[논문]김치유래 Pichia속 효모가 생산하는 <tex>$L-galactono-{\\gamma}-lactone\\;oxidase$</tex>의 분리 정제 및 특성

오지영; 한영숙

김치유래 Pichia속 효모가 생산하는 $L-galactono-{\\gamma}-lactone\\;oxidase$의 분리 정제 및 특성
Purification and Characterization of $L-galactono-{\\gamma}-lactone$ Oxidase in Pichia sp. Isolated from Kimchi 원문보기

한국식품과학회지 = Korean journal of food science and technology, v.35 no.6 = no.172, 2003년, pp.1135 - 1142

오지영 ((주)두산 R&D 센터) , 한영숙 (성신여자대학교 식품영양학과)

초록
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본 연구는 김치의 발효 말기에 비타민 C의 증가 현상을 조사하였으며, 이는 김치 발효 후기에 생육하는 효모에 의한 현상으로 미생물인 효모에서 비타민 C 생합성 경로를 밝히기 위해 수행된 것으로 그 결과는 다음과 같았다. 김치의 숙성에 따른 pH와 총 산함량의 변화는 김치가 숙성되면서 pH는 담금 초기 5.29에서 숙성 33일에 pH 3.50으로 감소되었고, 총 산함량은 담금 초기 0.24%에서 숙성 33일에 2.48%로 증가되었으며, 비타민 C의 함량을 측정한 결과 발효 3일째까지 점점 상승하다 감소되었으나, 발효 15일째는 19.58mg%로 초기 함량보다 다소 높게 측정되었다. 김치의 PG 활성은 김치 숙성초기에는 낮았으나, 김치 숙성 10일 이후부터 증가되어 발효 13일에는 15.4unit/mg protein으로 PG활성이 증가하는 경향을 보였다. 김치에서 분리된 효모 중 배양액의 비타민C의 함량이 높게 측정된 효모를 선별하였으며, 동정결과 Pichia onychis, Pichia rabaulenis, Pichia jadinii, Candida humilis로 각각 동정되었다. 분리, 동정된 효모 중 비타민 C생성량이 가장 높았던 Pichia onychis 16-4 균주로부터 비타민 C 합성 조효소액을 추출하였으며, specific activity는 7.26unit/mg protein로 나타났다. 최종 정제 시 효소활성은 4,698unit/mg protein으로 나타나 처음보다 647.10배로 농축되었음을 알 수 있었다. 정제된 효소액의 분자량은 31,000, 39,000, 50,000 KD으로 3개의 subunits를 갖는 것이 확인되었다. 정제된 효소는 $L-galactono-{\gamma}-lactone$를 최적 기질로 사용하였으며 $35^{\circ}C$에서 pH 7.8일때 최적활성을 나타내었다. 본 연구에서 정제된 효소는 산소를 전자수용체로 하는 $L-galactono-{\gamma}-lactone$ oxidase임을 알 수 있었다.

Abstract ▼ AI-Helper

The purification and characteristics of the biosynthesis enzyme of vitamin C from microorganisms related with kimchi fermentation were investigated to define vitamin C biosynthetic pathways in yeast. A yeast strain (Pichia onychis 16-4) which synthesizes vitamin C with galacturonic acid as substrate at high rate was isolated from kimchi. The enzyme $L-galactono-{\gamma}-lactone$ oxidase isolated from the yeast was purified and characterized. The specific activity of the crude enzyme was 7.26 unit/mg protein, which increased to 4,698 unit/mg protein with a chromatography of Sephacryl S-200HR; indicating a 647.1-fold level of purification. The molecular weights of the dissociated enzymes were estimated to be 31,000, 39,000, and 50,000 KD. Among the substrates tested, $L-galactono-{\gamma}-lactone$ was the most effective. The enzyme showed optimum activity ah pH 7.8 and 35c. The purified enzyme uses $O_2$ as the electron acceptor for oxidation of $L-galactono-{\gamma}-lactone$.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

본 연구는 김치의 발효 말기에 비타민 C의 증가 현상을 조사하였으며, 이는 김치 발효 후기에 생육하는 효모에 의한 현상으로 미생물인 효모에서 비타민 C 생합성 경로를 밝히기 위해 수행된 것으로 그 결과는 다음과 같았다. 김치의 숙성에 따른 pH와 총 산함량의 변화는 김치가 숙성되면서 pH 는 담금 초기 5.
본 연구에서는 김치 후반기에 생육이 되는 일부 미생물에 의한 비타민 C 합성 현상을 밝히고자 김치내 비타민 C 함량 증가를 보이는 시기에 분리된 효모로부터 효소를 분리, 정제하여 그 특성을 조사하였으며, 미생물에서 비타민 C의 합성경로를 밝히는 기초자료로 제시하고자 하였다.

제안 방법

pH 특이성: 효모에서 분리한 효소활성에 대한 최적 pH와 pH 안정성을 조사하기 위해 pH 3.0, 4.0 5.0, 6.0, 7.0, 7.5, 7.8, 8.0, 8.5, 9.0의 범위에서 potassium phosphate의 상대적인 효소 활성과 안정성을 측정하였다(Table 4).
pH 특이성: 효소의 최적 pH 측정은 potassium phosphate buffer를 사용하였고, pH의 범위를 3.0, 4.0, 5.0, 6.0, 7.0, 7.5, 7.8, 8.0, 8.5, 9.0로 조정하였다. pH에 대한 안정성은 효소액에 각각의 pH의 bufffer를 첨가하여 4℃에서 24시간 방치 후 잔존하는 효소의 활성을 측정하였다(19).
0로 조정하였다. pH에 대한 안정성은 효소액에 각각의 pH의 bufffer를 첨가하여 4℃에서 24시간 방치 후 잔존하는 효소의 활성을 측정하였다(19).
기질 특이성 : 효소의 기질 특이성은 8.4 mM의 D-, L-galactono-y-lactone, D-, L-gulono-y-lactone, D-galacturonic acid, D-glucuronic acid, D-gluconic acid, D-galactose, D-xylose, D-glucose 10종류의 기질을 이용하여 37℃, 20분간 효소액과 반응시켜 활성을 측정하였다. 사용된 buffer는 10 mM potassium phosphate(pH 7.
농죽된 효소액은 SDS(sodium dodecyl sulfate)가 첨가된 polyacrylamide gel electrophoresis(SDS-PAGE) 10% gel 을 사용하여 분자량을 즉정하였으며, 분자량 marker는 precision protein standard(25~250 KD, Bio-Rad, USA)를 사용하였다(31). SDS-FAGE에 의해 band가 확인되지 않는 경우 silver stain(32)으로 band를 확인하였다.
배추는 4등분하여 깨끗이 씻어 4.0-5.0 cm 길이로 세절한 후 배추 88.0%, 파 5.5%, 마늘 3.0%, 고춧가루 2.5%, 생강 1.0% 의 비율로 NaCl 2.0%의 김치를 제조하여 7.0 L 유리병에 담아 2UC에서 발효, 숙성시키면서 시료로 사용하였다.
김치의 숙성 중에 일어나는 비타민 C의 함량 변화에 대한 연구 중 이 등3)은 숙성초기에 일단 감소된 후 약간 증가 경향을 보이다가 점차 감소되어 산패시에는 30% 만이 잔존하였다고 보고하였다. 본 연구에서는 비타민 C의 함량이 숙성 초기의 일시적인 증가와 함께 숙성 후반기인 산패시에 다시 증가되는 경향을 보였는데 초기의 비타민 c 함량의 증가는 김치 재료내 효소에 기인되는 것으로 생각되었으나, 김치가 산패되는 시기에 비타민 C 함량이 다시 한 번 증가되는 것은 김치에 생육하는 미생물이 분비한 효소가 PG의 작용으로 생성된 galacturonic acid를 기질로 이용하여 비타민 C를 합성하는 것으로 생각되어 PG의 활성을 비타민 C 함량의 변화와 함께 살펴보았다. PG의 초기 활성은 1.
분리, 동정된 효모 중 진탕 배양시 가장 높은 비타민 C를 생성한 Pichia onychis 16-4균주로부터 조효소액을 추출하였고, 이 효소액을 4단계의 column을 사용하여 정제를 하였으며, 그 결과는 Table 2에 요약하였다. 조효소액의 specific activity는 7.
산소 소모량: 정제된 효소가 전자수용체로 산소공여와 탈수소 중 어떤 것을 통하여 이용하는지 알아보기 위하여 하나는 반응액 1.0 mL에 0.1 M Tris-HCl(pH 8.2), 0.5 mM NADP+, 200 mM L-galactono-y-lactone과 효소액을 첨가하여 30℃에서 20분간 반응시켜 5분마다 340nm에서 흡광도를 측정하였다(30). 또한, GAGO-20 Kit(Sigma, USA)를 이용하여 효소 반응액 1.
이 배양액을 3,000 ipm에서 10분간 원심분리한 후 상등액에 대해서 비타민 C 생성량을 측정하였다. 액체배양에서 비타민 C 생성량이 높은 균주를 선별하고 Microlog™ system (Biolog, Inc. USA)을 사용하여 동정하였다.
온도 특이성: 효모가 생산하는 비타민 C 합성효소의 반응온도에 따른 활성을 측정하기 위해서 8.4 mM L-galactono-γ-lactone과 10 mM potassium phosphate buffer(pH 7.8)를 사용하여 37℃에서의 활성을 100%로 하여 상대적인 활성을 나타내었다(Table 5).
온도 특이성: 효소의 반응 최적온도를 결정하기 위해서 4,10, 20, 25, 30, 35, 37, 40, 45, 50, 55, 60℃에서 각각 효소활성을 측정하였다(19).
0 mL를 첨가하여 잘 혼합한 후 2500Xg, 5분간 원심분리하였다. 원심분리한 상등액에 대해 520nm에서 흡광도를 측정하여 표준 곡선을 작성하였다. 이때 PG의 1 unit는 효소액 1ml가 2시간 동안 Img의 환원당을 생성할 때로 정의하였다.
2 mM phenazine methosulfate를 첨가한 buffer와 조효소액으로 하였고, 반응액을 37℃에서 20분간 반응시킨 후 100% TCA(trichroloacetic acid) 50 μL로 반응정지를 시 켰다. 이 반응액을 3,000rpm으로 5분간 원심분리하여 단백질을 제거한 후 상등액의 비타민 C 생성량을 측정하였다(3). 효소 1 unit는 효소액 ImL가 20분간 생성한 비타민 C양(mg%)으로 정의하였다.
0% L-galactono-y-lactone을 함유한 10mLW] 액체배지에 옮겨 다시 180rpm으로 3(TC에서 24시간 배양하였다. 이 배양액을 3,000 ipm에서 10분간 원심분리한 후 상등액에 대해서 비타민 C 생성량을 측정하였다. 액체배양에서 비타민 C 생성량이 높은 균주를 선별하고 Microlog™ system (Biolog, Inc.
acid의 함량을 DNS(dinitrosalysilic aicd)에 의한 비색법으로 측정하였다(26). 효소액은 김치의 발효, 숙성 과정 중 PG의 활성을 측정하기 위해 일정 발효 기간의 김치 200 g을 취해 육 등(16)의 방법에 따라 측정하였으며, 0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, l.Omg/mL 농도로 제조된 ot-D-galacturonic acid 표준용액 0.

대상 데이터

김치 재료 중 배주(Brassica pekinensis), 파(Allium fistulo-sum), 마늘(Allium sativum), 생강(ZiHgiber officinale) 및 고춧가루는 2001년 1월 서울 성북구 동선동 소재 재래시장에서 실험 당일 신선한 것을 구입하여 사용하였다.

이론/모형

김치 시료의 PCG활성은 효소의 작용으로 유리되는 galacturonic acid의 함량을 DNS(dinitrosalysilic aicd)에 의한 비색법으로 측정하였다(26). 효소액은 김치의 발효, 숙성 과정 중 PG의 활성을 측정하기 위해 일정 발효 기간의 김치 200 g을 취해 육 등(16)의 방법에 따라 측정하였으며, 0, 0.
김치는 각 발효일에 채취한 시료 1.0mL을 0.85% 멸균 식염수로 단계 희석하여 spreading culture method을 사용하였다. 효모의 분리는 10% tartaric acid 1.
단백질은 Bradford method(26)에 근거하여 Bio-Rad protein assay(Bio-Rad Lab. Technical Bulletin)(28)로 정량하였고, 표준물질로 BSA(bovine serum albumin)을 사용하였다.
총 비타민 C의 함량은 2, 4-DNP(2, 4-dinitrophenylhydrazine) 비색법에 의해 정량하였다(25).

성능/효과

그 외 D-gulono-y-lactone, D-gluconic acid, D-xylose에서는 효소 활성이 측정되지 않았다. 10종의 기질 중 최대 효소활성을 보인 L-galactono-y-lactone의 농도를 2, 4, 6, 8, 8.4, 10, 20mM로 농도를 달리하였을 때 효소의 활성을 측정한 경우 효소의 농도에 따른 효소활성은 기질 농도 8.4 mM 에서 100%로 최고 활성을 보였고 L-galactono-γ-lactone Km값은 4.75 mM이었으며, 10mM과 20mM에서는 기질 저해를 받아 95.9%, 66.8%로 효소활성이 감소되었다. Nishikimi 등(10)이 빵 효모에서 분리, 정제한 L-galactono-Y-lactone oxidase의기질로 L-galactono-y-lactone0] 100%, L-gulono-γ-lac-tonee 32%가 기질로 사용이 된 반면, D-glucono-γ-lactone, D-mannono-γ-lactone 등은 3.
SDS-PAGE를 사용하여 분자량을 확인한 결과, 3개의 sub-units를 갖는 효소로 정제된 효소의 분자량은 31,000, 39, 000, 50, 000 KD으로 확인되었다(Fig. 3). 이는 Bleeg 등⑫이 빵 효모에서 분리, 정제한 효소인 L-galactono-y-lactone oxidase (E.
각각의 기질은 L-galactono-y-lactone을 기준 기질로 하였을 때 이에 대한 상대적인 활성치로 나타내보면 L-galactono-γ-lactone0] 100%, D-galacturonic acid 는 69.87 ±4.3%, L-gulono-γ-lactonee36.88 ± 6.57%를 나타내어 L-galactono-y-lactone이 가장 좋은 효소의 기질로 사용되었음을 알 수 있었다. 그 외 D-gulono-y-lactone, D-gluconic acid, D-xylose에서는 효소 활성이 측정되지 않았다.
효소의 최적 pH는 효소의 안정성 pH 범위보다 높은 것을 확인하였다. 김치 발효 중 pH 3~3.5부근에서 비타민 C가 증가됨에도 불구하고 효소의 활성이 pH 4.0이하에서 측정되지 않은 현상은 첫 번째로 정제된 효소의 pH활성을 측정하는데 사용되는 buffer의 종류, 온도 조건등에 따라 효소의 활성이 달라질 수 있으며(8), 두 번째로 김치의 경우 복잡한 발효 현상이 일어나는 매체로 아미노산, 당류등의 발효부산물들에 의한 buffering현상이 일어나 같은 pH조건이라 하더라도 효소 활성에 차이를 보이는 것으로 생각되었다.
2에 나타내었다. 김치 발효 중 비타민 C의 함량변화의 경우 김치 담금 직후 18.62mg%, 8시간 19.57 mg%, 24시간 19.25 mg%, 발효 2일, 3일째는 각각 19.25, 19.56 mg%로 나타나 담금 직후보다 발효 3일째까지는 약간 상승하였고, 숙성 15일째는 19.58 mg%로 초기 비타민 C 함량보다 다소 높게 측정이 되었다. 이후 김치가 산패되면서 다시 비타민 C 함량의 감소를 나타내어 발효 33일째는 7.
4 unit/mg protein으로 PG활성이 증가하는 경향을 보였다. 김치에서 분리된 효모 중 배양액의 비타민 C의 함량이 높게 측정된 효모를 선별하였으며, 동정 결과 Pichia onychis, Pichia rabaulenis, Pichia jadinii, Candida humilis로 각각 동정되었다. 분리, 동정된 효모 중 비타민 C생성량이 가장 높았던 Pichia onychis 16-4 균주로부터 비타민 C 합성 조효소액을 추출하였으며, specific activity는 7.
김치의 발효, 숙성 기간 중 효모는 총 85균주가 분리되었고, 분리된 효모 중 비타민 C 합성능이 우수한 균주를 선별하였다(Table 1). 진탕 배양한 후 배지에 생성된 비타민 C의 함량은 담금 직후부터 발효 13일까지 분리된 효모에서는 0.
위해 수행된 것으로 그 결과는 다음과 같았다. 김치의 숙성에 따른 pH와 총 산함량의 변화는 김치가 숙성되면서 pH 는 담금 초기 5.29에서 숙성 33일에 pH 3.50으로 감소되었고, 총 산함량은 담금 초기 0.24%에서 숙성 33일에 2.48%로 증가되었으며, 비타민 C의 함량을 측정한 결과 발효 3일째까지 점점 상승하다 감소되었으나, 발효 15일째는 19.58 mg% 로 초기 함량보다 다소 높게 측정되었다. 김치의 PG 활성은 김치 숙성초기에는 낮았으나, 김치 숙성 10일 이후부터 증가되어 발효 13일에는 15.
5가 안정한 범위로 측정되었다. 또한, Tris-HCl buffer의 경우는 pH 7.0에서 pH 8.0까지가 안정한 범위로 본연구에서 측정된 pH의 안정성 범위도 위 결과와 유사한 범위에 속함이 확인되었다.
것이다(10). 본 연구에서 분리, 정제된 효소가 전자수용체로 산소공여와 탈 수소 중 어떤 것을 통하여 이용하는지 알아보기 위해 정제 된 효소액 에 200 mM L-galactono-y-lactone과 0.5 mM NADP+를 첨가하여 흡광도를 측정한 결과(Fig. 4) 반응 시간 동안 340 nm에서는 흡광도의 증가를 볼 수 없었다. 즉, 효소가 전자 수용체로 수소를 활용하지 않는다는 것을 알 수 있었으며 정제 된 효소액에 8.
8일때 최적활성을 나타내었다. 본연구에서 정제된 효소는 산소를 전자수용체로 하는 L-galac-tono-y-lactone oxidase임을 알 수 있었다.
김치에서 분리된 효모 중 배양액의 비타민 C의 함량이 높게 측정된 효모를 선별하였으며, 동정 결과 Pichia onychis, Pichia rabaulenis, Pichia jadinii, Candida humilis로 각각 동정되었다. 분리, 동정된 효모 중 비타민 C생성량이 가장 높았던 Pichia onychis 16-4 균주로부터 비타민 C 합성 조효소액을 추출하였으며, specific activity는 7.26 unit/mg protein로 나타났다. 최종 정제 시 효소활성은 4, 698 unit/mg protein으로 나타나 처음보다 647.
이 결과로부터 김치에서 분리한 효모는 호기성 미생물이며 이 효모가 생산하는 효소는 산소를 전자 수용체로 하여비타민 C와 H₂₀를 생성하는 L-galactono-y-lactone oxidase라고 생각되었다.
정제된 효소액의 분자량은 31,000, 39, 000, 50,000 KD으로 3개의 subunits를 갖는 것이 확인되었다. 정제된 효소는 L-galactono-y-lactone를 최적 기질로 사용하였으며 35P에서 pH 7.8일때 최적활성을 나타내었다. 본연구에서 정제된 효소는 산소를 전자수용체로 하는 L-galac-tono-y-lactone oxidase임을 알 수 있었다.
10배로 농축되었음을 알 수 있었다. 정제된 효소액의 분자량은 31,000, 39, 000, 50,000 KD으로 3개의 subunits를 갖는 것이 확인되었다. 정제된 효소는 L-galactono-y-lactone를 최적 기질로 사용하였으며 35P에서 pH 7.
그 결과는 Table 2에 요약하였다. 조효소액의 specific activity는 7.26 unit/mg protein이었으며 추출된 조효소액을 Sephadex G-25 column으로 추출한 후 농축한 결과 효소 활성은 86.08 unit/mg protein이었고, 이 효소액을 DEAE-Sephadex A-50 column을 통과시 킨 후에는 효소활성이 188.44 unit/mg protein이였으며, Hydroxylapatite column에 통과시킨 효소액의 활성은 256.00 unit/mg protein으로 농축되었다. 이 농축액을 다시 Sephacryl S-200HR column에 통과시킨 효소활성은 4, 698 unit/mg protein으로 나타나 처 음보다 647.
4) 반응 시간 동안 340 nm에서는 흡광도의 증가를 볼 수 없었다. 즉, 효소가 전자 수용체로 수소를 활용하지 않는다는 것을 알 수 있었으며 정제 된 효소액에 8.4 mM L-galactono-y-lactone과 peroxidase reagent를 첨가한 후 시간이 지나면서 반응이 진행 될수록 540nm에서 흡광도가 상승되었으며, 반응 25분 이후에는 흡광도가 다소 감소되는 것을 보여 산소를 전자수용체로 함을 알 수 있었다.
이는 김치의 산패 시에 비타민 C함량이 일시적으로 증가한 시기와 일치되는 것으로 김치내 생육하는 효모가 생산하는 비타민 C 합성 효소가 PG에 의해 생성된 galacturonic acid를 기질로 사용하여 비타민 C를 합성하는데 기인되는 것으로 생각되었다. 진탕 배양 시 높은 비타민 C 함량을 나타낸 효모를 동정한 결과 Pichia, Candida 2종류의 속만 동정되었는데 14-1, 14-3, 15-3, 16-4, 22-3, 33-2균주는 모두 Pichia onychis로 나타났고, 19-6균주는 Pichia rabaulenis, 24-4, 33-1, 33-3, 33-5 균주는 Pichia jadi-nii, 28-2 균주는 Candida humilis로 각각 동정되었다.
1). 진탕 배양한 후 배지에 생성된 비타민 C의 함량은 담금 직후부터 발효 13일까지 분리된 효모에서는 0.76 mg%~2.66mg% 의 값으로 큰 차이 없이 비타민 C의 함량이 낮게 측정되었다. 반면, 발효 14일 이후 증가되어 15일째 분리된 15-3 균주의 경우 9.
58로 크게 감소되었다. 총 산함량의 경우는 담금 직후 0.24%, 숙성 1일에는 0.27%, 숙성 2일에는 0.55%로 나타났고, 김치의 숙성과 함께 증가되어 발효 10일 경에는 1.43%의 값으로 증가되었다. 또한, 총 산함량의 경우 숙성 22일 까지는 지속적으로 증가되다가 숙성 25일부터 숙성 33일 까지 다소 감소되었다.
26 unit/mg protein로 나타났다. 최종 정제 시 효소활성은 4, 698 unit/mg protein으로 나타나 처음보다 647.10배로 농축되었음을 알 수 있었다. 정제된 효소액의 분자량은 31,000, 39, 000, 50,000 KD으로 3개의 subunits를 갖는 것이 확인되었다.
효모에서 분리, 정제된 효소는 potassium phosphate buffer의 경우 pH 3.0~4.0과 pH 90을 제외한 영역에서 효소 활성이 측정되었는데 pH 7.5가 상대적인 효소활성이 83.58 ± 28.45%을 나타내어 기준이 되는 pH 7.8과 효소활성과 가장 유사한 활성을 보였다. 효소의 pH 안정성은 최적 pH의 경향과는 다른 결과를 보여 potassium phosphate buffer의 경우 pH 6.
효소 반응에 대한 온도 범위는 4~60℃로 50℃ 이후에서는 효소 활성이 측정되지 않았고, 35℃ 효소활성과 비교시 25℃의 경우 15.58±7.88%이였으며, 30, 3TC의 경우 각각 36.69 ± 1.92% 와 42.49±8.17%로 나타나 35P가 효소 반응의 최적 온도임을 알 수 있었다. Sugigawa 등(8)에 의하면 Glucono-bacter oxydans DSM 4025균주가 생산하는 L-gulono-y-lac-tone dehydrogenasee 55, 60℃에서는 효소 활성의 각각 50% 와 80%를 상실한다고 하였으며, 최적 온도는 30℃인 것으로 나타나 본 연구의 최적 온도는 위 연구결과 보다 다소 낮게 나타났다.
8과 효소활성과 가장 유사한 활성을 보였다. 효소의 pH 안정성은 최적 pH의 경향과는 다른 결과를 보여 potassium phosphate buffer의 경우 pH 6.0~pH 7.0 범위에서 잔존하는 효소활성이 높게 나타났다. 효소의 최적 pH는 효소의 안정성 pH 범위보다 높은 것을 확인하였다.
0 범위에서 잔존하는 효소활성이 높게 나타났다. 효소의 최적 pH는 효소의 안정성 pH 범위보다 높은 것을 확인하였다. 김치 발효 중 pH 3~3.

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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