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문제 정의
- 한국인 모유중 미생물을 분리 및 동정하여 미생물의 분포를 파악함으로써 영·유아의 건강에 대한 안정성을 확보하고자 하였다. 건강한 한국인 149명의 산모로부터 비유 기간을 고려하여 유즙기에 의한 수집과 손에 의한 수집방법에 따라 모유를 나누어 미생물의 동정을 실시하였다.
- 현재까지 우리나라에서는 모유의 아미노산 조성(Goh et al., 1970), 지방산 및 vitamin(Lee et al., 1997; Lee and Kim, 1994), 무기질(In et al., 1997) 등의 성분에 대한 연구를 수행하였으며, 모유 중의 미생물 분포에 대한 연구는 많이 알려져 있지 않고 있으므로 우리나라 산모의 모유 중에 존재하는 미생물을 실험적 방법으로 증명하기 위하여 유산균의 종류와 균 수, 대장균군의 유무, 일반세균의 종류와 균수 등을 시험하여 보고한다.
가설 설정
- 2) Values are mean±SD.
제안 방법
- 하였다. 건강한 한국인 149명의 산모로부터 비유 기간을 고려하여 유즙기에 의한 수집과 손에 의한 수집방법에 따라 모유를 나누어 미생물의 동정을 실시하였다.
- 모유 중 일반세균을 분리 및 동정하기 위하여 standard plate agar에 접종하여 배양하고 각 colony의 형태학적 양상에 따라 분리하였으며, Microbial Identification System(MIDI)을 사용하여 세포지방산 조성에 의한 일반미생물을 동정한 결과 Table 3과 같다. 모유 수집 방법에 따른 즉, 손에 의한 수집방법과 유즙기에 의한 수집방법에 따른 일반세균들의 형태학적인 colony 양상은 차이가 없었으며 5가지 형태로 구분할 수 있었다.
- , 1994), 각 시료마다 집락형별로 집락수를 계수하였다. 분리된 유산균중 혐기성 유산균을 분리 및 확인하기 위하여modified BCP broth(yeast extract 2.5g, beef extract 5g, fucose 2g, Tween80 1g, L-cystein 0.1g, bromo purple cresol 0.04g, D.W 1L, pH 6.8)에 접종하여 mineral oil을 첨가하여 혐기적 상태에서 배양하였으며, 배양된 유산균중 bifidobacterium의 확인은 F6PPK 실험(Sneath et al., 1986)을 통하여 확인하였고, 분리된 유산균들의 동정은 API 50CH system(BioMerieux SA, France)과 Bergey's Manual of Systematic Bacteriology(Sneath et al., 1986)에 준하여 생리적 및 생화학적 특성을 시험하여 동정하였다(Harrigan and McCance, 1976).
- 수집된 모유를 십진법에 의해 희석하여 CaCO3 0.5%를 함유하는 BCP agar(Eiken Chemical Co. LTD., Japan)에 평판 배양법으로 37℃에서 48시간 CO2 incubator에서 배양후 투명환 및 노란색을 나타내는 집락을 잠정적으로 유산균 집락으로 판정하여 분리하였으며, 육안 및 현미경 관찰을 통한 크기, 색상, 투명도, 형태 등의 특성에 따라 집락형을 구분하고(So et al., 1994), 각 시료마다 집락형별로 집락수를 계수하였다. 분리된 유산균중 혐기성 유산균을 분리 및 확인하기 위하여modified BCP broth(yeast extract 2.
- 수집된 모유를 십진법에 의해 희석하여 MacConkey agar(Difco, USA)에 평판배양법으로 37℃에서 24시간 배양후 계측하였으며 각각의 집락을 육안 관찰을 통한 크기, 색상, 투명도, 형태 등의 특성에 따라 집락을 구분하여 EMBagar(BBL, USA) 와 Brilliant Green Bile Broth(BBL, USA)를 통하여 확정시험하였다.
- 수집된 모유를 십진법에 의해 희석하여 Standard plate agar(Difco, USA)에 평판배양법으로 37 ℃ 에서 48시간 배양후 각각의 집락을 육안 및 현미경 관찰을 통한 크기, 색상, 투명도, 형태 등의 특성에 따라 집락형을 구분하고, 각 시료마다 형태별로 집락수를 계수하였다. 분리된 일반세균은 Moore 등(1994)과 Kononen 등(1996)에 의한 방법에 준하여 세포 지방산 조성을 비교하여 동정하였다.
- 균체의 지방산 조성 분석은Stanciard plate agar에서 37℃, 48시간 배양한 40~50mg의 균체를 취하여 in NaOH(50% methanol) 1 mL에 현탁한 후 30분간 끓여서 비누화 하였다. 여기에 6N HCl(46% methanol) 2mL를 넣고 80℃에서 10분 동안 methylation 시킨 다음 추출용액(hexane : methyl-tert bytyle ether = 1 : 1) 1.25 mL를 가하여 가볍게 진탕하여 용매층을 회수한 후 여기에 0.3N NaOH 3mL를 첨가하여 5분 동안 염기세척하여 용매층을 회수하고 Hewlett Packard series Ⅱ gas chromatograph model 6890(Microbial ID Inc., USA)을 사용하여 균체지방산을 분석하였으며, separation column은 HP19091B-102를 사용하였다. FAMEs profile은 Microbial Identification System Software package(version 3.
- 유산균의 동정은 BCP agar를 이용하여 콜로니의 형태학적 특성에 따라 6가지 형태로 나누어 36개군의 유산균군을 분리하였다. 그리고 Bergey's Manual 및 API 50CH system을 이용하여 생리적 및 생화학적 동정을 실시한 결과, 총 7개 균종으로 분포하고 있었으며, Lactobacillus brevis 균주가 전체 유산균중 50.
- 산후조리원의 유즙기는 수집전에 끓는물에 의한 가열소독을 하고 있었으며, 손착유의 경우 착유전 위생티슈나 물세척을 하고 착유하고 있었다. 착유된 모유는 멸균된 50 mL conical tube(FALCON Co., USA)에 1회 수집량을 30 mL 이상 수집하고 이를 즉시 냉장 운반하여 일반세균수, 대장균수, 유산균수 및 일반성분을 측정하고 일반세균과 유산균을 순수분리하였다.
대상 데이터
- 이와 같이 영유아들의 장내 유산균은 대부분의 경우 모유로부터 유래되는 유산균이 많을 것이라 생각되어 모유 중 유산균을 분리 동정한 결과는 Table 4 및 5와 같다. BCP agar와 modified BCP broth를 사용하여 모유로부터 분리된 유산균은 수집방법에 따른 colony의 형태학적 양상은 차이가 없었으며, 그 특성에 따라 6가지 형태로 나누어 115명의 산모로부터 36개군의 유산균들을 분리하였다. 분리된 유산균은 modified BCP broth를 사용하여 혐기적 상태에서 배양한 결과 모든 분리유산균이 잘 생육하였다.
- 공시모유는 대전지역에 위치한 산후조리원 두 곳으로부터 약 4개월 동안 149명의 산모로부터 모유를 수집하였으며, 이 중 31명으로부터 손 착유에 의한 모유를 수집하였고 118명으로부터 전동식 펌프를 이용한 기계착유를 통하여 모유를 수집하였다. 모유 수집시 산모들의 일반적인 착유습관에 따른 미생물 오염 정도를 측정하기 위해 산모에게 수집방식 또는 수집 시 위생과 관련된 교육을 하지 않았다.
데이터처리
- 비유기간에 따른 일반성분의 함량 및 수집방법에 따른 모유중의 균수의 통계분석은 MYSTAT statistical analysis programmer 2.0, Korea)을 사용하여 평균, 표준편차 및 Duncan's multiple range test를 이용하여 0.5% 범위 내에서 유의성을 검정하였다.
이론/모형
- , USA)을 사용하여 균체지방산을 분석하였으며, separation column은 HP19091B-102를 사용하였다. FAMEs profile은 Microbial Identification System Software package(version 3.9, Microbial ID, Inc., USA)를 사용하여 동정하였다. 실험에 사용된 gas chromatography의 분석조건은 다음과 같다.
- 집락수를 계수하였다. 분리된 일반세균은 Moore 등(1994)과 Kononen 등(1996)에 의한 방법에 준하여 세포 지방산 조성을 비교하여 동정하였다. 균체의 지방산 조성 분석은Stanciard plate agar에서 37℃, 48시간 배양한 40~50mg의 균체를 취하여 in NaOH(50% methanol) 1 mL에 현탁한 후 30분간 끓여서 비누화 하였다.
성능/효과
- 모유 수집 방법에 따른 즉, 손에 의한 수집방법과 유즙기에 의한 수집방법에 따른 일반세균들의 형태학적인 colony 양상은 차이가 없었으며 5가지 형태로 구분할 수 있었다. 5가지 유형으로 분리한 일반미생물 100여개의균주를 동정을 실시한 결과 총 13개 균종으로 분포하고 있었다. 그 중 Staphylococcus속이 7가지의 아종(subspecies)으로 전체 일반세균의 81%(1.
- 분만 후 4주간 모유의 일반성분은 Table 1과 같다. Table 1에 나타난 결과에 의하면, 총고형분의 함량은 비유 4주 동안에는 10.90~18.20% 범위로 평균 12.88~14.04%로서 비유 기간별 유의적 차이는 보이지 않았으나, 지방함량의 경우 0.70~6.92% 범위로 평균 2.46~3.70%로서 평균함량이 1.5배의 함량 차이를 보이고 있어 산모에 따른 유성분 중 가장 큰 변이를 보이고 있다. 모유의 지방 함량은 모유의 성분 중 가장 변이가 큰 것으로 알려져 있으며, 수유단계, 산모의 영양상태와 식사내용, 하루중의 시간대, 출산횟수 및 계절 등에 따라 영향을 받는 것으로 보고되어 있다(Choi et al.
- Table 2와 같다. Table 2에 나타난 결과에 의하면, 손착유시 일반세균수는 평균 7.83×l03 cfu/mL 인데 비하여, 기계착유시에는 평균 2.33×l04 cfu/mL 로서 손착유시보다 평균 9.80×102~3.06×104 cfu/mL 많이 존재하였으며, 또한 기계착유시 대장균군도 1.08×104 cfu/mL 이상 존재하는 것으로 나타나 손착유시보다 평균 9.36×103~8.57×104 cfu/mL의 대장균군이 더 많이 존재하는 것으로 나타났다. 반면에 유산균수는 평균 8.
- 89×l04 cfu/mL)가 간균으로 분포하고 있었으며 구균으로는 Leuconostoc lactis와 Streptococcus salivarius subsp. thermophilus가 총 14.9% (1.39×l04 cfu/mL)분포하고 있는 것으로 동정되었다.
- 48×l03 cfu/mL)로서 가장 많이 분포하고 있었다. 그 외 Micrococcus 속, Bacillus 속, Providencia속, Pseudomonas속, Yersinia속 및 Acinetobacter이 각각 1종씩 검출되었다.
- 5가지 유형으로 분리한 일반미생물 100여개의균주를 동정을 실시한 결과 총 13개 균종으로 분포하고 있었다. 그 중 Staphylococcus속이 7가지의 아종(subspecies)으로 전체 일반세균의 81%(1.07×l04 cfu/mL)로서 가장 많이 존재하고 있는 것으로 나타났으며, 특히 Staphylococcus hominis 균종이 전체 일반세균중 22%(2.48×l03 cfu/mL)로서 가장 많이 분포하고 있었다. 그 외 Micrococcus 속, Bacillus 속, Providencia속, Pseudomonas속, Yersinia속 및 Acinetobacter이 각각 1종씩 검출되었다.
- 따라 6가지 형태로 나누어 36개군의 유산균군을 분리하였다. 그리고 Bergey's Manual 및 API 50CH system을 이용하여 생리적 및 생화학적 동정을 실시한 결과, 총 7개 균종으로 분포하고 있었으며, Lactobacillus brevis 균주가 전체 유산균중 50.9% (4.72×l04 cfu/mL)로서 가장 많이 존재하고 있는 것으로 나타났다. 그 밖에 Lactobacillus curvatus, Lactobacillus delbrueckii subsp.
- 분리된 유산균은 modified BCP broth를 사용하여 혐기적 상태에서 배양한 결과 모든 분리유산균이 잘 생육하였다. 따라서 분리된 유산균 중 Bifidobacterium 균주의 확인을 위해 F6PPK 시험을 한 결과 모두 음성으로 나타나 모유 유산균중 Bijidobacterium은 분리 및 확인할 수 없었다. 분리된 유산균을 동정하기 위하여Bergey's Manual 및 API system을 사용하여 균체의 생리적 및 생화학적 시험을 실시한 결과, 총 7개 유산균종으로 분포하고 있었으며 Lactobacillus brevis 균주가 전체 유산균중 50.
- Table 3과 같다. 모유 수집 방법에 따른 즉, 손에 의한 수집방법과 유즙기에 의한 수집방법에 따른 일반세균들의 형태학적인 colony 양상은 차이가 없었으며 5가지 형태로 구분할 수 있었다. 5가지 유형으로 분리한 일반미생물 100여개의균주를 동정을 실시한 결과 총 13개 균종으로 분포하고 있었다.
- BCP agar와 modified BCP broth를 사용하여 모유로부터 분리된 유산균은 수집방법에 따른 colony의 형태학적 양상은 차이가 없었으며, 그 특성에 따라 6가지 형태로 나누어 115명의 산모로부터 36개군의 유산균들을 분리하였다. 분리된 유산균은 modified BCP broth를 사용하여 혐기적 상태에서 배양한 결과 모든 분리유산균이 잘 생육하였다. 따라서 분리된 유산균 중 Bifidobacterium 균주의 확인을 위해 F6PPK 시험을 한 결과 모두 음성으로 나타나 모유 유산균중 Bijidobacterium은 분리 및 확인할 수 없었다.
- 따라서 분리된 유산균 중 Bifidobacterium 균주의 확인을 위해 F6PPK 시험을 한 결과 모두 음성으로 나타나 모유 유산균중 Bijidobacterium은 분리 및 확인할 수 없었다. 분리된 유산균을 동정하기 위하여Bergey's Manual 및 API system을 사용하여 균체의 생리적 및 생화학적 시험을 실시한 결과, 총 7개 유산균종으로 분포하고 있었으며 Lactobacillus brevis 균주가 전체 유산균중 50.9%(4.72×l04 cfu/mL)로서 가장 많이 존재하고 있는 것으로 나타났다. 그 다음으로 Lactobacillus curvatus 균주가 25.
- 유즙기로 수집한 경우 일반세균수는 평균 2.33×l04cfu/mL 이고, 손으로 착유시는 평균 7.83×103 cfu/mL로서 유즙기를 이용하여 착유한 경우 평균 9.80×102~3.06×104 cfu/mL 많이 존재하였으며, 대장균군 또한 유즙기를 이용하여 착유할 경우 평균 9.36×l03~8.57×104 cfu/mL 많이 존재하는 것으로 나타났다. 반면에 유산균수는 평균 8.
- 일반세균의 동정은 산모로부터 수집된 모유를 Standard plate count agar를 이용하여 콜로니의 형태학적 특성에 따라 5가지 형태로 나누어 100개군으로 분리하였으며, Microbial Identification System(MIDI)을 이용하여 일반세균군을 동정한 결과, 총 13개 균종으로 분포하고 있었으며, 그 중 Staphylococcus 속이 7가지의 아종으로 전체 일반세균의 81%(1.07×l04 cfu/mL)로서 가장 많이 존재하고 있는 것으로 나타났다. 그 밖에 Micrococcus속, Bacillks속, Providencia속, Pseu domonas속, Yersinia속 및 Acinetobacter속이 각각 1종씩 검출되었다.
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