박피된 절편 연근의 갈변억제를 효과적으로 하기 위한 기초연구로 갈변의 주원인 효소인 polyphenol oxidase(PPO)를 분리, 정제하여 특성을 조사하였다. 박피된 절편 연근을 24시간 동안 $4^{\circ}C$에 방치하여 PPO 활성을 증가시켜 조효소액을 제조하였으며 PPO 조효소액을 acetone으로 침전시킨 후 Q-Sepharose anion-exchange column, Phenyl-Sepharose hydrophobicinteraction column의 conventional column과 Mono-Q anion-exchange column, Superdex 75 gel-filtration column의 HPLC column을 이용하여 PPO 활성이 가장 높은 한 개의 PPO isoform LPIII-2를 최종 분리 정제하였다. 분리 정제된 LPIII-2의 분자량을 gel-filtration chromatography를 이용하여 측정한 결과 56kDa이었으며 SDS-PAGE를 실시한 후 silver staining한 결과 LPIII-2의 분자량은 28kDa와 26kDa으로 2개의 band를 형성하는 것으로 보아 heterodimer인 것으로 추정되었다. PPO isoform의 특성 조사를 위하여 Q-Sepharose anion-exchange chromatography를 이용하여 부분분리 정제된 2개의 isoforms(LP-II, LP-III)를 가지고 기질 특이성을 조사한 결과 LP-II의 경우 $5^{\circ}C$와 $30^{\circ}C$ 모두 catechol에 대한 기질 친화력이 높았으며 LP-III의 경우 $5^{\circ}C$와 $30^{\circ}C$ 모두에서 pyrogallol에 기질 친화력이 높았다. 그리고 pH 7에서 최적 pH를 보였으며 열안정성은 $40^{\circ}C$에서 60분간 열처리했을 때 안정하였지만 $60^{\circ}C$에서 40분, $80^{\circ}C$에서 10분간 열처리했을 때 효소가 불활성화되었다. 특이하게도 연근의 PPO는 다른 과채류의 PPO와 반응온도에 따른 특성이 달랐는데 여러 반응온도에서 효소 활성을 측정한 결과 연근 PPO isoform LP-II와 LP-III 모두 $5^{\circ}C$의 반응온도에서 높은 효소활성을 보였으며 온도가 올라갈수록 반응속도가 떨어지는 특성을 보였다.
박피된 절편 연근의 갈변억제를 효과적으로 하기 위한 기초연구로 갈변의 주원인 효소인 polyphenol oxidase(PPO)를 분리, 정제하여 특성을 조사하였다. 박피된 절편 연근을 24시간 동안 $4^{\circ}C$에 방치하여 PPO 활성을 증가시켜 조효소액을 제조하였으며 PPO 조효소액을 acetone으로 침전시킨 후 Q-Sepharose anion-exchange column, Phenyl-Sepharose hydrophobic interaction column의 conventional column과 Mono-Q anion-exchange column, Superdex 75 gel-filtration column의 HPLC column을 이용하여 PPO 활성이 가장 높은 한 개의 PPO isoform LPIII-2를 최종 분리 정제하였다. 분리 정제된 LPIII-2의 분자량을 gel-filtration chromatography를 이용하여 측정한 결과 56kDa이었으며 SDS-PAGE를 실시한 후 silver staining한 결과 LPIII-2의 분자량은 28kDa와 26kDa으로 2개의 band를 형성하는 것으로 보아 heterodimer인 것으로 추정되었다. PPO isoform의 특성 조사를 위하여 Q-Sepharose anion-exchange chromatography를 이용하여 부분분리 정제된 2개의 isoforms(LP-II, LP-III)를 가지고 기질 특이성을 조사한 결과 LP-II의 경우 $5^{\circ}C$와 $30^{\circ}C$ 모두 catechol에 대한 기질 친화력이 높았으며 LP-III의 경우 $5^{\circ}C$와 $30^{\circ}C$ 모두에서 pyrogallol에 기질 친화력이 높았다. 그리고 pH 7에서 최적 pH를 보였으며 열안정성은 $40^{\circ}C$에서 60분간 열처리했을 때 안정하였지만 $60^{\circ}C$에서 40분, $80^{\circ}C$에서 10분간 열처리했을 때 효소가 불활성화되었다. 특이하게도 연근의 PPO는 다른 과채류의 PPO와 반응온도에 따른 특성이 달랐는데 여러 반응온도에서 효소 활성을 측정한 결과 연근 PPO isoform LP-II와 LP-III 모두 $5^{\circ}C$의 반응온도에서 높은 효소활성을 보였으며 온도가 올라갈수록 반응속도가 떨어지는 특성을 보였다.
Polyphenol oxidase isoforms were purified from the lotus roots using 50% acetone precipitation, conventional chromatographies of Q-Sepharose and hydrophobic interaction, and high performance liquid chromatographies of Mono-Q and Superdex 75 gel-filtration. Molecular mass of a purified PPO isoform (L...
Polyphenol oxidase isoforms were purified from the lotus roots using 50% acetone precipitation, conventional chromatographies of Q-Sepharose and hydrophobic interaction, and high performance liquid chromatographies of Mono-Q and Superdex 75 gel-filtration. Molecular mass of a purified PPO isoform (LPIII-2) was determined to be 56 kDa using gel-filtration chromatography. The active form of LPIII-2 appeared to bea heterodimer, as purified LPIII-2 on SDS-PAGE gel showed two bands that were determined to be 28 kDa and 26 kDa. To further characterize PPO, partially purified PPO isoforms (LP-II, LP-III) were obtained from Q-Sepharose anion-exchange chromatography. In substrate specificity, the partially purified PPO isoform LP-II showed a high affinity to catechol, while LP-III showed a high affinity to pyrogallol. The optimum pH of LP-II and LP-III was pH 7.0. Interestingly, the partially purified PPO isoforms showed high activities at low temperatures $(0{\sim}5^{\circ}C)$, and as temperatures rose, the activities decreased. Both PPO isoforms were stable at $40^{\circ}C$ and were inactivated by incubation at $60^{\circ}C$ for 40 min.
Polyphenol oxidase isoforms were purified from the lotus roots using 50% acetone precipitation, conventional chromatographies of Q-Sepharose and hydrophobic interaction, and high performance liquid chromatographies of Mono-Q and Superdex 75 gel-filtration. Molecular mass of a purified PPO isoform (LPIII-2) was determined to be 56 kDa using gel-filtration chromatography. The active form of LPIII-2 appeared to bea heterodimer, as purified LPIII-2 on SDS-PAGE gel showed two bands that were determined to be 28 kDa and 26 kDa. To further characterize PPO, partially purified PPO isoforms (LP-II, LP-III) were obtained from Q-Sepharose anion-exchange chromatography. In substrate specificity, the partially purified PPO isoform LP-II showed a high affinity to catechol, while LP-III showed a high affinity to pyrogallol. The optimum pH of LP-II and LP-III was pH 7.0. Interestingly, the partially purified PPO isoforms showed high activities at low temperatures $(0{\sim}5^{\circ}C)$, and as temperatures rose, the activities decreased. Both PPO isoforms were stable at $40^{\circ}C$ and were inactivated by incubation at $60^{\circ}C$ for 40 min.
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문제 정의
그러나 갈변의 주원인 효소인 PPO에 관하여는 거의 연구가 안되어 있는 상태이다. 본 연구에서는 연근의 효소적 갈변을 효과적으로 제어하기 위하여 PPO를 정제하고 PPO isoforms의 최적 반응온도, pH, 열안정성, 기질특이성을 조사하였다.
제안 방법
몇 가지 기질에 대한 PPO isoforms의 기질특이성을 알아보기 위해 가장 높은 활성을 보였던 5。(2와 일반적으로 과채류 PPO 활성을 측정하는 온도인 30℃에서 각각 Michaelis- Menten 상수(KQ값을 측정하였다. 그 결과 연근의 PPO iso- foms LP-Ⅱ의 경우 5℃와 30℃ 모두 catechol이 가장 기질 친화력이 높았으며 LP-Ⅲ의 경우 5, 30℃ 모두 pyrogallol이 기질 친화력이 높았다.
5 mL씩 채취하였다. Mono-Q chromatography에서 활성을 보이는 부분을 모아 Superdex 75 gel-filtration column(Pharmacia Biotech., Sweden; HR 10/30)에 주입하여 유출속도를 0.5 mL/min로 하여 최종 정제하였다.
PPO isoform의 특성 조사를 위하여 Q-Sepharose anion- exchange chromatography(Fig. 2)로부터 얻은 부분 정제된 2 개의 isoform(LPⅡ, LP-Ⅲ)를 이용하여 특성조사를 하였다. 2 개의 isoform 모두 pH의 변화에 따른 효소활성은 pH 7.
Q-Sepharose anion-exchange chromatography에서 효소활성을 보이는 부분을 모아 Centriprep-10(Amicon Inc., USA; molecular mass cut off, lOkDa)을 이용하여 효소액을 농축한후 3.4 M 황산암모늄 용액과 혼합하여 황산암모늄 농도가 1.2M이 되게 하였다. Phenyl Sepharose 6-fast flow column (Sigma Co, USA; 2.
Superdex 75 gel-filtration chromatography와 SDS-PAGE를이용하여 분리 정제된 PPO isoform의 분자량을 측정 하였다. LPⅢ-2 는 gel-filtration chromatography에서 1개의 peak를 보였으며 분자량은 56kDa인 것으로 나타났다(Fig.
와 Superdex 75 gel-filtration chromatography를 실시하였다. gel-filtration chromatography를 위한 분자량 표준물질로는 bovine serum albumin(66 kDa), carbonic anhydrase (29 kDa), cytochrome C(12.4 kDa), aprotinin(6.5 kDa)을 이용 하여 검정곡선을 작성하였으며 alcohol dehydrogenase( 150 kDa)로 gel-filtration column의 void volume을 결정하였다.
pH 변화에 따른 효소활성 변화를 측정하기 위하여 0.1 MNa-succinate(pH 3.0-6.0), 0.1 M Na-phosphate(pH 6.0-7.5), 0.1 M Tris-HCl(pH 7.5~8.5)을 사용하여 기질용액인 10 mM catechol을 넣어 효소활성을 측정하였다.
효소액을 heating block을 사용하여 20, 40, 60, 80℃로 10, 20, 40, 60분간 가열처리 후 얼음에 넣어 식힌 다음 원심분리시킨 후 효소활성을 측정하였다. 기질특이성을 조사하기위하여 사용된 기질은 monohydroxy phen이로 vanillic acid, dihydroxy pheno] 인 L-3, 4-dihydroxyphenylalanine(L-DOPA), catechol, chlorogenic acid, trihydroxy phenol로 pyrogallol, gallic acid를 0.1, 0.2, 0.5, 1.0 mM의 농도로 제조하여 5℃와 30℃에서 효소활성을 측정하였다.
박피된 절편 연근의 갈변억제를 효과적으로 하기 위한 기초연구로 갈변의 주원인 효소인 polyphenol oxidase(PPO)를 분리, 정제하여 특성을 조사하였다. 박피된 절편 연근을 24시간 동안 4℃에 방치하여 PPO 활성을 증가시켜 조효소액을 제조하였으며 PPO 조효소액을 acetone으로 침전시킨 후 Q-Sepharose anion-exchange column, Phenyl-Sepharose hydrophobic interaction column 의 conventional column 과 Mono-Q anion-exchange column, Superdex 75 gel-filtrationcolumn의 HPLC column을 이용하여 PPO 활성이 가장 높은 한 개의 PPO isoform LPⅢ-2를 최종 분리 정제하였다. 분리 정제된 LPⅢ-2의 분자량을 gel-51tratioii chromatography를 이 용하여 측정한 결과 56kDa이었으며 SDS-PAGE를 실시한 후 silver staining한 결과 LPIIL2의 분자량은 28 kDa와 26 kDa으 로 2개의 band를 형성하는 것으로 보아 heterodimei인 것으 로 추정되었다.
박피된 절편 연근의 갈변억제를 효과적으로 하기 위한 기초연구로 갈변의 주원인 효소인 polyphenol oxidase(PPO)를 분리, 정제하여 특성을 조사하였다. 박피된 절편 연근을 24시간 동안 4℃에 방치하여 PPO 활성을 증가시켜 조효소액을 제조하였으며 PPO 조효소액을 acetone으로 침전시킨 후 Q-Sepharose anion-exchange column, Phenyl-Sepharose hydrophobic interaction column 의 conventional column 과 Mono-Q anion-exchange column, Superdex 75 gel-filtrationcolumn의 HPLC column을 이용하여 PPO 활성이 가장 높은 한 개의 PPO isoform LPⅢ-2를 최종 분리 정제하였다.
반응의 최적온도를 알아보기 위하여 반응온도를 0, 5, 10, 20, 30, 40, 50℃로 하되 기질 용액은 10 mM catechol을 넣어 반응시킨 후 효소활성을 측정하였다.
연근으로부터 20 nN Tris-HCl(pH 8.0)을 이용하여 조효소를 추출하였으며, 조효소액과 동량부피의 acetone을 이용하여 PPO를 침전시켰다. 이 조효소액을 이용하여 Q-Sepharose anion-exchange chromatography를 실시한 결과 효소활성을 보이는 3개의 peak를 얻어 LP-Ⅰ, LP-Ⅱ, LP-Ⅲ라 명명하였다 (Fig.
2). 이중 가장 활성이 높은 LP-Ⅲ peak의 분획을 모아 hydrophobic interaction chromatography를 실시하여 3개의 peak를 얻었으며 그 중 활성이 높은 2개의 peak를 각각 LPⅢ-1, LPⅢ-2라 명명하였다(Fig. 3). 효소활성이 높은 LPⅢ- 2 부분을 모아 투석, 농축의 과정을 거쳐 HPLC상에서 Mono- Q를 실시하였다.
최종 분리정제된 효소의 분자량을 측정하기 위하여 SDS-PAGE(23)와 Superdex 75 gel-filtration chromatography를 실시하였다. gel-filtration chromatography를 위한 분자량 표준물질로는 bovine serum albumin(66 kDa), carbonic anhydrase (29 kDa), cytochrome C(12.
효소액을 heating block을 사용하여 20, 40, 60, 80℃로 10, 20, 40, 60분간 가열처리 후 얼음에 넣어 식힌 다음 원심분리시킨 후 효소활성을 측정하였다. 기질특이성을 조사하기위하여 사용된 기질은 monohydroxy phen이로 vanillic acid, dihydroxy pheno] 인 L-3, 4-dihydroxyphenylalanine(L-DOPA), catechol, chlorogenic acid, trihydroxy phenol로 pyrogallol, gallic acid를 0.
효소활성을 보이는 부분을 모아 20 mM Tris-HCl(pH 8.0) 로 투석시킨 후 농축하여 Mono-Q anion-exchange column (Pharmacia Biotech., Sweden; HR 5/5)을 이용하여 더 정제하였다. 유출속도는 1 mL/min으로 하여 0~0.
3). 효소활성이 높은 LPⅢ- 2 부분을 모아 투석, 농축의 과정을 거쳐 HPLC상에서 Mono- Q를 실시하였다. 효소활성을 보이는 부분을 농축하여 Superdex 75 gel-filtration chromatography를 실시한 결과 1개의 peak를 얻었으며 단백질 peak와 효소활성이 일치한 것으로 나타났다.
대상 데이터
본 연구에 사용된 연근은 전남 목포에서 구입하여 수세, 절단 후 4℃에서 24시간 저장하여 효소적 갈변의 원인 효소인 PPO의 함량을 증가시켜 사용하였다(Fig. 1).
에 따라 증류수로 적절하게 희석한 효소액 800 μL에 dye reagent 200 μL를 넣어 상온에서 15분 동안 정치시킨 후 595nm에서 흡광도를 측정하였다. 표준물질로는 y-globulin을 사용하였다.
이론/모형
단백질은 Bradford 방법(26)에 따라 증류수로 적절하게 희석한 효소액 800 μL에 dye reagent 200 μL를 넣어 상온에서 15분 동안 정치시킨 후 595nm에서 흡광도를 측정하였다. 표준물질로는 y-globulin을 사용하였다.
성능/효과
2)로부터 얻은 부분 정제된 2 개의 isoform(LPⅡ, LP-Ⅲ)를 이용하여 특성조사를 하였다. 2 개의 isoform 모두 pH의 변화에 따른 효소활성은 pH 7.0에서 가장 높았으며 산성이나 알칼리로 갈수록 효소활성이 감소하였다. 최적 pH를 7.
분리 정제된 LPⅢ-2의 분자량을 gel-51tratioii chromatography를 이 용하여 측정한 결과 56kDa이었으며 SDS-PAGE를 실시한 후 silver staining한 결과 LPIIL2의 분자량은 28 kDa와 26 kDa으 로 2개의 band를 형성하는 것으로 보아 heterodimei인 것으 로 추정되었다. PPO isoform의 특성 조사를 위하여 Q- Sepharose anion-exchange chromatography를 이용하여 부분 분리 정제된 2개의 isoforms(LP-Ⅱ, LP-Ⅲ)를 가지고 기질 특 이성을 조사한 결과 LP-Ⅱ의 경우 5℃와 30℃ 모두 catechol 에 대한 기질 친화력이 높았으며 LP-Ⅲ의 경우 5℃와 30℃ 모두에서 pyrogallol에 기질 친화력이 높았다. 그리고 pH 7에 서 최적 pH를 보였으며 열안정성은 40P에서 60분간 열처리했을 때 안정하였지만 60℃에서 40분, 80℃에서 10분간 열처리했을 때 효소가 불활성화되었다.
1은 박피된 연근 절편에서 시간에 따른 PPO 활성의 변화를 측정한 결과이다. PPO 활성이 보관 6시간 이후에 급속 히 증가하여 보관 12시간 이후에는 거의 최고점에 이르는 것을 알 수 있었다. 그러므로 PPO 정제를 위한 조효소는 24시간 보관된 박피 연근 절편으로부터 추출되었다(Fig.
몇 가지 기질에 대한 PPO isoforms의 기질특이성을 알아보기 위해 가장 높은 활성을 보였던 5。(2와 일반적으로 과채류 PPO 활성을 측정하는 온도인 30℃에서 각각 Michaelis- Menten 상수(KQ값을 측정하였다. 그 결과 연근의 PPO iso- foms LP-Ⅱ의 경우 5℃와 30℃ 모두 catechol이 가장 기질 친화력이 높았으며 LP-Ⅲ의 경우 5, 30℃ 모두 pyrogallol이 기질 친화력이 높았다. 그러나 vanillic acid, gallic acid는 기질 친화력이 낮은 것으로 나타났다(Table 1).
PPO isoform의 특성 조사를 위하여 Q- Sepharose anion-exchange chromatography를 이용하여 부분 분리 정제된 2개의 isoforms(LP-Ⅱ, LP-Ⅲ)를 가지고 기질 특 이성을 조사한 결과 LP-Ⅱ의 경우 5℃와 30℃ 모두 catechol 에 대한 기질 친화력이 높았으며 LP-Ⅲ의 경우 5℃와 30℃ 모두에서 pyrogallol에 기질 친화력이 높았다. 그리고 pH 7에 서 최적 pH를 보였으며 열안정성은 40P에서 60분간 열처리했을 때 안정하였지만 60℃에서 40분, 80℃에서 10분간 열처리했을 때 효소가 불활성화되었다. 특이하게도 연근의 PPO 는 다른 과채류의 PPO와 반응온도에 따른 특성이 달랐는데 여러 반응온도에서 효소 활성을 측정한 결과 연근 PPO isoform LP-Ⅱ와 LP-Ⅲ 모두 5℃의 반응온도에서 높은 효소활성을 보였으며 온도가 올라갈수록 반응속도가 떨어지는 특성을 보였다.
반응온도에 따른 효소활성 변화에 있어서 부분 정제된 PPO Lp-Ⅱ LP-Ⅲ 둘다 일반적인 과채류의 PPO 활성을 측정하는 온도인 30℃에서는 오히려 활성이 감소한다는 것을 알 수 있었으며 활성감소는 LP-Ⅱ의 경우가 더 심하였다(Fig. 6). 특이하게 PPO isoform LP-Ⅱ와 LP-Ⅲ는 낮은 온도인 5℃에서 효소활성이 매우 높게 나타났다.
박피된 절편 연근을 24시간 동안 4℃에 방치하여 PPO 활성을 증가시켜 조효소액을 제조하였으며 PPO 조효소액을 acetone으로 침전시킨 후 Q-Sepharose anion-exchange column, Phenyl-Sepharose hydrophobic interaction column 의 conventional column 과 Mono-Q anion-exchange column, Superdex 75 gel-filtrationcolumn의 HPLC column을 이용하여 PPO 활성이 가장 높은 한 개의 PPO isoform LPⅢ-2를 최종 분리 정제하였다. 분리 정제된 LPⅢ-2의 분자량을 gel-51tratioii chromatography를 이 용하여 측정한 결과 56kDa이었으며 SDS-PAGE를 실시한 후 silver staining한 결과 LPIIL2의 분자량은 28 kDa와 26 kDa으 로 2개의 band를 형성하는 것으로 보아 heterodimei인 것으 로 추정되었다. PPO isoform의 특성 조사를 위하여 Q- Sepharose anion-exchange chromatography를 이용하여 부분 분리 정제된 2개의 isoforms(LP-Ⅱ, LP-Ⅲ)를 가지고 기질 특 이성을 조사한 결과 LP-Ⅱ의 경우 5℃와 30℃ 모두 catechol 에 대한 기질 친화력이 높았으며 LP-Ⅲ의 경우 5℃와 30℃ 모두에서 pyrogallol에 기질 친화력이 높았다.
0)을 이용하여 조효소를 추출하였으며, 조효소액과 동량부피의 acetone을 이용하여 PPO를 침전시켰다. 이 조효소액을 이용하여 Q-Sepharose anion-exchange chromatography를 실시한 결과 효소활성을 보이는 3개의 peak를 얻어 LP-Ⅰ, LP-Ⅱ, LP-Ⅲ라 명명하였다 (Fig. 2). 이중 가장 활성이 높은 LP-Ⅲ peak의 분획을 모아 hydrophobic interaction chromatography를 실시하여 3개의 peak를 얻었으며 그 중 활성이 높은 2개의 peak를 각각 LPⅢ-1, LPⅢ-2라 명명하였다(Fig.
0에서 가장 높았으며 산성이나 알칼리로 갈수록 효소활성이 감소하였다. 최적 pH를 7.0로 하여 이보다 pH 1.0이 낮거나 높으면 효소 활성이 약 60%로 감소하였다(Fig. 5). 복숭아(27)와 양송이(28)의 PPO 최적 pH가 중성부근인데 연근도 이와 비슷 하게 최적 pH가 중성부근에 있었다.
6). 특이하게 PPO isoform LP-Ⅱ와 LP-Ⅲ는 낮은 온도인 5℃에서 효소활성이 매우 높게 나타났다. 이 결과로부터 연근 절편을 낮은 온도에 보관하는 것은 갈변을 더욱 촉진시킬 수도 있 다는 것을 알 수 있다.
그리고 pH 7에 서 최적 pH를 보였으며 열안정성은 40P에서 60분간 열처리했을 때 안정하였지만 60℃에서 40분, 80℃에서 10분간 열처리했을 때 효소가 불활성화되었다. 특이하게도 연근의 PPO 는 다른 과채류의 PPO와 반응온도에 따른 특성이 달랐는데 여러 반응온도에서 효소 활성을 측정한 결과 연근 PPO isoform LP-Ⅱ와 LP-Ⅲ 모두 5℃의 반응온도에서 높은 효소활성을 보였으며 온도가 올라갈수록 반응속도가 떨어지는 특성을 보였다.
효소활성이 높은 LPⅢ- 2 부분을 모아 투석, 농축의 과정을 거쳐 HPLC상에서 Mono- Q를 실시하였다. 효소활성을 보이는 부분을 농축하여 Superdex 75 gel-filtration chromatography를 실시한 결과 1개의 peak를 얻었으며 단백질 peak와 효소활성이 일치한 것으로 나타났다.
후속연구
이 결과로부터 연근 절편을 낮은 온도에 보관하는 것은 갈변을 더욱 촉진시킬 수도 있 다는 것을 알 수 있다. 그러나 연근의 PPO isoform이 다른 PPO와 온도에 대한 특성이 왜 이렇게 다른지는 깊이 연구 되어야 할 것이다.
참고문헌 (31)
Kim, Y.-S., Chun, S.-S., Jung, S.-T. and Kim, R.-Y. Effect of lotus root powder on the quality of dough. Korean J. Soc. Food Cookery Sci. 18: 573-578 (2002)
Kim, Y.-S., Jeon, S.-S. and Jung, S.-T. Effect of lotus root powder on the baking quality of wheat bread. Korean J. Soc. Food Cookery Sci. 18: 413-425 (2002)
Park, W.P., Cho, S.H. and Lee, D.S. Screening of antibrowning agents for minimally porcessed vegetable. Korean J. Food Sci. Technol. 30: 278-282 (1998)
Park, S.-Y., Hwang, T.-Y., Kim, J.-H. and Moon, K.-D. Quality changes of minimally processed lotus root (Nelumbo nucifera) with browning inhibitors. Korean J. Postharvest Sci. Technol. 8: 164-168 (2001)
Kim, D.M. Minimal processing technology of fruits and vegetables. Food Sci. Ind. 30: 95-102 (1997)
Kim, D.M. Extension of freshness of minimally processed fruits and vegetable. Korean J. Hort. Sci. Technol. 17: 790-795 (1999)
Jang, J.-S. and Hong, G.-H. The effects of storage temperature and pH on color change in garlic puree. Korean J. Postharvest Sci. Technol. 5: 211-216 (1998)
Choi, S.-T., Chang, K.-S., Lim, B.-S., Lee, C.-S. and Kim, Y.-B. Effect of storage and marketing condition on biochemical property changes of garlic (Allium sativum L.). Korean J. Postharvest Sci. Technol. 5: 111-117 (1998)
Seo, J.H., Hwang, Y.S., Chun, J.P. and Lee, J.-C. Change of phenolic compounds and occurrence of skin browning, and characterization of partially purified polyphenol oxidases in oriental pear fruits. J. Korean Soc. Hort. Sci. 42: 184-188 (2001)
Espm, J.C., Morales, M., Gracin-Ruiz, P.A., Tedela, J. and Garcia-Canovas, F. Improvement of a continuous spectrophotometric method for determining the monophenolase and diphenolase activities of mushroom polyphenol oxidase. J. Agric. Food Chem. 45: 1084-1090 (1997)
Kubo, E., Kinst-Hori, I., Kubo, Y., Yamagiwa, Y., Kamikawa, T. and Haraguchi, H. Molecular design of antibrowning agents. J. Agric. Food Chem. 48: 1393-1399 (2000)
Van Gelder, C.W.G., Flurkey, W.H. and Wichers, H.J. Sequence and structural features of plant and fungal tyrosinases. Phytochemistry 45: 1309-1323 (1997)
Van Geledr, C.W.G., Flurkey, W.H. and Wichers, H.J. Sequence and structural features of plant and fungal tyrosinases. Phytochemistry 45: 1309-1323 (1997)
Espin, J.C., van Leeuwen, J. and Wichers, H.J. Kinetic study of the activation process of a latent mushroom (Agaricus bisporus) tyrosinase by serine proteases. J. Agric. Food Chem. 47: 3509-3517 (1999)
Thipyapong, P. and Steffens, J.C. Tomato polyphenol oxidase. Plant Physiol 115: 409-418 (1997)
Sanchez-Ferrer, A., Laveda, F. and Garcia-Carmona, F. Substratedependent activation of latent leaf polyphenol oxidase by anionic surfactants. J. Agric. Food Chem. 41: 1583-1586 (1993)
Moore, B.M. and Flurkey, W.H. Sodium dodecyl sulfate activation of a plant polyphenol oxidase: Effect of sodium dodecyl sulfate on enzymatic and physical characteristics of purified broad bean polyphenol oxidase. J. BioI. Chem. 265: 4982-4988 (1990)
Burton, S.G. and Duncan, J.R. Activation of mushroom polyphenol oxidase in organic medium by the detergent SDS. Biotechnol. Lett. 17: 627-630 (1995)
Espin, J.C. and Wichers, H.J. Kinetics of activation of latent mushroom (Agaricus bisporus) tyrosinase by benzyl alcohol. J. Agric. Food Chem. 47: 3503-3508 (1999)
Bradford, M.M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal. Biochem. 72: 248-254 (1976)
Pyo, H.-F., Son, D.-Y. and Lee, C. Purification and characterization of polyphenol oxidase from Flammulina velutips. Korean J. Food Sci. Technol. 34: 552-558 (2002)
Kim, D.-Y., Rhee, C.-O. and Kim, Y.-B. Characteristics of polyphenol oxidase from garlic (Allium sativum L.). J. Korean Agric. Chem. Soc. 24: 167-173 (1981)
Kahn, V. Polyphenol oxidase isoenzymes in avocado. Phytochemistry 15: 267-272 (1976)
Ham, K.-S., Kauffmann S., Albersheim, P. and Darvill, A.G. Host-pathogen interactions XXXIX. A soybean pathogenesisrelated protein with $\beta$ -1,3-glucanase activity releases phytoalexin elicitor-active heat-stable fragments from fungal walls. Mol. Plant-Microbe Interactions 4: 545-552 (1991)
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