감귤나무 가지에서 분리한 검은점무늬병균 Diaporthe citri의 균학적 특성 Characterization of the Causal Fungus of Citrus Melanose, Diaphorthe citri Isolated from Blighted Twigs of Citrus in Jeju원문보기
제주도 감귤원에서 문제가 되고 있는 검은점무늬병의 발병원인을 구명하기 위하여 병원균의 분리동정과 병원성을 조사하였다. 감귤의 마른가지로부터 분리된 병원균은 불완전세대인 Phomopsis citri(완전세대 Diaporthe citri)로 확인되었다. 각 지역 감귤원에서 수집분리한 18개 균주의 분생포자각의 크기는 11.2~614.4${\mu}m$ 범위로 평균 크기는 328.8${\mu}m$였으며 균주별로 크기가 다소 상이하였다. 병포자는 ${\alpha}$포자와 ${\beta}$포자 2종류가 관찰되었으며 ${\alpha}$포자는 무색 단포로 타원형이었고, ${\beta}$포자는 무색 단포로 사상형이며 활처럼 약간 구부러졌고 대개의 경우 한쪽 끝이 휘어 있었다. 크기는 ${\alpha}$포자가 평균 6.7 ${\times}$ 2.3${\mu}m$ 였고, ${\beta}$포자는 22.1 ${\times}$ 1.0${\mu}m$ 였다. 균주별 병원성 검정결과 모든 균주에서 검은점무늬병의 발병이 확인되었으며 균주에 따라 병원성의 차이가 있었다.
제주도 감귤원에서 문제가 되고 있는 검은점무늬병의 발병원인을 구명하기 위하여 병원균의 분리동정과 병원성을 조사하였다. 감귤의 마른가지로부터 분리된 병원균은 불완전세대인 Phomopsis citri(완전세대 Diaporthe citri)로 확인되었다. 각 지역 감귤원에서 수집분리한 18개 균주의 분생포자각의 크기는 11.2~614.4${\mu}m$ 범위로 평균 크기는 328.8${\mu}m$였으며 균주별로 크기가 다소 상이하였다. 병포자는 ${\alpha}$포자와 ${\beta}$포자 2종류가 관찰되었으며 ${\alpha}$포자는 무색 단포로 타원형이었고, ${\beta}$포자는 무색 단포로 사상형이며 활처럼 약간 구부러졌고 대개의 경우 한쪽 끝이 휘어 있었다. 크기는 ${\alpha}$포자가 평균 6.7 ${\times}$ 2.3${\mu}m$ 였고, ${\beta}$포자는 22.1 ${\times}$ 1.0${\mu}m$ 였다. 균주별 병원성 검정결과 모든 균주에서 검은점무늬병의 발병이 확인되었으며 균주에 따라 병원성의 차이가 있었다.
Mycological characteristics of Phomopsis citri isolates obtained from blighted twigs of citrus cultivation areas in Jeju island were all identified as Phomopsis citri known as the anamorph stage of Diaporthe citri. Pycnidia the isolates sized from 112.2 to 614.4${\mu}m$ (av. 328.8${\...
Mycological characteristics of Phomopsis citri isolates obtained from blighted twigs of citrus cultivation areas in Jeju island were all identified as Phomopsis citri known as the anamorph stage of Diaporthe citri. Pycnidia the isolates sized from 112.2 to 614.4${\mu}m$ (av. 328.8${\mu}m$) and shaped conical to lenticulata in black. Two types of phialospores, ${\alpha}$-and ${\beta}$-spores were observed from pycnidia. The ${\alpha}$-spores were hyaline, unicellula, fusiform to ellipsoidal and sized 4.7~8.7 1.9 ${\times}$ 3.5${\mu}m$ (av. 6.7 ${\times}$ 2.3 ${\mu}m$). The ${\beta}$-spores were hyaline, unicellula, filiform, curved and often strongly hooked and sized 13.2~27.1 ${\times}$ 0.8~1.6 ${\mu}m$ (av. 22.1 ${\times}$ 1.0 ${\mu}m$). All isolates grew well and produced abundant pycnidia and spore horns on PDA. In addition, all isolates showed strong pathogenicity to citrus fruit inducing melanose symptoms when artificially inoculated with the pycnidial spores.
Mycological characteristics of Phomopsis citri isolates obtained from blighted twigs of citrus cultivation areas in Jeju island were all identified as Phomopsis citri known as the anamorph stage of Diaporthe citri. Pycnidia the isolates sized from 112.2 to 614.4${\mu}m$ (av. 328.8${\mu}m$) and shaped conical to lenticulata in black. Two types of phialospores, ${\alpha}$-and ${\beta}$-spores were observed from pycnidia. The ${\alpha}$-spores were hyaline, unicellula, fusiform to ellipsoidal and sized 4.7~8.7 1.9 ${\times}$ 3.5${\mu}m$ (av. 6.7 ${\times}$ 2.3 ${\mu}m$). The ${\beta}$-spores were hyaline, unicellula, filiform, curved and often strongly hooked and sized 13.2~27.1 ${\times}$ 0.8~1.6 ${\mu}m$ (av. 22.1 ${\times}$ 1.0 ${\mu}m$). All isolates grew well and produced abundant pycnidia and spore horns on PDA. In addition, all isolates showed strong pathogenicity to citrus fruit inducing melanose symptoms when artificially inoculated with the pycnidial spores.
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문제 정의
따라서 본 연구는 검은점무늬병의 효율적인 방제체계를 수립하고자 각 지역별로 가지마름증상에서 분리한 감귤 검 은점무늬 병 균의 균학적 특성 과 병 원성 을 조사하였다.
제주도 감귤원에서 문제가 되고 있는 검은점무늬병의발병원인을 구명하기 위하여 병원균의 분리동정과 병원성을 조사하였다. 감귤의 마른가지로부터 분리된 병원균은 불완전세대인 Phomopsis cifri(완전세대 Diaporthe citri)로 확인되었다.
제안 방법
3-1.Ocm 정도의 마른 가지를 채취한 후, petri dish에 여과지 3매를 깔고 그 위에 채취한 가지를 올려놓은 다음 살균수를 충분히 공급하고 25土 FC의 항온기에서 3~7일간 습실 처리하였다. 습실처리된 가지에서는 많은 량의 병포자가 누출되어 나왔으며 여기에서 분리된 병원균을 Potato dextros agar(PDA) 배지에 이식하여 18개 균주(Table 1)를 확보한 후 실험에 사용하였다.
습실처리된 가지에서는 많은 량의 병포자가 누출되어 나왔으며 여기에서 분리된 병원균을 Potato dextros agar(PDA) 배지에 이식하여 18개 균주(Table 1)를 확보한 후 실험에 사용하였다. 배양조직에 형성된 분생포자각과 분리한 포자의 형태와 크기를 30개씩 공시하여 현미경을 이용하여 동정하였다.
병원성 검정. 분리한 18균주에 대하여 병원성을 조사하기 위해 배양 균주내 병자각에서 누출되어 나온 병 포자를 200배의 현미경에서 포자수가 시야당 200개 정도가 되도록 멸균수로 희석한 후, 직경 5 min의 여과지를 균주 현탁액에 담구었다. 이 여과지 절편(4매)을 공시 밀감 (10과)의 과정부 3부분에 부착하여 접종한 다음 25±0.
대상 데이터
병원균 분리 및 동정. 1995년 제주도 일원에 걸쳐 41 개 농가의 감귤원에서 직경 0.3-1.Ocm 정도의 마른 가지를 채취한 후, petri dish에 여과지 3매를 깔고 그 위에 채취한 가지를 올려놓은 다음 살균수를 충분히 공급하고 25土 FC의 항온기에서 3~7일간 습실 처리하였다.
Ocm 정도의 마른 가지를 채취한 후, petri dish에 여과지 3매를 깔고 그 위에 채취한 가지를 올려놓은 다음 살균수를 충분히 공급하고 25土 FC의 항온기에서 3~7일간 습실 처리하였다. 습실처리된 가지에서는 많은 량의 병포자가 누출되어 나왔으며 여기에서 분리된 병원균을 Potato dextros agar(PDA) 배지에 이식하여 18개 균주(Table 1)를 확보한 후 실험에 사용하였다. 배양조직에 형성된 분생포자각과 분리한 포자의 형태와 크기를 30개씩 공시하여 현미경을 이용하여 동정하였다.
이론/모형
분리한 18균주에 대하여 병원성을 조사하기 위해 배양 균주내 병자각에서 누출되어 나온 병 포자를 200배의 현미경에서 포자수가 시야당 200개 정도가 되도록 멸균수로 희석한 후, 직경 5 min의 여과지를 균주 현탁액에 담구었다. 이 여과지 절편(4매)을 공시 밀감 (10과)의 과정부 3부분에 부착하여 접종한 다음 25±0.5℃ 의 항온기에서 습실 처리한 후 발병도를 농사시험연구 조사기준(농촌진흥청, 1995)에 따라 조사하였다.
성능/효과
병원균의 분리동정. 4개 지역에서 수집한 가지를 습실 처리한 결과 가지에서 많은 량의 병포자가 누출(Fig. IB)되어 나왔으며 여기에서 분리하여 얻어진 18개 균주의 병포자를 PDA배지에서 배양한 결과 많은 분 생포 자각과 병포자가 형성되었다(Fig. 1A, E). 분생포자각의 크기는 112.
감귤의 마른가지로부터 분리된 병원균은 불완전세대인 Phomopsis cifri(완전세대 Diaporthe citri)로 확인되었다. 각 지역 감귤원에서 수집분리한 18개 균주의 분생포자각의 크기는 112.2-614.4 범위로 평균 크기는 328.8 Mm였으며 균주별로 크기가 다소 상이하였다. 병포자는 a포자와 B포자 2종류가 관찰되었으며 a 포자는 무색 단포로 타원형이었고, B포자는 무색 단포로 사상형이며 활처럼 약간 구부러졌고 대개의 경우 한쪽 끝이 휘어 있었다.
조사하였다. 감귤의 마른가지로부터 분리된 병원균은 불완전세대인 Phomopsis cifri(완전세대 Diaporthe citri)로 확인되었다. 각 지역 감귤원에서 수집분리한 18개 균주의 분생포자각의 크기는 112.
IF). 검은점무늬병 발병과율은 모든 균주에서 40~100%로 나타났는데, Nj-4, Nk-5, Sg-3 균주에서 100%의 발병과율을 보였으며, 발병도는 Cu-10, Pu-1, Su-15 균주에서 낮았고 Nk- 5, Sg-3, Nj-4, Sn-13 균주가 높은 편으로 균주에 따른 병원성의 차이가 인정되었다(Table 4).
균주별 병원성 검정결과 모든 균주에서 검은점무늬병의 발병이 확인되었으며 균주에 따라 병원성의 차이가 있었다.
또한 균주별로 병원성을 알아보기 위하여 균주의 발아력을 확인(Fig. ID)한 후 과실에 접종해 본 결과 모든 균주에서 검은점무늬병 증상이 발현되었다(Fig. IF). 검은점무늬병 발병과율은 모든 균주에서 40~100%로 나타났는데, Nj-4, Nk-5, Sg-3 균주에서 100%의 발병과율을 보였으며, 발병도는 Cu-10, Pu-1, Su-15 균주에서 낮았고 Nk- 5, Sg-3, Nj-4, Sn-13 균주가 높은 편으로 균주에 따른 병원성의 차이가 인정되었다(Table 4).
)Wolf로 보고하였다. 본 시험에서는 감귤나무 마른 가지로부터 균을 분리한 결과 자낭포자는 발견되지 않았고 분생포자각과 병포자만을 분리할 수 있었는데, 이들 병원균의 크기나 형태 그리고 병원성을 조사한 결과 불완전세대인 Phomopsis citri로 확인되었다. 검은점무늬병균의 형태와 크기에 대해서는 연구자에 따라 다소 차이를 보였는데 (篋部, 1938; Fawcett, 1936; 水澤와 橫木, 1929; 田中와 中村, 1950; 大和, 1968) 본 시험에서 분리한 병원균의 크기는 a포자인 경우 4.
병원성 검정. 분리된 병원균을 균주별로 배지에 접종시킨 결과 공시균주 대부분 균사생장이 양호하였는데 그중에서도 Nk-5, Sg-3 균주가 가장 양호한 편이었다. 병자 각 생성은 Pu-2 균주와 Su-15 균주에서 다소 적은 경향이었고, Nk-5, Sg-3, Sc-6 균주에서는 다수의 분 생포 자각이 형성되어 분리 균주별로 차이가 있었다(Table 3).
1A, E). 분생포자각의 크기는 112.2-614.4 nm 범위로 평균 크기는 328.8 jun였으며 균주별로 크기가 다소 상이하였는데 유자에서 분리한 Nj-4 균주의 분생포자각이 398.4 am로써 가장 큰 편이었고 온주에서 분리한 Su-15 균주의 분생포자각이 평균 281.0Rm 로 가장 작았다. 병포자는 a포자와 B포자 2종류가 관찰되었으며 a포자는 무색 단포자로 타원형이었고, 0 포자는 무색 단포자로 사상형이며 활처럼 약간 구부러졌고 대개의 경우 한쪽 끝이 휘어 있었다(Fig.
후속연구
검은점무늬병균은 균주에 따라 병원성에 차이가 있음이 밝혀졌는데(井上와 芹澤, 1969) 본 시험에서도 18개 균주의 병원성을 검토한 결과 균주에 따라 차이가 있음을 확인할 수가 있어 금후 더 많은 균주를 확보하여 유전적 변이와 병원성 등에 대한 연구가 이루어져야 할 것으로 판단되었다.
참고문헌 (18)
安部卓爾. 1938. 溫州みかんのスタ-メラノズについて.日植病報 4: 84-85
Bach, W. J. and Wolf, F.A. 1928. The isolation of the fungus that causes citrus melanose and the pathological atanomy of the host. Jour. Agr. Res. 37: 243-253
백운하, 허만호, 홍관우. 1974. 감귤 병해충 방제실태. 혜성출판사 1-43
Fawcett, H. S. 1911. Stem-end rot of citrus fruits (Phomosis sp.) Florida Agr. Exp. Sta. Bull. 107: 1-23
Fawcett, H. S. and Lea, H. A. 1926. Citrus Disease and Their Control. 1st ed. London, 583pp
Fawcett, H. S. 1936. Diaporthe cirri (Faw) Wolf the perfect stage of a Phomopsis citri and Phomopsis califomia(Abstr.). Phytopathology 22: 928
Floyd, B. F. 1911. Melanose and stem-end rot FloridaAgr. Exp. Sta. Ann. Rept. 73-81
Ployd, B. F. and Stevens, H. E. 1912. Melanoseand stem-end rot. Florida Agr. Exp. Sta. Bull. 111: 1-16
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