항산화 활성이 우수한 붉나무 수피 추출물을 대상으로 항산화 활성을 팜유와 돈지를 기질로 하여 Rancimat 방법으로 확인하였고, 클로로포름 추출물을 column chromatography, thin layer chromatography 및 NMR 등을 통하여 물질을 분리, 동정하였다. 또한 이들 분리물을 각종 유지에 첨가하여 상업용 항산화제와 그 활성을 비교하였다. 붉나무 수피로 부터 80% 메탄올을 추출용매로 사용하여 얻은 추출물은 높은 항산화 활성과 추출 수율이 높았고 용매 분획시 클로로포름 분획물이 돈지와 팜유에서 가장 높은 항산화 활성을 나타내었다. 붉나무 수피에서 항산화 활성을 나타내는 물질로 회분 R18-9-3-2-4-2가 단일물질로 분리되었고 이 물질의 AI는 돈지와 팜유에서 각각 13.01과 3.06으로 매우 높은 항산화 활성을 나타내었다. 단일물질로 분리된 R18-9-3-2-4-2는 $^1H-NMR,\;^{13}C-NMR$에 의해 methyl gallate로 동정되었으며, $^1H-NMR,\;^{13}C-NMR$ 분석 결과 methyl gallate 표준물질과 일치하는 것을 확인하였다. 획분 R18-9-3-2-4-2과 methyl gallate(authentic)는 ${\alpha}-,\;{\delta}-tocopherol$, BHA, BHT보다 돈지와 팜유에서 강한 항산화 활성을 나타내었다. 이상의 결과로부터 붉나무 수피 에탄올 추출물의 클로로포름 분획물에서 분리한 물질은 현재 항산화제로 사용 중인 BHA, BHT, tocopherol 보다 그 항산화 효과가 우수하여 새로운 천연 항산화제로서의 가능성이 있다고 평가되었다.
항산화 활성이 우수한 붉나무 수피 추출물을 대상으로 항산화 활성을 팜유와 돈지를 기질로 하여 Rancimat 방법으로 확인하였고, 클로로포름 추출물을 column chromatography, thin layer chromatography 및 NMR 등을 통하여 물질을 분리, 동정하였다. 또한 이들 분리물을 각종 유지에 첨가하여 상업용 항산화제와 그 활성을 비교하였다. 붉나무 수피로 부터 80% 메탄올을 추출용매로 사용하여 얻은 추출물은 높은 항산화 활성과 추출 수율이 높았고 용매 분획시 클로로포름 분획물이 돈지와 팜유에서 가장 높은 항산화 활성을 나타내었다. 붉나무 수피에서 항산화 활성을 나타내는 물질로 회분 R18-9-3-2-4-2가 단일물질로 분리되었고 이 물질의 AI는 돈지와 팜유에서 각각 13.01과 3.06으로 매우 높은 항산화 활성을 나타내었다. 단일물질로 분리된 R18-9-3-2-4-2는 $^1H-NMR,\;^{13}C-NMR$에 의해 methyl gallate로 동정되었으며, $^1H-NMR,\;^{13}C-NMR$ 분석 결과 methyl gallate 표준물질과 일치하는 것을 확인하였다. 획분 R18-9-3-2-4-2과 methyl gallate(authentic)는 ${\alpha}-,\;{\delta}-tocopherol$, BHA, BHT보다 돈지와 팜유에서 강한 항산화 활성을 나타내었다. 이상의 결과로부터 붉나무 수피 에탄올 추출물의 클로로포름 분획물에서 분리한 물질은 현재 항산화제로 사용 중인 BHA, BHT, tocopherol 보다 그 항산화 효과가 우수하여 새로운 천연 항산화제로서의 가능성이 있다고 평가되었다.
The crude extracts from Rhus javanica Linne showed comparatively strong antioxidative activity in test oils. Antioxidative components were isolated and identified by column chromatography, thin layer chromatography, UV, and NMR. These antioxidative components were added to several oils to compare an...
The crude extracts from Rhus javanica Linne showed comparatively strong antioxidative activity in test oils. Antioxidative components were isolated and identified by column chromatography, thin layer chromatography, UV, and NMR. These antioxidative components were added to several oils to compare antioxidative activity with several commercial antioxidants, such as BHA, BHT, and tocopherol. After the sixth column chromatography, one fraction (R-18-9-3-2-4-2) was separated from chloroform layer of Rhus javanica Linne. The R-18-9-3-2-4-2 fraction was identified as methyl gallate by $^1H-NMR$ and $^{13}C-NMR$ and confirmed with methyl gallate standard as authentic. The R18-9-3-2-4-2 fraction from chloroform layer of Rhus javanica Linne showed stronger activity than that of the ${\alpha}-,\;{\delta}-tocopherol$, BHT, and BHA at the same concentration.
The crude extracts from Rhus javanica Linne showed comparatively strong antioxidative activity in test oils. Antioxidative components were isolated and identified by column chromatography, thin layer chromatography, UV, and NMR. These antioxidative components were added to several oils to compare antioxidative activity with several commercial antioxidants, such as BHA, BHT, and tocopherol. After the sixth column chromatography, one fraction (R-18-9-3-2-4-2) was separated from chloroform layer of Rhus javanica Linne. The R-18-9-3-2-4-2 fraction was identified as methyl gallate by $^1H-NMR$ and $^{13}C-NMR$ and confirmed with methyl gallate standard as authentic. The R18-9-3-2-4-2 fraction from chloroform layer of Rhus javanica Linne showed stronger activity than that of the ${\alpha}-,\;{\delta}-tocopherol$, BHT, and BHA at the same concentration.
* AI 자동 식별 결과로 적합하지 않은 문장이 있을 수 있으니, 이용에 유의하시기 바랍니다.
가설 설정
2)Values are mean standard deviation of duplicate.
제안 방법
94로 항산화 활성이 가장 높았다. 5번째 단계에서는 시료의 양이 적어 preparative thin layer chromatography(silica gel 60,2 mm)하여 4개의 소획분을 얻었으며, 이 중에서 돈지와 팜유에서 항산화 활성이 각각 10.5와 2.1&로 가장 높았던 R18-9-3-2-4 획분(0.24 g)을 6차 분리용 시료로 선정하였다. R18-9-3-2-4 및 R18-9-3-2-4-2 획분은 R18-9-3-2 획분에 비해 항산화 활성이 감소되었는데, 이는 섬바디(31)와 예덕나무 추출물(32)의 항균활성 시험에서 단일 물질로 분리될수록 여러 물질이 복합적으로 작용하는 상승효과가 제거됨으로써 항균 활성이 감소하였다는 보고와 유사한 결과를 나타내었다.
Silica gel column chromatography하여 분리된 각 획분은 silica gel 60 Fa4 TLC plate 와 RP 18 F254s TLC plate에 spotting한 후 column chromatography에서 사용한 용출용매와 같은 용매 계로 전개하여 UV(254nm, 365 nm) 흡수양상 및 20% 황산용액을 분무하여 발색시 나타나는 spot의 Rf값에 따라 column chromatography 용출물을 분취하여 항산화 활성을 측정하였다.
3), 그 중에 2개의 signal은 각각 2개씩이 겹쳐진 것으로 추정되었다. 각 signal의 다중도는 DEPT 135를 측정하여 결정하였다. 6169.
각 용매별 추출물의 항산화 정도를 측정하기 위해 Rancimat 679(Metrohm AG, CH-9100 Herisau, Switzerland)를 사용하였다. 즉 반응용기에 해당 기질유지 2.
대상 식물에 따라 추출용매에 따른 항산화 효과는 상당히 차이가 있는 것으로 알려져 있으며 많은 식물성 항산화제 분리 실험에서 메탄올을 사용하고 있는데(29) 본 실험도 수율과 항산화 효과가 높았기 때문에 이후 실험에서는 붉나무의 추출용매로 80% 메탄올을 사용하였다.
따라서 붉나무에서 단일물질로 분리된 항산화 활성을 나타내는 물질은 methyl gallate로 동정되었고 이를 확정하기 위하여 methyl gallate(authentic)를 가지고 1H-NMR 및 13C- NMR 분석을 하였다(Fig. 3). 자료를 분석한 결과 methyl gallate(authentic)의 peak와 붉나무에서 단일 물질로 분리된 R18-9-3-2-4-2와 peak가 일치함을 알 수 있었으며 R18-9-3-2-4-2는 methyl gallate로 최종 확정되었다.
layer chromatography 및 NMR 등을 통하여 물질을 분리, 동정하였다. 또한 이들 분리물을 각종 유지에 첨가하여 상업용 항산화제와 그 활성을 비교하였다. 붉나무 수피로 부터 80% 메탄올을 추출용매로 사용하여 얻은 추출물은 높은 항산화 활성과 추출 수율이 높았고 용매 분획시 클로로포름분획물이 돈지와 팜유에서 가장 높은 항산화 활성을 나타내었다.
본 실험에서는 여러 가지 효능과 함께 민간에서도 널리 식용하고 있는 붉나무로부터 항산화 활성을 갖는 물질을 용매분획, column chromatography, thin layer chromatography(TLC) 등을 통하여 활성물질을 분리하였다. 분리된 단일 물질에 대하여 UV spectrophotometer 및 NMR 등의 각 자료를 해석하여 활성 원인물질의 구조를 동정하였으며 다른 상업용 항산화제와 항산화 효과를 비교하였다.
있는 붉나무로부터 항산화 활성을 갖는 물질을 용매분획, column chromatography, thin layer chromatography(TLC) 등을 통하여 활성물질을 분리하였다. 분리된 단일 물질에 대하여 UV spectrophotometer 및 NMR 등의 각 자료를 해석하여 활성 원인물질의 구조를 동정하였으며 다른 상업용 항산화제와 항산화 효과를 비교하였다.
붉나무 수피 80% 메탄올 추출물의 항산화 활성이 확인된 클로로포름 분획물로부터 항산화 활성물질을 분리하기 위하여 먼저 TLC상에서 분리능이 우수한 용매조건을 탐색한 후에 선택된 용매조건에서 단계별로 silica gel column chroma-tography를 실시하여 분획물을 얻었다. 진공건조 후 메탄올에 용해시킨 획분을 1000 ppm 수준으로 돈지와 팜유에 첨가하여 Rancimat 방법으로 각 획분별 항산화 효과를 비교한 결과는 Table 3과 같다.
붉나무 수피에서 분리 동정된 R18-9-3-2-4-2 획분과 methyl gallate 표준물질을 가지고 200ppm 농도(27)에서 다른 상업용 항산화제와 비교 실험을 하였다. 비교 실험은 Racimat method(8,22,23)를 사용하여 항산화활성을 비교하여 AI로 표시하였으며, 사용된 항산화제는 천연 항산화제로 a- 및 δ-tocopherol을, 합성 항산화제로는 BHA와 BHT를 사용하였다.
순상 TLC plate(silica gel 60 F254)에서는 분리되지 않았던 R18-9-3-2-4 획분을 역상 TLC plate(RP 18 Fg)를 이용하여 분리능이 우수한 용매계(메탄올 : 물 = 1.5 : 8.5, v/v)로 흡착된역상 silica gel(RP 18 F254s, 25-40 |im) column chromatog-raphy를 실시하였다. 그 曷과 총 6개의 소획분들 중 R18-9-3-2-4-2 획분(0.
1, v/v/v) 용매계로 용출시켜서 15개의 소획분(R18- JR18-15)을 얻었다. 이 중 항산화 활성이 높았던 R18-9-R18-10을 합친 R18-9(2.01 g)를 3차 column(200 g, 4.5×20 ㎝)에서 헥산 : 클로로포름 : 메탄올(2 v/v/v) 용매 계로 메탄올의 비율을 증가시키면서 용출시켰다. 총 7개의 소획분중 항산화 활성이 우수한 R18-9-3(0.
이들을 수욕상(78±2℃에서 3시간 가열, 추출 후여과(Whatman No. 2)하고, 그 여액을 45℃에서 감압농축기 (EYELA, Japan)로 감압농축 하였다. 에탄올 추출물 중의 가용성 고형분 함량은 농축물 1mL를 105℃에서 건조하고, 증발 잔사의 양으로부터 계산하였다.
1℃의 alumi-num heating block상에서 시간당 20 L의 공기를 주입하여 산화시켰다. 이때 발생하는 휘발성 산화생성물을 70mL의 증류수가 들어있는 absorption vessel에 이행시켜 double plati num foil electrode와 recorder에 의해 conductivity 정도를 측정, 자동 기록된 chart에서 반응 개시의 conductivity로부터 conductivity가 급격히 증가되는 시점까지를 유도기간(induction period, IP)으로 계산하여 각 추출물의 항산화 정도를 측정하였고, 동시에 추출물을 첨가하지 않은 것을 대조구로 하여 항산화 활성을 비교, antioxidant index(AI)로 표시하였다.
각 용매별 추출물의 항산화 정도를 측정하기 위해 Rancimat 679(Metrohm AG, CH-9100 Herisau, Switzerland)를 사용하였다. 즉 반응용기에 해당 기질유지 2.5 g을 취한 후, 조 추출물을 각각 1,000 ppm씩 첨가한 후 voltex mixer를 사용하여 기질유지에 충분히 분산(3 min)시켜 120±0.1℃의 alumi-num heating block상에서 시간당 20 L의 공기를 주입하여 산화시켰다. 이때 발생하는 휘발성 산화생성물을 70mL의 증류수가 들어있는 absorption vessel에 이행시켜 double plati num foil electrode와 recorder에 의해 conductivity 정도를 측정, 자동 기록된 chart에서 반응 개시의 conductivity로부터 conductivity가 급격히 증가되는 시점까지를 유도기간(induction period, IP)으로 계산하여 각 추출물의 항산화 정도를 측정하였고, 동시에 추출물을 첨가하지 않은 것을 대조구로 하여 항산화 활성을 비교, antioxidant index(AI)로 표시하였다.
1과 같이 분획하였다. 즉 용매의 극성 정도에 따라 4배량의 헥산을 가하고 소량의 증류수를 첨가, 진탕(20 min, 250rpm)하여 헥산 분획물을 얻고(3회 반복), 물층을 다시 동일한 방법으로 클로로포름, 에틸아세테이트 및 부탄올을 순차로 가하여 클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄올 분획물을 각각 얻었다. 각 분획물은 감압농축기와 진공건조기(New Power Engineering Co.
즉, 클로로포름 분획물(33.78 g)을 두 번에 나누어 silica gel(500 g, 70-230 mesh, Merck)이 헥산 : 클로로포름 : 에틸아세테이트(5:9:1, v/v/v) 용매로 현탁, 충전된 column(5.5×40 ㎝)에 흡착시킨 후 극성을 높이면서 용출시키고 TLC로 확인하여 23개의 소획분(R1~R23)을 얻었다. 이 중에서 항산화 활성이 우수한 R18~R20을 합친 획분 R18(4.
5×20 ㎝)에서 헥산 : 클로로포름 : 메탄올(2 v/v/v) 용매 계로 메탄올의 비율을 증가시키면서 용출시켰다. 총 7개의 소획분중 항산화 활성이 우수한 R18-9-3(0.74 g) 획분을 4차 column (200 g, 4.5X18 ㎝)에서 헥산 : 클로로포름 : 메탄올 : 초산 (2: 15:2:0.1, v/v/v/v) 용매계로 용출시켜 4개의 획분을 얻었고, 활성이 큰 R18-9-3-2(0.52 g) 획분을 헥산 : 클로로포름 : 메탄올 : 초산(2 : 16 : 2.5 : 0.1, v/v/v/v) 용매계로 preparative TLC(silica gel 60, 2 mm)하여 4개의 소획분을 얻었다. 이 중 항산화 효과가 인정된 R18-9-3-2-4(0.
5, v/V)을 용매계로 하여 극성을 낮추며(역상) 용출시켰다. 최종적으로 항산화 활성이 크고 정제도가 우수한 R18-9-3-2-4-2(0.13 g) 소획분을 취하여 단일물질로 하여 화학구조를 동정하였다.
항산화 활성이 우수한 붉나무 수피 추출물을 대상으로 항산화 활성을 팜유와 돈지를 기질로 하여 Rancimat 방법으로 확인하였고, 클로로포름 추출물을 column chromatography, thin layer chromatography 및 NMR 등을 통하여 물질을 분리, 동정하였다. 또한 이들 분리물을 각종 유지에 첨가하여 상업용 항산화제와 그 활성을 비교하였다.
대상 데이터
, Kyung Gi, Korea) 1급을 증류수로 희석한 80% 메탄올을 사용하였다. (X-, 8-tocopherol, tert-butylated hydroxyanisole(BHA), tert-butylated hydroxytoluene(BHT)은 Sigma사(St. Louis, MO, USA) 제품, methyl gallate는 Aldrich사(Milwau kee, WI, USA) 제품, TLC plate(silica gel 60 F254, RP 18 F254s), PTLC plate(silica gel 60 F254, 2 ㎜), silica gel 60(70-230 mesh), 및 silica gel RP 18(25~40)㎛)은 Merck사(Darmstadt, Germany) 제품을, 그리고 분석용 용매 및 기타 시약은 특급 또는 1급품을 사용하였다.
74g)을 2차 분리용 시료로 선정하였다. R18 획분을 2차 column chromatography한 결과 14개의 소획분(R18-1~R18-14)을 얻었으며, 이 중 R18-9 획분의 AI가 돈지와 팜유에서 각각 13.07과 3.35, 그리고 R18-10 획분이 14.41 과 3.02로 다른 획분보다 우수한 항산화 활성을 나타내었고 두 획분을 R18-9(2.01 g)로 합하여 3차 분리용 시료로 사용하였다. 3차 column chromatography 결과 7개의 소획분(R18-9-l~R18-9-7)을 얻었고, 이중 R18-9-3 획분(0.
46으로 우수한 항산화 활성을 나타내었다. R18~R20까지의 획분이 모두 연속적으로 돈지와 팜유에서 우수한 항산화 활성을 나타내어 이들 획분을 합친 R18(4.74g)을 2차 분리용 시료로 선정하였다. R18 획분을 2차 column chromatography한 결과 14개의 소획분(R18-1~R18-14)을 얻었으며, 이 중 R18-9 획분의 AI가 돈지와 팜유에서 각각 13.
붉나무는 전북 부안군 소재 전북대학교 연습림에서 2000년 6월경에 채취하여 껍질을 벗긴 수피를 음건한 후 마쇄하여 사용하였다. 항산화 실험에 사용한 유지는 항산화제가 첨가되지 않은 팜유와 돈지를 (주)농심에서 제공받아 냉동(-60 ℃) 보관하면서 사용하였다.
R18-9-3-2-4-2는 UV 365nm에서 암적색을, 254nm에서 갈색을, 20% 황산용액으로 발색시 자주색을 나타내었다. 붉나무의 클로로포름 층에서 항산화 활성을 나타내는 단일 물질로 분리된 R18-9-3-2-4-2 획분을 구조 동정하기 위하여 사용하였다.
순수 분리된 물질의 구조동정을 위하여 Electron Impact/Mass(ZEOL JMS-AX505WA, Japan), E-NMR(400 ㎒, XEOL JNM-LA400, Japan), 13C-NMR(100MHz, XEOL JNM-LA400, Japan)을 사용하였다.
사용하였다. 항산화 실험에 사용한 유지는 항산화제가 첨가되지 않은 팜유와 돈지를 (주)농심에서 제공받아 냉동(-60 ℃) 보관하면서 사용하였다.
이론/모형
비교 실험을 하였다. 비교 실험은 Racimat method(8,22,23)를 사용하여 항산화활성을 비교하여 AI로 표시하였으며, 사용된 항산화제는 천연 항산화제로 a- 및 δ-tocopherol을, 합성 항산화제로는 BHA와 BHT를 사용하였다.
실시하여 분획물을 얻었다. 진공건조 후 메탄올에 용해시킨 획분을 1000 ppm 수준으로 돈지와 팜유에 첨가하여 Rancimat 방법으로 각 획분별 항산화 효과를 비교한 결과는 Table 3과 같다.
성능/효과
01 g)로 합하여 3차 분리용 시료로 사용하였다. 3차 column chromatography 결과 7개의 소획분(R18-9-l~R18-9-7)을 얻었고, 이중 R18-9-3 획분(0.74 g)이 돈지와 팜유에서 AI가 14.31과 3.20으로 가장 높았다. 4차 column chromatography 결과 4개의 소획분(R18-9-3-l~R18-9-3-4)으로 분리하였으며.
4차 column chromatography 결과 4개의 소획분(R18-9-3-l~R18-9-3-4)으로 분리하였으며. R-18-9-3-2 획분(0.52 의 AI가 돈지와 팜유에서 각각 14.36과 3.94로 항산화 활성이 가장 높았다. 5번째 단계에서는 시료의 양이 적어 preparative thin layer chromatography(silica gel 60,2 mm)하여 4개의 소획분을 얻었으며, 이 중에서 돈지와 팜유에서 항산화 활성이 각각 10.
Table 1에서 보면 75% 에탄올, 80% 메탄올, 95% 메탄올을 추출용매로 사용하였을 때 수율이 각각 12.30%, 10.50%, 15.60%로 모두 높았으며, 80% 메탄올을 추출용매로 사용하였을 때 AI가 돈지와 팜유에서 각각 7.49 및 2.13으로 다른용매를 사용하였을 때 보다 더 높았다. 이 결과는 95% 메탄올을 붉나무의 추출용매로 사용하였을 때 수율이 14.
Table 2와 같다. Table 2에서 보면 붉나무의 각 용매별 분획물의 항산화효과는 두 유지에서 모두 클로로포름 > 에틸아세테이트 >물 > 헥산 > 부탄올 순으로, 클로로포름 분획물의 AI가 돈지와 팜유에서 각각 9.61, 2.80으로 가장 높았다. 이 결과는 Choi 등30)이 보고한 붉나무의 항산화 활성이 높은 분획이 에틸아세테이트 > 클로로포름 >물 >부탄올 순이라는 결과와는 차이가 있었다.
Table 3에서 보면 첫 번째 column chromatography에서 돈지에 대하여 AI 10 이상의 활성을 나타내는 획분은 3개(R18~R20)로 확인되었고(다른 결과는 나타내지 않음), 이들 획분의 AI는 각각 12.73, 11.38, 10.59로서 클로로포름 분획물 1000 ppm을 첨가하였을 때 (AI 9.61)보다 더 높은 항산화 활성을 나타내었다. 팜유에서도 마찬가지로 이들 획분의 AI는 각각 3.
03에서 6개에 해당하는 signal이 관측되어 벤젠고리가 존재하는 것을 알 수 있었다. 각 signal의 다중도로부터 4 치환 benzene인 것을 알 수 있었으며, 또한 chemical shift로부터 3개는 산소가 결합하고 있고 8146.44 (X2), 8139.71 1개는 다른 탄소가 결합하고 있는 것으로 추정되었다. 한편852.
5, v/v)로 흡착된역상 silica gel(RP 18 F254s, 25-40 |im) column chromatog-raphy를 실시하였다. 그 曷과 총 6개의 소획분들 중 R18-9-3-2-4-2 획분(0.13g)이 돈지와 팜유에서 AI가 각각 13.04, 3.06으로 항산화 활성이 가장 우수하였고, TLC를 통하여 단일 spo&로 확인되었다. R18-9-3-2-4-2는 UV 365nm에서 암적색을, 254nm에서 갈색을, 20% 황산용액으로 발색시 자주색을 나타내었다.
이 결과는 Choi 등30)이 보고한 붉나무의 항산화 활성이 높은 분획이 에틸아세테이트 > 클로로포름 >물 >부탄올 순이라는 결과와는 차이가 있었다. 그러나 그 차이는 미미하였으며 본 실험에서 클로로포름과 에틸아세테이트 분획물의 AI가 돈지에서 각각 9.61, 4.74로 산화지연 효과가 인정되었고 팜유에서도 비슷한 경향을 나타내어 두 분획물 모두 항산화 활성을 나타내었다. 또한 붉나무의 조 추출물(80% 메탄올 추출물)보다 분획하였을 때 더 항산화 활성이 높아짐을 확인할 수 있었다.
06으로 매우 높은 항산화 활성을 나타내었다. 단일물질로 분리된 R18-9-3-2-4-2는 1H- NMR, bc-NMR에 의해 methyl gallate로 동정 되었으며, 1H- NMR, 13C-NMR 분석 결과 methyl gallate 표준물질과 일치하는 것을 확인하였다. 획분 R18-9-3-2-4-2과 methyl gallate(authentic)는 a-, 5-tocopherol, BHA, BHT보다 돈지와 팜유에서 강한 항산화 활성을 나타내었다.
74로 산화지연 효과가 인정되었고 팜유에서도 비슷한 경향을 나타내어 두 분획물 모두 항산화 활성을 나타내었다. 또한 붉나무의 조 추출물(80% 메탄올 추출물)보다 분획하였을 때 더 항산화 활성이 높아짐을 확인할 수 있었다.
붉나무 수피 80% 메탄올 추출물을 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트 및 부탄올로 순차 분획하여 항산화 활성을 확인한 결과, 항산화 효과가 높은 것으로 나타난 클로로포름분획층으로부터 Fig. 2의 순서에 따라 항산화 활성물질을 분리 하였다.
또한 이들 분리물을 각종 유지에 첨가하여 상업용 항산화제와 그 활성을 비교하였다. 붉나무 수피로 부터 80% 메탄올을 추출용매로 사용하여 얻은 추출물은 높은 항산화 활성과 추출 수율이 높았고 용매 분획시 클로로포름분획물이 돈지와 팜유에서 가장 높은 항산화 활성을 나타내었다. 붉나무 수피에서 항산화 활성을 나타내는 물질로 회분 R18-9-3-2-4-2가 단일물질로 분리되었고 이 물질의 AI는 돈지와 팜유에서 각각 13.
붉나무 수피로 부터 80% 메탄올을 추출용매로 사용하여 얻은 추출물은 높은 항산화 활성과 추출 수율이 높았고 용매 분획시 클로로포름분획물이 돈지와 팜유에서 가장 높은 항산화 활성을 나타내었다. 붉나무 수피에서 항산화 활성을 나타내는 물질로 회분 R18-9-3-2-4-2가 단일물질로 분리되었고 이 물질의 AI는 돈지와 팜유에서 각각 13.01 과 3.06으로 매우 높은 항산화 활성을 나타내었다. 단일물질로 분리된 R18-9-3-2-4-2는 1H- NMR, bc-NMR에 의해 methyl gallate로 동정 되었으며, 1H- NMR, 13C-NMR 분석 결과 methyl gallate 표준물질과 일치하는 것을 확인하였다.
위의 결과를 종합하면 R18-9-3-242는 galUc acid의 car boxy methyl기가 ester 결합한 methyl gallate로 그 구조가 추정되었다. 'H-NMR(400 MHz, CDQD)에서도 methyl gallate의 singlet 수소 signal(57.
획분 R18-9-3-2-4-2과 methyl gallate(authentic)는 a-, 5-tocopherol, BHA, BHT보다 돈지와 팜유에서 강한 항산화 활성을 나타내었다. 이상의 결과로부터 붉나무 수피 에탄올 추출물의 클로로포름 분획물에서 분리한 물질은 현재 항산화제로 사용 중인 BHA, BHT, tocopherol 보다 그 항산화 효과가 우수하여 새로운 천연 항산화제로서의 가능성이 있다고 평가되었다.
3). 자료를 분석한 결과 methyl gallate(authentic)의 peak와 붉나무에서 단일 물질로 분리된 R18-9-3-2-4-2와 peak가 일치함을 알 수 있었으며 R18-9-3-2-4-2는 methyl gallate로 최종 확정되었다. 붉나무 이외에도 부티아꽃(33), 오스베키아 향나무(34), 안개나무(35)에서 항산화 활성을 나타내는 물질로 methyl‘gallate가 분리, 동정되기도 하였다.
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