질 (CCI4, benzonate, ethanol 등)로부터 손상을 입을 경우 생체막의 지질이 과산화되고, 효소계가 파괴됨으로서 혈액 및 조직 내 과산화지질의 양이 증가되며, 이 과산화지질과 활성산소의 연쇄반응으로 기 타 조직의 병변을 유발한다.19~22) 본 실험에서는 정상적인 흰쥐와 CCI4를 투여하여 간 독성를유발시킨 흰쥐의 간균질액 S9에 둥굴레의 각 분획을 농도별로가한 후 Fe+2/H2O2 첨가에 의해 지질과 산화를 촉진시켜 지질과산화에 미치는 영향을 TBARS assay로 측정하였으며 시료를 가하지 않은 대조군의 지질과 산화를 50% 억제하는 데 필요한 시료의 농도(ICgj)를 측정한 결과는 다음과 같다(Able I, n).
- 1 M phosphate buffer를 가하여 전체 부피가 1 mZ가 되도록 한 후 vortex mixer로 혼화하여진탕 수욕조에서 37°C로 20분간 배양하여 지질과 산화를 유발하였口. 6) 생성된 과산화지질에 TBA액 2.0 n血와 50 mM BHT 30 山를 牛각 가하고 95°C에서 30분간 가열하여 발색시키고 원심분리⑶伽 rpm, 15 min)한 후 상둥액을 분광광도기(535 nm)로 흡광도를 측정하였다. 1, 1, 3, 3-tetraethoxypropane를 MDA 표준시료로 하여 생성된 과산화지질을 측정하였으며 각 시료의 지질과산화, I 대한 억제효과를 비교 검토하기 위해서 Fe+2/H2O2 system 에 의해 유도되는 과산화 지질의 생성을 50% 억제흐].
- 본 실험에서는 human erythrocyte ghost membrane을 사용하여 둥굴레의 세포막의 지질과산화 반응에 미치는 영향 검토하고자 각각의 분획이 t-butylhydroperoxide에 의해 유도된 세포막의 지질과산화를 억제하는 정도를 TBARS 비색 정량법을 이용하여 측정하였으며, 시료를 가하지 않은 대조군의 과산화를 50% 억제하는 데 필요한 농도(ICs)를 측정하였다(Able HI). 둥굴레의 Et2O 엑스와 MeOH 엑스의 40%, 60%, 100% MeOH 분획은 human erythrocyte ghost membrane의 지질과산화를 농도의존적인 억제 효과를 보였으며, 특히 £泡0 엑스는 125 n咖의 저농도에서 양성대조물질로 사용한 ascorbic acid 에 필적할 만한 우수한 효과를 보였다.
대상 데이터
- 실험 재료 -둥굴레의 근경은 1999년 9월 전라북도 진안군에서직접 채집하여 기원을 확인한 후 음건세절하여 재료식물로 하였으며 확증표본(SMP 99020)은 숙명여자대학교 생약표본실에보관하였다.
데이터처리
- 통계학적 분석- 모든 실험 결과는 평균土표준오차로 나타냈으며 자료 분석은 Student's t-test를 이용하여 유의성을 검정하였다.
성능/효과
- CC14 투여로 인하여간 독성을 유발시킨 대조군의 간 균질액 S9의 지질과 산화 함량이 비처리 대조군에 비하여 15%가량 상승하였으며 둥굴레의 H2O 분획을 제외한 모든 분획이 650 卩以 ml의 저농도에서부터 정상적인 흰쥐와 간독성을 유발시킨 흰쥐에 대하여 농도의존적인 지질과 산화 억제 활성을 보였다. IC50 비교해 볼 때 활성이 우수한 Et2O 엑스와 40%, 60%, 100% MeOH 분획은 정상군에서 보다 CC14 투여군에서 더 작은 IC50 수치를 갖는 것으로 보아 정상적인 흰 쥐보다 간 독성을 유발시킨 흰 쥐에 대한 둥굴레의 더 우수한 지질과 산화 억제 효과를 확인하였다.
- IC50 비교해 볼 때 활성이 우수한 Et2O 엑스와 40%, 60%, 100% MeOH 분획은 정상군에서 보다 CC14 투여군에서 더 작은 IC50 수치를 갖는 것으로 보아 정상적인 흰 쥐보다 간 독성을 유발시킨 흰 쥐에 대한 둥굴레의 더 우수한 지질과 산화 억제 효과를 확인하였다. 또한 Et2O 엑스와 100% MeOH 분획은 양성대 조 물질로 사용한 silymarin(2 mg/mZ) 보다 더 강력한 지질 괴산화 억제 활성을 보였다.
- HI). 둥굴레의 Et2O 엑스와 MeOH 엑스의 40%, 60%, 100% MeOH 분획은 human erythrocyte ghost membrane의 지질과산화를 농도의존적인 억제 효과를 보였으며, 특히 £泡0 엑스는 125 n咖의 저농도에서 양성대조물질로 사용한 ascorbic acid 에 필적할 만한 우수한 효과를 보였다.
- 둥굴레의 생체막에 대한 지질과 산화 생성 저해 효과를 간 장애 보호 효과와 더불어 in 赧m에서 평가하기 위하여 정상적인 흰쥐와 CCI4를 투여하여 간 독성를 유발시킨 흰쥐의 간 균질액 S9에 듸해 TBARS 비색 정량법으로 평가한 결과, 둥굴레의 H2O 분획을 제외한 모든 분획이 정상적인 흰쥐와 간독성을 유발시킨 흰 쥐에 대하여 지질과 산화 억제 활성을 보였으며, 활성이 우수한 EtaO 엑스와 40%, 60%, 100% MeOH 분획은 정상적인 흰쥐 보다 간 독성을 유발시킨 흰쥐에 대해 더 우수한 지질 과산화 억게 효과를 나타내었다. 또한 human erythrocyte ghost membrane의 지질과 산화를 둥굴레 Et2O 엑스와 MeOH 엑스의 40%, 60%, 100% MeOH 분획이 효과적으로 억제하였으며, 특히 Et2O 엑스는 양성대조물질로 사용한 ascorbic acid에 비슷한 효과를 나타내었다.
- IC50 비교해 볼 때 활성이 우수한 Et2O 엑스와 40%, 60%, 100% MeOH 분획은 정상군에서 보다 CC14 투여군에서 더 작은 IC50 수치를 갖는 것으로 보아 정상적인 흰 쥐보다 간 독성을 유발시킨 흰 쥐에 대한 둥굴레의 더 우수한 지질과 산화 억제 효과를 확인하였다. 또한 Et2O 엑스와 100% MeOH 분획은 양성대 조 물질로 사용한 silymarin(2 mg/mZ) 보다 더 강력한 지질 괴산화 억제 활성을 보였다.
- 억게 효과를 나타내었다. 또한 human erythrocyte ghost membrane의 지질과 산화를 둥굴레 Et2O 엑스와 MeOH 엑스의 40%, 60%, 100% MeOH 분획이 효과적으로 억제하였으며, 특히 Et2O 엑스는 양성대조물질로 사용한 ascorbic acid에 비슷한 효과를 나타내었다. 이상으로 둥굴레의 지질과 산화물 생성 억제 효과를 확인하였으며 활성분획인 Et2O 엑스로부터의 활성 성분의 분리가 필요할 것으로 사료된다.
- 이상의 결과 둥굴레 H2O 분획을 제외한 각각의 엑스 및 분획이 흰쥐간 균질액 S9과 human erythrocyte ghost membrane 에 대한비효소적 지질과 산화 유도물질에 의해 유도된 지질과산화를 억제함을 확인하였으며 활성이 우수한 Et2O 엑스와 40%, 60%, 100% MeOH 분획은 CC14 유도 간 독성으로 인해 상승된지질과산화 수치를 더욱 효과적으로 저하시킴을 확인하였다. 과산화지질 생성 저해 활성이 미비한 MeOH 엑스의 90% 정도의대부분이 활성이 거의 없는 H2O 분획으로 분리제거되므로 나머지 툰획들의 활성이 상대적으로 높아지는 것으로 사료된다.
후속연구
- 규명해주는 결과라간주된다. 또한 둥굴레의 성분 연구에서 주로 근경의 Et2O 엑스로부터 steroidal saponin이 단리 보고 前 되어 있음을 기초로 하여 특히 우수한 지질과 산화 억제 효과를 보이는 Et2O 엑스에 대한 활성성분 연구를 비롯한 지속적인 견구가 필요할 것으로 사료된다.
- 또한 human erythrocyte ghost membrane의 지질과 산화를 둥굴레 Et2O 엑스와 MeOH 엑스의 40%, 60%, 100% MeOH 분획이 효과적으로 억제하였으며, 특히 Et2O 엑스는 양성대조물질로 사용한 ascorbic acid에 비슷한 효과를 나타내었다. 이상으로 둥굴레의 지질과 산화물 생성 억제 효과를 확인하였으며 활성분획인 Et2O 엑스로부터의 활성 성분의 분리가 필요할 것으로 사료된다.
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