한우의 생식세포 보존에 관한 연구 I. 한우 정액의 일반성상 및 동결후 생존성에 미치는 영향 Studies on Preservation of Germ Cells in Hanwoo I. Effects of Frozen Thawed Viability and Characteristics in Bovine Semen원문보기
한우의 유전자원을 보존하기 위하여 정액동결 시험을 수행하였으며 고급육계통은 육질에 대한 육종가 상위 10% 이내의 자손에서 선발하였고 다 유계통은 어미의 이유시 체중에 대한 육종가 상위 10%이내의 자손에서 선발하였으며 2개 계통에서 종모우 총 13두를 선발하여 공시하였다. 정액채취는 인공질법으로 실시하였고 의빈대에 수소를 계류하고 채정대상우를 승가시켰으며, 3회 가승가후에 채정하였다. 채정후 10분 이내에 실험실로 옮겨와 검사항목을 조사하고 37$^{\circ}C$에서 1차 희석을 하고 5$^{\circ}C$까지 하강한 후 2차 희석을 하였으며, 액체 질소 5cm 위에서 5분간 평형후 침지하여 동결하였다. 이들 종모우 정액의 일반적 성상에 있어서 채정된 정액량은 1차와 2차를 합하였을 때 평균 채정량이 5.7 ml였고 정자농도는 975${\times}$$10^{6}$개였으며 정액의 색상은 유백색이었고 pH는 6.8이었다. 채취시 생존성은 90.2% 그리고 동결 융해후에는 65.7 %가 생존하였으며 총 6,870스트로우의 동결 정액을 생산하여 보존하였다.
한우의 유전자원을 보존하기 위하여 정액동결 시험을 수행하였으며 고급육계통은 육질에 대한 육종가 상위 10% 이내의 자손에서 선발하였고 다 유계통은 어미의 이유시 체중에 대한 육종가 상위 10%이내의 자손에서 선발하였으며 2개 계통에서 종모우 총 13두를 선발하여 공시하였다. 정액채취는 인공질법으로 실시하였고 의빈대에 수소를 계류하고 채정대상우를 승가시켰으며, 3회 가승가후에 채정하였다. 채정후 10분 이내에 실험실로 옮겨와 검사항목을 조사하고 37$^{\circ}C$에서 1차 희석을 하고 5$^{\circ}C$까지 하강한 후 2차 희석을 하였으며, 액체 질소 5cm 위에서 5분간 평형후 침지하여 동결하였다. 이들 종모우 정액의 일반적 성상에 있어서 채정된 정액량은 1차와 2차를 합하였을 때 평균 채정량이 5.7 ml였고 정자농도는 975${\times}$$10^{6}$개였으며 정액의 색상은 유백색이었고 pH는 6.8이었다. 채취시 생존성은 90.2% 그리고 동결 융해후에는 65.7 %가 생존하였으며 총 6,870스트로우의 동결 정액을 생산하여 보존하였다.
This study was carried out to cryopreserve and to investigate characteristics of semen in Hanwoo. Semen was obtained from bulls selected by Daekwanryeong Branch station. Semen was collected each morning of the experiment, placed in water jacketed tubes at 37$^{\circ}C$, and trans-ported t...
This study was carried out to cryopreserve and to investigate characteristics of semen in Hanwoo. Semen was obtained from bulls selected by Daekwanryeong Branch station. Semen was collected each morning of the experiment, placed in water jacketed tubes at 37$^{\circ}C$, and trans-ported to the research laboratory within 10 minutes. Semen was extended with Egg yolk-glycerol extender to contain 50${\times}$10$^{6}$ sperm/ml. Semen was cooled over a 6h period in water jacketed tubes from about 25 to 5$^{\circ}C$, Egg yolk-glycerol extender was added in one step at 5$^{\circ}C$. Semen was aspirated into 0.5ml straws, which were sealed with powder. Egg yolk-glycerol extender, which is used in Hanwoo sperm frozen and stored, semen from 13 Hanwoo bulls collected, the postthawed percentages of motile sperm were 65.7%. In semen characteristics of Hanwoo bulls, number of bulls volume are 5.7 ml and total cell count are 975${\times}$10$^{6}$ m1 ejaculate.
This study was carried out to cryopreserve and to investigate characteristics of semen in Hanwoo. Semen was obtained from bulls selected by Daekwanryeong Branch station. Semen was collected each morning of the experiment, placed in water jacketed tubes at 37$^{\circ}C$, and trans-ported to the research laboratory within 10 minutes. Semen was extended with Egg yolk-glycerol extender to contain 50${\times}$10$^{6}$ sperm/ml. Semen was cooled over a 6h period in water jacketed tubes from about 25 to 5$^{\circ}C$, Egg yolk-glycerol extender was added in one step at 5$^{\circ}C$. Semen was aspirated into 0.5ml straws, which were sealed with powder. Egg yolk-glycerol extender, which is used in Hanwoo sperm frozen and stored, semen from 13 Hanwoo bulls collected, the postthawed percentages of motile sperm were 65.7%. In semen characteristics of Hanwoo bulls, number of bulls volume are 5.7 ml and total cell count are 975${\times}$10$^{6}$ m1 ejaculate.
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문제 정의
한편 한우와 같은 토종 유전자원의 멸실위험이 지속적으로 증가되는 경향에 놓여 있고 특히 한우 산업에 있어서 사육두수가 크게 감소하여 이를 대체하고자 생우를 수입하여 사육하기 시작하였고, 젖소 암소에 한우정액을 인공수정하는 농가가 늘어나고있으므로 교잡종이 지속적으로 늘어날 것으로 전망된다. 그간 한우의 외형적인 체구와 체중은 크게 증가하였고 이에 따른 정자 생성능력, 정액의 양과 총 정자수 등 일반 성상의 변화를 조사하고 간편하게 정액을 동결하는 기술을 개발하여 이를 유전자원으로써 보존하고자 한다.
제안 방법
5ml 스트로우 내에 2 천 5백만 개의 정자가 적재되도록 하였다. 1차 희석은 원정액과 희석액이 370인 상태에서 동량 희석한 후 개체별로 추가로 조정되었고, 2차 희석은 글리세롤이 14% 함유된 희석액을 이용하여 5°C 냉장실에서 최종희석을 한 후 12시간 평형을 시켰으며, 동결방법은 간이동결로써 액체질소 5cm 위에서 5분간 정치한 후 액체질소에 침지하였다.
또한 고급육형은 육질에 대한 육종가 상위 10% 이내의 자손에서 외모심사 등에 결격사유가 없는 개체 6두를 선발하여 총 13두의 종모우를 시험에 공시하였으며 이들 종모우들은 일일 1시간 정도원 형 틀에서 운동을 실시하고 주 2회 채정하였다.
실험실로 운송한 정액은 1차적으로 정액량을 조사하였고 정액의 색상검사와 pH Test Strips(Sigma P4536, USA)을 이용하여 pH를 측정하였다. 정자의 농도 검사는 멜랑쥬를 이용하여 원정 액을 D W 에 200배 희석한 후 헤모사이토 미터에서 3회 판정검사 결과를 평균하였고, 정자의 운동성은 37°C Warm plate 위의 슬라이드 글라스에서 현미경 검사로 판정하였으며, 정상성은 0.
정액을 채취하기 전에 종모축의 생식기 주위, 의빈대 및 인공질은 소독을 실시하였으며, 의빈대에 수소를 고정시키고 채정 대상 종모우의 성적흥분을 고조시키기 위하여 3회 가승가를 실시하였고, 정액 채취방법은 인공질법을 이용하였으며 인공질 내에는 무독성 수용성 Lubricant(Surgilube, USA)로 내부를 도포하였고 인공질내의 수온은 45 ℃로 조절하였으며 정액 량은 2회 채정 량을 합하여 산출하였고, 종모우 개체당 각각의 인공질을 사용하였으며 정액채취후 37°C 수조에 보온하여 10분 이내 실험실로 운송하였다.
정액의 동결보존액은 Table 1과 같이 glycerol을 7% 첨가한 난황 Tris액을 이용하였으며, 원정액의 정자 농도 검사 결과에 따라 0.5ml 스트로우 내에 2 천 5백만 개의 정자가 적재되도록 하였다. 1차 희석은 원정액과 희석액이 370인 상태에서 동량 희석한 후 개체별로 추가로 조정되었고, 2차 희석은 글리세롤이 14% 함유된 희석액을 이용하여 5°C 냉장실에서 최종희석을 한 후 12시간 평형을 시켰으며, 동결방법은 간이동결로써 액체질소 5cm 위에서 5분간 정치한 후 액체질소에 침지하였다.
정액채취는 인공질법으로 실시하였고 의빈대에 수소를 계류하고 채정대상우를 승가시켰으며, 3회 가승가후에 채정하였다. 채정후 10분 이내에 실험실로 옮겨와 검사항목을 조사하고 37°C에서 1차 희석을 하고 5°C까지 하강한 후 2차 희석을 하였으며, 액체질소 5cm 위에서 5분간 평형후 침지하여 동결하였다.
정자의 농도 검사는 멜랑쥬를 이용하여 원정 액을 D W 에 200배 희석한 후 헤모사이토 미터에서 3회 판정검사 결과를 평균하였고, 정자의 운동성은 37°C Warm plate 위의 슬라이드 글라스에서 현미경 검사로 판정하였으며, 정상성은 0.32M 포도당 용액을 사용하여 희석한 후 400배에서 검경하였다. 정자의 생사염색액은 Eosin Blue 1.
정자의 생사염색 방법은 Slide glass를 alcohol로 깨끗이 닦아 이물질을 제거하고 30, 1의 염색액을 놓고 정액을 한방울 떨어뜨린 후 백금이로 혼합하고 Slide glass위에 도말하였으며 45〜55 °C Warmplate 위에서 건조시킨 후 현미경하에서 검경하였다.
정액채취는 인공질법으로 실시하였고 의빈대에 수소를 계류하고 채정대상우를 승가시켰으며, 3회 가승가후에 채정하였다. 채정후 10분 이내에 실험실로 옮겨와 검사항목을 조사하고 37°C에서 1차 희석을 하고 5°C까지 하강한 후 2차 희석을 하였으며, 액체질소 5cm 위에서 5분간 평형후 침지하여 동결하였다. 이들 종모우 정액의 일반적 성상에 있어서 채정된 정액 량은 1차와 2차를 합하였을 때 평균 채정 량이 5.
대상 데이터
다유계통의 종모우는 7두가 선발되었고 이들 종모우 정액의 색상은 7두 모두 유백색이었고, 정액채취량은 3.0〜6.9ml로 나타났으며 평균 5.31ml였다. 정자수는 723 ><1()6〜1, 354><10%11로 나타났고 평균 950xl()6/ml이었으며 pH는 6.
정액을 채취하고 동결보존하기 위한 종모우 계통 중에서 다유형은 어미의 유량을 측정하거나 또는 어미의 이유시 체중을 기준하여 육종가 상위 10% 이내의 자손에서 성장발육의 충실도 및 외모심사의 결격사유가 없으며 또한 법정 전염병 검진 결과 정상인 개체에서 7두의 종모우를 선발하였다.
8이었다. 채취 시 생존성은 90.2% 그리고 동결 융해후에는 65.7 %가 생존하였으며 총 6, 870스트로우의 동결정액을 생산하여 보존하였다.
한우의 유전자원을 보존하기 위하여 정액동결시험을 수행하였으며 고급육계통은 육질에 대한육종가 상위 10% 이내의 자손에서 선발하였고 다유계통은 어미의 이유시 체중에 대한 육종가 상위 10%이내의 자손에서 선발하였으며 2개 계통에서 종모우 총 13두를 선발하여 공시하였다. 정액채취는 인공질법으로 실시하였고 의빈대에 수소를 계류하고 채정대상우를 승가시켰으며, 3회 가승가후에 채정하였다.
성능/효과
다유계통의 종모우는 7두가 선발되었고 원정액의 생존성은80.5 〜 94.0%로 나타났고 평균 88.5% 였으며, 동결융해후 생존성은 55.8〜73.0%로 개체 간의 내동성의 차이가 많았으며 평균 65.9%가 생존하여 총 3, 527스트로의 다유계통 한우정액을 보존하였다.
품종에 따른 내동성 조사에서는 난황 트리스액을 이용하였을 때 홀스타인에 비해 심멘탈에서 생존성이 더 우수했다고 보고하였다(Thun 등, 2002). 또한 같은 실험에서 동결시 4 °C에서 스트로에 심멘탈정액을 적재한 것에서 생존성이 69%로 가장 높게 나타났고 18〜22 °C 상온에서 홀스타인의 정액을 적재한 것이 57.3%로 다소 떨어지는 성적이 나타났으며, 본 시험과 유사한 조건에서의 성적이 69%였던 것과 비교하여 본 시험의 계통별 평균 생존성인 65.7%와 거의 일치하는 것으로 나타났다.
본 실험에서는 급속동결에 의한 정액 동결 방법으로써 -70°C에서 5분간 평형을 시킨 후 즉시 -196°C까지 하강시키는 것으로 평균 생존성은 65.7%로 나타났고, Chen 등(1993)이 유사한 조건 인분당 -100 °C에서 5분간 평형하고 즉시 -196°C까지 동결시켰을 때 생존성이 70%라고 보고한 것과 비슷한 경향이었다. 한편 Robert 등(2003)은 희석제에 항산화제를 0에서 2.
같다. 원정액의 생존성은 80.5 〜98.0%였으며 평균 90.2 %로 나타났고 동결융해후 생존성은 55.8〜75.2% 로 다양하게 나타났으며 평균 65.7%로써 개 체 간에 차이가 있었으며 개체별 동결정액의 생산량은 304-800 스트로로 모두 6, 870개를 생산하여 동결 보존하였다.
이상의 결과로 미루어 한우 정액의 동결보존시 egg yolk extender# 정액희석제로 사용하였을 때 생존성에 문제가 없을 것으로 생각되며, 동결 방법에 있어서 간이식 급속동결을 하여도 생존성이 저하되지 않고 보존할 수 있을 것으로 사료된다.
4로 다소 높아지는 경향을 보고하였다. 전기자극의 길이와 빈도는 분당 50—60 pulses에서 사정이 원활히 이루어졌으며, 정자농후액에서의 정자 농도는 1차 사정액에서 596xl()6/ml로 나타났고, 2차 사정액에서는 334xl0%ni로 나타났다. 또한 정자농후액에서 전진운동의 활력을 가진 정자의 출현율은 1차 사정액에서 52.
한편 고급육계통의 종모우는 6두가 선발되었으며 원정액의 생존성은 87.4〜98.0%로 차이가 별로 없었고, 평균 92.0%가 생존하였다; 동결융해후 생존성은 56.9 〜75.2%로 개체간의 차이가 다유계통과 유사하게 나타났으며 평균 65.5%가 생존하였고 총 3, 343스트로를 보존하였으며 계통간 원정액의 평균 생존성에서 유의성이 인정되었다(P<0.05).
참고문헌 (14)
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