식중독 원인균인 S. aureus, E. coli O157:H7, S. typhimurium, S. enteritidis, L. monocytogenes, 장티프스 원인균 S. typhi, 패혈증 원인균 V. parahaemolyticus, 세균성 이질 원인균 S. sonnei를 $20^{\circ}C$에서 30분간 $그리존^{TM}$과 접촉시킨 결과 최소 3배 희석액부터 최대 24배 희석액에서 최대 24배 희석액에서 균에 대한 살멸 효과를 나타내었다. $그리존^{TM}$ 3배 희석액을 이용하여 30초, 1분, 5분간 균과 접촉시킨 결과 S. aureus만 제외하고 모두 30초에 100% 살멸하는 효과를 나타내었다. $그리존^{TM}$을 이용하여 사스의 원인체와 동일한 바이러스인 코로나 바이러스에 대한 살바이러스 효과를 본 결과 제품의ㅣ 5배 희석액까지 유효간 살바이러스 효과를 보였다. 사람과 접촉이 많은 애완견 바이러스인 파보바이러스 (CPV), 디스템퍼바이러스 (CDV)에 대하여 시험한 결과 유기물과 경수 등의 악조건에서도 바이러스를 살멸하는 효과를 나타내었다. $그리존^{TM}$을 이용한 회와 냉장육 등에서의 적용 시험결과 미생물 생육이 현저히 저해됨을 알 수 있었다. 체소내의 미생물에 대한 살멸효과 시험에서도 미생물의 수가 현저하게 감소하였고, 특히 대장균의 수가 현저하게 감소하였다. $그리존^{TM}$은 세균, 바이러스의 살멸에 탁원한 효과를 보이며, 음식물에 직접 처리할 시에도 그 안전성과 효능이 입증되었다.
식중독 원인균인 S. aureus, E. coli O157:H7, S. typhimurium, S. enteritidis, L. monocytogenes, 장티프스 원인균 S. typhi, 패혈증 원인균 V. parahaemolyticus, 세균성 이질 원인균 S. sonnei를 $20^{\circ}C$에서 30분간 $그리존^{TM}$과 접촉시킨 결과 최소 3배 희석액부터 최대 24배 희석액에서 최대 24배 희석액에서 균에 대한 살멸 효과를 나타내었다. $그리존^{TM}$ 3배 희석액을 이용하여 30초, 1분, 5분간 균과 접촉시킨 결과 S. aureus만 제외하고 모두 30초에 100% 살멸하는 효과를 나타내었다. $그리존^{TM}$을 이용하여 사스의 원인체와 동일한 바이러스인 코로나 바이러스에 대한 살바이러스 효과를 본 결과 제품의ㅣ 5배 희석액까지 유효간 살바이러스 효과를 보였다. 사람과 접촉이 많은 애완견 바이러스인 파보바이러스 (CPV), 디스템퍼바이러스 (CDV)에 대하여 시험한 결과 유기물과 경수 등의 악조건에서도 바이러스를 살멸하는 효과를 나타내었다. $그리존^{TM}$을 이용한 회와 냉장육 등에서의 적용 시험결과 미생물 생육이 현저히 저해됨을 알 수 있었다. 체소내의 미생물에 대한 살멸효과 시험에서도 미생물의 수가 현저하게 감소하였고, 특히 대장균의 수가 현저하게 감소하였다. $그리존^{TM}$은 세균, 바이러스의 살멸에 탁원한 효과를 보이며, 음식물에 직접 처리할 시에도 그 안전성과 효능이 입증되었다.
Bactericidal effect of $Green-Zone^{(TM)}$ was observed, when Staphylococcus aureus, E. coli O157:H7, Salmonella typhimurium, S. enteritidis, Listeria monocytogenes, the causative bacteria of food poisoning, Vibrio parahaemolyticus, and Shigella sonnei were treated with the diluted soluti...
Bactericidal effect of $Green-Zone^{(TM)}$ was observed, when Staphylococcus aureus, E. coli O157:H7, Salmonella typhimurium, S. enteritidis, Listeria monocytogenes, the causative bacteria of food poisoning, Vibrio parahaemolyticus, and Shigella sonnei were treated with the diluted solution of $Green-Zone^{(TM)}$(33.3%~4.1%) for 30min at $20^{\circ}C$. All the bacteria were killed in 30 sec, when 33.3%-diluted $Green-Zone^{(TM)}$ was applied, except for S. aureus. Coronavirus, the same virus with SARS virus taxonomically, was also lilled with the 20%-diluted $Green-Zone^{(TM)}$. Canine parvovirus and Canine distermper virus were also killed even in the organic matter and hard water when treated with $Green-Zone^{(TM)}$. When applied to food such as raw fish, chilled meat, vegetables, $Green-Zone^{(TM)}$ could also decrease the number of microorganism, expecially for E. Coli. From these results, $Green-Zone^{(TM)}$ is thought to be effective for killing virus and bacteria, and also was proved to be safe when applied directrly to food.
Bactericidal effect of $Green-Zone^{(TM)}$ was observed, when Staphylococcus aureus, E. coli O157:H7, Salmonella typhimurium, S. enteritidis, Listeria monocytogenes, the causative bacteria of food poisoning, Vibrio parahaemolyticus, and Shigella sonnei were treated with the diluted solution of $Green-Zone^{(TM)}$(33.3%~4.1%) for 30min at $20^{\circ}C$. All the bacteria were killed in 30 sec, when 33.3%-diluted $Green-Zone^{(TM)}$ was applied, except for S. aureus. Coronavirus, the same virus with SARS virus taxonomically, was also lilled with the 20%-diluted $Green-Zone^{(TM)}$. Canine parvovirus and Canine distermper virus were also killed even in the organic matter and hard water when treated with $Green-Zone^{(TM)}$. When applied to food such as raw fish, chilled meat, vegetables, $Green-Zone^{(TM)}$ could also decrease the number of microorganism, expecially for E. Coli. From these results, $Green-Zone^{(TM)}$ is thought to be effective for killing virus and bacteria, and also was proved to be safe when applied directrly to food.
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문제 정의
더욱 확산되고 있다. 그러나 살바이러스에 효과적인 제품의 개발에 관한 연구가 미비한 관계로 본 연구에서는 살균 및 살바이러스에도 효과적인 천연 제품을 개발하고자 한다. 천연물질인 키토산, 매실 등을 이용하여 개발한 그린존 TM을 각종 식중독 균 및 전염성 바이러스에 대한 살멸 효과 등을 관찰하였으며, 기존에 사용되고 있는 식품 신선도 보존제 등과 상추 등에 있는 균에 대한 저해 효과를 관찰하였다.
채소의 경우는 땅에서 직접 경작되기 때문에 유해균 감염의 가능성이 더욱 높다. 그린존tm의 채소내 존재하는 미생물의 살균효과를 알아보기 위하여 기존에 식품 신선도 보존제로 사용되고 있는 C 제품과 채소 등의 세척을 목적으로 시판되고 있는 세척제 D 제품을 이용하여 비교 시험을 수행하였다. 물로만 1분 세척한 군을 대조군으로 하고, 물로 5분 세척한 군을 물세척군으로 나누어 시험을 수행하였고, 대장균과 총균수를 관찰하여 Table 4에 나타내었다.
제안 방법
각 식품마다 적당량 시료의 무게를 재어 9배의 멸균 생리식염수와 함께 멸균봉투(WHIRL-PAK, Nasco)에 넣어 스토마커 (Stomacher, Seward)를 이용하여 으깬 후, 필터를 이용하여 액만을 모았다. 이 액을 Nutrient Agar(Merck)에 도말한 후 37℃ 항온기에 2일정도 보관한 후 형성된 colony의 수를 측정하였다.
이렇듯 대부분의 전염병들의 감염경로는 유기물이나 물 등을 매개로 하기 때문에 유기물이나 경수 조건하에서도 살 바이러스효과를 나타내어야만 한다. 개의 소장염, 구토, 설사 등의 원인체인 개파보바이러스(CPV)와 소화기, 신경계에 침입하여 질병을 일으키는 개디스템퍼바이러스(CDV)를 이용하여 유기물, 경수 조건 등에서 시험을 수행하여 Table 3에 나타내었다.
그러나 식품 등의 위생을 위하여 사용될 경우 이러한 접촉시간은 큰 의미가 없기 때문에 그린존TM과 균과의 접촉 시간을 20℃에서 30분으로 하고 각 균에 대한 살균 효과를 관찰하였다. 그린존tm의 살균효과를 보기 위하여 멸균증류수로 3배부터 48배까지 희석하여 시험을 수행하였다.
그린존 원액의 시간에 따른 유해균 사멸 효과를 보기 위하여 30초, 1분, 5분 간격으로 유해균의 생존균수를 측정하여 Fig. 1에 결과를 나타내었다.
그러나 식품 등의 위생을 위하여 사용될 경우 이러한 접촉시간은 큰 의미가 없기 때문에 그린존TM과 균과의 접촉 시간을 20℃에서 30분으로 하고 각 균에 대한 살균 효과를 관찰하였다. 그린존tm의 살균효과를 보기 위하여 멸균증류수로 3배부터 48배까지 희석하여 시험을 수행하였다. 생존균수를 41og 감소(lOkcPcFU/mZ)시켰을 경우를 측정하여 살균력 유무를 판단하였으며, 그 결과를 그람 양성 균과 음성균으로 나누어 Table 1에 나타내었다.
각각의 세균은 혈액배지를 이용하여 37℃에서 24시간 동안 배양하여 단독 colony를 확인한 후 Tryptic Soy Broth(TSB)에서 18시간 배양하여 사용하였다. 그린존과 세균 혼합액을 반응 시킨 후, 반응액 0.1 ml를 TSB 10m/와 혼합, 희석하여 반응을 중지시키고 Plate Count Agar(PCA)를 이용, 생존균수를 측정하였다(Z parahaemoly- &s의 경우는 3% NaCl 첨가).
그린존tm의 채소내 존재하는 미생물의 살균효과를 알아보기 위하여 기존에 식품 신선도 보존제로 사용되고 있는 C 제품과 채소 등의 세척을 목적으로 시판되고 있는 세척제 D 제품을 이용하여 비교 시험을 수행하였다. 물로만 1분 세척한 군을 대조군으로 하고, 물로 5분 세척한 군을 물세척군으로 나누어 시험을 수행하였고, 대장균과 총균수를 관찰하여 Table 4에 나타내었다.
그린존과 바이러스 배양액을 4℃에서 30분간 반응시킨 후 미리 만들어 놓은 96 well plate내의 세포에 감염 시켜 37℃에서 3~4일간 배양시킨다. 배양 후 세포의 감염 정도를 가지고 바이러스의 살멸 효과를 판독하였다.
그린존tm의 살균효과를 보기 위하여 멸균증류수로 3배부터 48배까지 희석하여 시험을 수행하였다. 생존균수를 41og 감소(lOkcPcFU/mZ)시켰을 경우를 측정하여 살균력 유무를 판단하였으며, 그 결과를 그람 양성 균과 음성균으로 나누어 Table 1에 나타내었다.
식품을 그린존 처리군과 비처리군으로 나누어 방치한 후, 각 시간에 식품을 적당량 취하여 미생물 수를 측정하였다. 각 식품마다 적당량 시료의 무게를 재어 9배의 멸균 생리식염수와 함께 멸균봉투(WHIRL-PAK, Nasco)에 넣어 스토마커 (Stomacher, Seward)를 이용하여 으깬 후, 필터를 이용하여 액만을 모았다.
각 식품마다 적당량 시료의 무게를 재어 9배의 멸균 생리식염수와 함께 멸균봉투(WHIRL-PAK, Nasco)에 넣어 스토마커 (Stomacher, Seward)를 이용하여 으깬 후, 필터를 이용하여 액만을 모았다. 이 액을 Nutrient Agar(Merck)에 도말한 후 37℃ 항온기에 2일정도 보관한 후 형성된 colony의 수를 측정하였다. 세균의 저해율은
일반적으로 코로나 바이러스는 소화기 계통의 질병을 일으키나, 사스의 경우 호흡기 질병을 유발한 변종이다. 이에 본 실험에서는 돼지의 호흡기 질병에 병원체인 TGEV를 이용하여 시험을 수행하였다. 세포 및 바이러스의 살멸 효과에 pH가 관여할 수도 있기 때문에 pH를 측정하여 Table 2에 나타내었다.
그러나 살바이러스에 효과적인 제품의 개발에 관한 연구가 미비한 관계로 본 연구에서는 살균 및 살바이러스에도 효과적인 천연 제품을 개발하고자 한다. 천연물질인 키토산, 매실 등을 이용하여 개발한 그린존 TM을 각종 식중독 균 및 전염성 바이러스에 대한 살멸 효과 등을 관찰하였으며, 기존에 사용되고 있는 식품 신선도 보존제 등과 상추 등에 있는 균에 대한 저해 효과를 관찰하였다.
대상 데이터
각 바이러스의 감염을 위해서 CRFK cell(CPV), Vero cell(CDV), ST cell(TGEV)을 각각의 배지에서 배양하여 사용하였다. 그린존과 바이러스 배양액을 4℃에서 30분간 반응시킨 후 미리 만들어 놓은 96 well plate내의 세포에 감염 시켜 37℃에서 3~4일간 배양시킨다.
사스의 병원체는 변종 사스 코로나 바이러스이다. 코로나바이러스는 envelope에 부착하고 있는 크고(약 20nm길이의) 잘 분활된 꽃잎모양의 spike, 혹은 "peplomeF'를 가지고 있으며, RNA를 함유하는 나선상의 nucleocapsid를 지니고 있다.
살균력 시험을 위한 균주로는 주요 식품 위해 미생물인Staphylococcus aureus FRI 913, Escherichia coli O157:H7 ATCC 43894(SLT I(+), SLT 11(+)), Salmonella enterica semva Typhimurium isolate, Salmonella enterica serova Enteritidis ATCC 13076, Listeria monocytogenes ATCC 11285, Vibrio parahaemolyticus ATCC 17803와 Salmonella enterica serova Thphi isolate, Shigella sonnei humanisolate를 사용하였다. 각각의 세균은 혈액배지를 이용하여 37℃에서 24시간 동안 배양하여 단독 colony를 확인한 후 Tryptic Soy Broth(TSB)에서 18시간 배양하여 사용하였다.
키토산 3.5g/L에 매실농축액, 젖산 등을 혼합하여 열을 가해 1차 증류수에 녹인 후 1 Fim 필터를 이용하여 여과한 후시험에 사용하였다.
항바이러스 시험을 위해서 Canine parvovirus C-780916 (CPV), Canine distemper virus Lederle straine(CDV), Transmissible gastroenteritis virus(TGEV)를 사용하였다. 각 바이러스의 감염을 위해서 CRFK cell(CPV), Vero cell(CDV), ST cell(TGEV)을 각각의 배지에서 배양하여 사용하였다.
성능/효과
1% 키토산 농도 시 그람 음성균보다는 그람 양성균에서 더 높은 항균력을 보였다고 한다.3)키토산은 곰팡이, 부패균, 치아 부식균6) 등에서도 항균효과를 나타내었다. 매실은 식중독, 전염병 등의 예방 및 치료를 목적으로 예전부터 사용되어오던 물질이다.
또한 애완견등의 보급화로동물과 직접 접촉하는 사람의 수가 증가한 만큼 동물 유래 바이러스에 대한 살바이러스가 중요한 시점이다. 그린존 TMe 돼지 유래의 바이러스는 물론, 애완견 유래의 홍역(CDV), 파보(CPV)에도 효과적으로 나타났다. 따라서 그린존은 안전하면서 인류의 공중보건 향상을 위하여 충분히 기여할 수 있는 제품으로 사료된다.
그린존tm, 제품 c, 제품 d모두 총균수와 대장균의 수를 억제하는 효과를 내타내었다. 각 군에서의 세균 저해율은 Fig.
소독제 시험방법 등에서 바이러스 TCID50 값이 4이상 줄었을 경우 살바이러스 효과가 있다고 관찰되어진다. 그린존tm의 경우 5배 희석액에서 살 바이러스 효과가 관찰되었고 키토산의 경우는 10, 000 ppm에서 살바이러스 효과가 나타났다. 키토산과 그린존tm에서 살 바이러스 효과가 모두 나타났지만 키토산 단일의 경우 10, 000 ppm에서 나타나던 효과가 그린존의 경우 키토산으로 700 ppm 농도에서 효과가 나타난 것으로 보아 그린존의 매실농축액, 젖산 등이 키토산과 상호 상승작용을 일으켜 효과를 증대시킨 것으로 볼 수 있다.
높은 저해율을 나타내었다. 특히 그린존TM의 경우 다른 제품에 비하여 대장균의 저해율이 무척 뛰어남을 알 수 있었다.
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