고삼 추출물의 암세포에 대한 세포독성을 파악하기 위하여 고삼의 에틸 아세테이트 소분획으로 MTT 정량분석을 실시하였다. 고삼의 에틸 아세테이트 소분획은 암세포인 KB 세포, B16 세포, HeLa 세포와 MCF-7 세포에 대하여 $6.25{\mu}g/ml$ 농도부터 세포독성이 나타났으며, 12.5, 25, 50 및 $100{\mu}g/ml$까지 각각의 농도별로 세포독성은 증가하였고, 통계적으로 유의성이 인정되었다(p<0.05). KB 세포에 대한 $IC_{50}$는 $56.58{\mu}g/ml$, B16 세포에 대한 $IC_{50}$는 $65.43{\mu}g/ml$, HeLa 세포에 대한 $IC_{50}$는 $83.95{\mu}g/ml$, MCF-7 세포에 대한 $IC_{50}$는 $106.65{\mu}g/ml$로 나타났다. 고삼의 에틸 아세테이트 소분획은 암세포의 성장을 억제하였고, 세포독성의 강도는 B16 세포, HeLa세포, MCF-7 세포, KB 세포 순서로 높게 나타났다.
고삼 추출물의 암세포에 대한 세포독성을 파악하기 위하여 고삼의 에틸 아세테이트 소분획으로 MTT 정량분석을 실시하였다. 고삼의 에틸 아세테이트 소분획은 암세포인 KB 세포, B16 세포, HeLa 세포와 MCF-7 세포에 대하여 $6.25{\mu}g/ml$ 농도부터 세포독성이 나타났으며, 12.5, 25, 50 및 $100{\mu}g/ml$까지 각각의 농도별로 세포독성은 증가하였고, 통계적으로 유의성이 인정되었다(p<0.05). KB 세포에 대한 $IC_{50}$는 $56.58{\mu}g/ml$, B16 세포에 대한 $IC_{50}$는 $65.43{\mu}g/ml$, HeLa 세포에 대한 $IC_{50}$는 $83.95{\mu}g/ml$, MCF-7 세포에 대한 $IC_{50}$는 $106.65{\mu}g/ml$로 나타났다. 고삼의 에틸 아세테이트 소분획은 암세포의 성장을 억제하였고, 세포독성의 강도는 B16 세포, HeLa세포, MCF-7 세포, KB 세포 순서로 높게 나타났다.
In this study, we investigated the cytotoxicity of ethyl acetate subfraction of Sophora flavescens Ait.(EASS) on cancer cells using MTT quantitative analysis. The EASS was cytotoxicity from the concentration of 6.25 g/ml to KB, B16, HeLa, and MCF-7 cancer cells and the cytotoxicity was significant, ...
In this study, we investigated the cytotoxicity of ethyl acetate subfraction of Sophora flavescens Ait.(EASS) on cancer cells using MTT quantitative analysis. The EASS was cytotoxicity from the concentration of 6.25 g/ml to KB, B16, HeLa, and MCF-7 cancer cells and the cytotoxicity was significant, (p B16 > HeLa > MCF-7.
In this study, we investigated the cytotoxicity of ethyl acetate subfraction of Sophora flavescens Ait.(EASS) on cancer cells using MTT quantitative analysis. The EASS was cytotoxicity from the concentration of 6.25 g/ml to KB, B16, HeLa, and MCF-7 cancer cells and the cytotoxicity was significant, (p B16 > HeLa > MCF-7.
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문제 정의
본 연구에서는 고삼 에틸아세테이트 추출물을 이용하여 암연구의 검색법으로 많이 이용되고 있는 MTT 정량분석법으로 세포독성을 관찰하고자 한다.
제안 방법
53mM EDTA, Gibco, USA) 용액으로 처리하여 FBS(Fetal Bovine Serum, Gibco, USA)가 포함된 DMEM에서 배양하였으며, KB 세포는 RPMI 1640에 10% FBS와 Penicillin G(25unit/ml)을 첨가하여 배양하였다. 각 세포의 배양온도는 37℃, 습도 95%, 5%의 CO2 배양기에서 배양하였다.
고삼 추출물의 암세포에 대한 세포독성을 파악하기 위하여 고삼의 에틸아세테이트 소분획으로 MTT 정량분석을 실시하였다. 고삼의 에틸 아세테이트 소분획은 암세포인 KB 세포, B16 세포, HeLa 세포와 MCF-7 세포에 대하여 6.
세포가 배양된 각 well에 MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide, Sigma, USA)가 포함된 배양액을 well 당 1ml씩 넣어 4시간 동안 CO2 배양기에서 배양 후 반응을 정지시키기 위하여 배양액와 동량의 반응정지액(Isopropanol로 용해한 0.04N HCL)을 넣고, MTT formazan을 용해한 후 ELISA(Spectra Max 250, Molecula Devices)에 의한 흡수파장 570nm에서 흡광도를 측정하여 대조군과 비교 분석하였다.
세포활성을 측정하기 위하여 인체의 HeLa 세포, MCF-7 세포와 mouse의 B16 세포는 trypsin-EDTA(0.05% trypsin, 0.53mM EDTA, Gibco, USA) 용액으로 처리하여 FBS(Fetal Bovine Serum, Gibco, USA)가 포함된 DMEM에서 배양하였으며, KB 세포는 RPMI 1640에 10% FBS와 Penicillin G(25unit/ml)을 첨가하여 배양하였다. 각 세포의 배양온도는 37℃, 습도 95%, 5%의 CO2 배양기에서 배양하였다.
대상 데이터
3. 세포독성능 측정을 위한 세포주
세포독성능 측정을 위해 사용한 암세포는 인체의 구강유상피암세포(KB, ATCC OCL-17), 자궁경부암세포(HeLa, KCDL 1002), 유방암세포(MCF-7, KCLB 30022)와 mouse의 흑색종세포(B16, KCLB 8006)을 사용하였다.
이들 소분획 중에 이동상(H2O:CH3CN/1:3)의 조건으로 용리된 소분획을 실리카관 크로마토그라피법으로 4종류의 소분획을 얻었다. 이들 소분획은 MeOH:CHCL3, MEOH의 이동상으로 구성되었으며, 이동상의 조건이 1:10, 3:10, MeOH:CHCI3으로 용리된 양(275mg)을 본 실험에 이용하였다(Fig. 1).
데이터처리
05로 하였고, 통계분석은 SPSS Win을 사용하였다. IC50에 관한 통계처리는 Student's t-test를 이용하였고, p-value가 0.05이하일 경우 유의한 것으로 판정하였다.
1The values represent the meanstandard deviations for quadriplicates experiments. Means followed by the same letters are not significantly different at the 5% level by Duncan's multiple range test. F : F ratio, p : probability
실험결과의 통계처리는 각 세포에 대한 시료의 농도별 차이를 규명하기 위하여 일원분산분석(one-way ANOVA)을 시행하였다. 유의한 차이가 있을 때 Duncan 다중범위 검정으로 사후검정을 하였으며, 유의도 수준은 0.
실험결과의 통계처리는 각 세포에 대한 시료의 농도별 차이를 규명하기 위하여 일원분산분석(one-way ANOVA)을 시행하였다. 유의한 차이가 있을 때 Duncan 다중범위 검정으로 사후검정을 하였으며, 유의도 수준은 0.05로 하였고, 통계분석은 SPSS Win을 사용하였다. IC50에 관한 통계처리는 Student's t-test를 이용하였고, p-value가 0.
이론/모형
이동상의 조건이 60~90% ethyl acetate/hexane, 100% ethyl acetate, MeOH로 용리된 분획을 역상 크로마토그라피법으로 분리하여 6종류의 소분획을 얻었다. 이들 소분획 중에 이동상(H2O:CH3CN/1:3)의 조건으로 용리된 소분획을 실리카관 크로마토그라피법으로 4종류의 소분획을 얻었다. 이들 소분획은 MeOH:CHCL3, MEOH의 이동상으로 구성되었으며, 이동상의 조건이 1:10, 3:10, MeOH:CHCI3으로 용리된 양(275mg)을 본 실험에 이용하였다(Fig.
성능/효과
48%로 마우스 B16 세포의 성장을 억제하였다. 고삼 에틸 아세테이트 소분획의 모든 농도에서 B16 세포에 대한 유의한 세포독성이 나타났으며, 농도가 증가할수록 세포독성은 높게 나타났고, IC50은 65.43μg/ml 농도로 관찰되었다.
4%로 나타났다. 고삼 에틸 아세테이트 소분획의 모든 농도에서 HeLa 세포에 대한 유의한 세포독성이 나타났으며, 농도가 증가할수록 세포독성은 높게 나타났고, IC50은 83.95μg/ml 농도로 관찰되었다.
1%로 나타났다. 고삼 에틸 아세테이트 소분획의 모든 농도에서 KB 세포에 대하여 유의한 세포독성효과가 나타났으며, 농도가 증가할수록 인체 구강유상피암종 세포에 대한 세포독성은 높게 나타났고, IC50은 56.58μg/ml 농도로 관찰되었다.
65μg/ml로 나타났다. 고삼의 에틸 아세테이트 소분획은 암세포의 성장을 억제하였고, 세포독성의 강도는 B16 세포, HeLa 세포, MCF-7 세포, KB 세포 순서로 높게 나타났다.
고삼 추출물의 암세포에 대한 세포독성을 파악하기 위하여 고삼의 에틸아세테이트 소분획으로 MTT 정량분석을 실시하였다. 고삼의 에틸 아세테이트 소분획은 암세포인 KB 세포, B16 세포, HeLa 세포와 MCF-7 세포에 대하여 6.25μg/ml농도부터 세포독성이 나타났으며, 12.5, 25, 50 및 100μg/ml까지 각각의 농도별로 세포독성은 증가하였고, 통계적으로 유의성이 인정되었다(p<0.05). KB 세포에 대한 IC50은 56.
001). 농도별로 사후 검정한 결과, 고삼 에틸아세테이트 소분획의 농도가 6.25 μg/ml 농도까지 시료의 농도가 증가할수록 KB 세포의 성장억제효과가 높게 나타났고, 통계적으로 유의한 차이가 있었다(p<0.05). 시료의 농도가 100μg/ml에서는 KB 세포에 대한 세포독성이 가장 높게(76.
05). 농도별로 사후검정한 결과, 고삼 에틸 아세테이트 소분획의 농도가 6.25μg/ml 부터 MCF-7 세포의 성장을 억제하였으며, 100μg/ml 까지 농도가 증가할수록 세포의 성장억제효과가 나타났다. 시료의 농도가 100μg/ml에서는 MCF-7 세포에 대한 세포독성(41.
001). 농도별로 사후검정한 결과, 고삼 에틸 아세테이트 소분획의 농도가 6.25μg/ml 부터 B16 세포의 성장을 억제하였으며, 100μg/ml 농도까지 시료의 농도가 증가할수록 B16 세포의 성장억제효과가 나타났고, 유의한 차이가 있었다(p<0.05). 시료의 농도가 100μg/ml에서는 B16 세포에 대한 항암활성(69.
001). 농도별로 사후검정한 결과, 고삼 에틸아세테이트 소분획의 농도가 6.25μg/ml 부터 HeLa 세포의 성장을 억제하였으며, 100μg/ml 농도까지 시료의 농도가 증가할수록 세포의 성장억제효과가 나타났다. 시료의 농도가 100μg/ml에서는 HeLa 세포에 대한 세포독성(50.
1%) 나타났다. 시료를 0.0, 6.25, 12.5, 25, 50 및 100μg/ml 농도로 처리한 결과 KB 세포에 대한 생장율은 대조군과 비교할 때 비교율은 100.0, 86.5, 75.2, 71.4, 49.7 및 23.9%로 나타났다. 즉, 고삼 에틸 아세테이트 소분획의 KB 세포에 대한 세포성장 억제율은 시료농도 6.
1%)보다는 낮게 나타났다. 시료를 0.0, 6.25, 12.5, 25, 50 및 대조군 100μg/ml를 처리한 결과 B16 세포에 대한 성장율은 대조군과 비교할 때, 비교율은 각각 100.0, 95.4, 74.4, 61.0, 40.9 및 30.5%로 나타났다. 즉, 고삼 에틸 아세테이트 소분획의 B16 세포에 대한 세포독성은 시료 농도 6.
시료를 0.0, 6.25, 12.5, 25, 50 및 100μg/ml의 농도로 처리한 결과 HeLa 세포에 대한 성장율은 대조군과 비교할 때, 비교율은 각각 100.0, 88.9, 86.6, 72.6, 56.1 및 49.6%로 나타났다. 즉, 고삼 에틸 아세테이트 소분획의 HeLa 세포에 대한 세포성장 억제율은 시료 농도 6.
4%)보다 낮게 나타났다. 시료를 6.25, 12.5, 25, 50 및 100μg/ml의 농도로 처리한 결과 MCF-7 세포에 대한 성장율은 대조군과 비교할 때, 비교율은 각각 93.1, 89.0, 83.9, 64.2 및 58.7%로 나타났다. 즉, 고삼 에틸 아세테이트 소분획의 MCF-7에 대한 세포성장 억제율은 농도 6.
05). 시료의 농도가 100μg/ml에서는 KB 세포에 대한 세포독성이 가장 높게(76.1%) 나타났다. 시료를 0.
25μg/ml 부터 MCF-7 세포의 성장을 억제하였으며, 100μg/ml 까지 농도가 증가할수록 세포의 성장억제효과가 나타났다. 시료의 농도가 100μg/ml에서는 MCF-7 세포에 대한 세포독성(41.3%)이 가장 높게 나타났지만, 인체 KB 세포에 대한 세포독성(76.1%), 마우스 B16 세포의 세포독성(69.5%), 인체 HeLa 세포에 대한 세포독성(50.4%)보다 낮게 나타났다. 시료를 6.
고삼 에틸 아세테이트 소분획을 KB 세포에 대한 세포독성을 파악하기 위한 MTT 정량분석법에 의한 실험결과는 Table 1과 같다. 실험 결과, 모든 농도에서 통계적으로 유의한 차이가 나타났다(p<0.001). 농도별로 사후 검정한 결과, 고삼 에틸아세테이트 소분획의 농도가 6.
고삼 에틸 아세테이트 소분획을 KB 세포에 대한 세포독성을 파악하기 위한 MTT 정량분석법에 의한 실험결과는 Table 1과 같다. 실험 결과, 모든 농도에서 통계적으로 유의한 차이가 나타났다(p<0.001). 농도별로 사후 검정한 결과, 고삼 에틸아세테이트 소분획의 농도가 6.
고삼 에틸 아세테이트 소분획의 MCF-7 세포에 대한 세포 독성을 파악하기 위한 MTT 정량분석법에 의한 실험결과는 Table 4와 같다. 실험결과, 모든 농도에서 통계적으로 유의한 차이가 나타났다(p<0.05). 농도별로 사후검정한 결과, 고삼 에틸 아세테이트 소분획의 농도가 6.
5%로 나타났다. 즉, 고삼 에틸 아세테이트 소분획의 B16 세포에 대한 세포독성은 시료 농도 6.25, 12.5, 25, 50 및 100μg/ml에서 각각 4.7, 25.6, 39.0, 59.1 및 69.48%로 마우스 B16 세포의 성장을 억제하였다. 고삼 에틸 아세테이트 소분획의 모든 농도에서 B16 세포에 대한 유의한 세포독성이 나타났으며, 농도가 증가할수록 세포독성은 높게 나타났고, IC50은 65.
6%로 나타났다. 즉, 고삼 에틸 아세테이트 소분획의 HeLa 세포에 대한 세포성장 억제율은 시료 농도 6.25, 12.5, 25, 50 및 100μg/ml을 첨가시 각각 11.1, 13.4, 27.4, 43.9 및 50.4%로 나타났다. 고삼 에틸 아세테이트 소분획의 모든 농도에서 HeLa 세포에 대한 유의한 세포독성이 나타났으며, 농도가 증가할수록 세포독성은 높게 나타났고, IC50은 83.
9%로 나타났다. 즉, 고삼 에틸 아세테이트 소분획의 KB 세포에 대한 세포성장 억제율은 시료농도 6.25, 12.5, 25, 50 및 100μg/ml 에서 각각 13.5, 24.8, 28.6, 50.3 및 76.1%로 나타났다. 고삼 에틸 아세테이트 소분획의 모든 농도에서 KB 세포에 대하여 유의한 세포독성효과가 나타났으며, 농도가 증가할수록 인체 구강유상피암종 세포에 대한 세포독성은 높게 나타났고, IC50은 56.
7%로 나타났다. 즉, 고삼 에틸 아세테이트 소분획의 MCF-7에 대한 세포성장 억제율은 농도 6.25, 12.5, 25, 50 및 100μg/ml에서 각각 6.9, 11.0, 16.1, 35.8 및 41.3%로 MCF-7 세포의 성장을 억제하였고, 고삼 에틸 아세테이트 소분획의 모든 농도에서 MCF-7 세포에 대한 유의한 세포독성이 나타났으며, 농도가 증가할수록 세포독성이 높게 나타났고, IC50은 106.6μg/ml 농도로 관찰되었다.
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